ШТАММ ГРИБА ASPERGILLUS ORYZAE - ПРОДУЦЕНТ АМИНОАЦИЛАЗЫ Советский патент 1995 года по МПК C12N9/80 C12N1/14 C12N9/80 C12R1/69 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм плесневого гриба, обладающий свойством продуцировать аминоацилазу, находящую применение в производстве L-аминокислот.

Целью изобретения является штамм гриба, продуцирующий аминоацилазу с более высокой активностью и культивируемый в более короткие сроки.

Штамм гриба Aspergillus oryzae ВКПМ F-335 (N 13) обладает аминоацилазной активностью 25,0 мкм/мл/ч или 8,2 мг аминного азота (мл) 24 ч по метионину при длительности культивирования 3 суток с длительным периодом вегетативного роста.

Штамм выделен из почв Армении в Армянском филиале ИРЕА и хранится в коллекции культур Армянского филиала ИРЕА и в коллекции Музея промышленных микроорганизмов института "ВНИИГенетика" под номером ВКПМ-F-335.

Штамм имеет следующие морфологические и культуральные признаки. Конидиеносцы бесцветные, длинные до 2,5-4 мм в длину и шириной 4-6 мкм до 12-20 мкм под вздутием. Вздутие шаровидное с гладкой оболочкой, покрытое стеригмами по большинству поверхности. Стеригмы одноярусные, удлиненные, цилиндрические, размером 12-15Х3-5 мкм. Конидии в молодом возрасте эллиптические по мере созревания становятся шаровидными с гладкой поверхностью величиной 5-6 мкм. Вегетативный мицелий состоит из разветвленных гиф с перегодками.

На среде Чапека колонии быстрорастущие, достигающие 5-6 см в диаметре на 4-5 сутки роста при 28^оС. Колонии округлые, зональности нет, мицелий белый, пушистый, средней длины. Колонии в агар не врастают, на обратной стороне не окрашены. На 10 сутки инкубации при 28^оС отмечается редкое конидиальное спороношение темно-зеленого цвета у края колонии. Запах отсутствует.

На сусло-агаре отмечается хороший рост на 2-3 сутки при 28^оС с обильным образованием белого, пушистого, гладкого мицелия. Радиальности нет. На 5-6 сутки роста наблюдается слабое высыпание спор темно-зеленого цвета преимущественно по краям колонии. С обратной стороны агар окрашен в слабо-желтый цвет.

Пшеничные отруби. К 60 ч поверхностного культивирования слой пшеничных отрубей высотою 1,0-1,5 см превращается в плотный корж, полностью проросший мицелием.

Штамм обладает выраженной амилолитической активностью, сильно пептонизирует молоко, желатин не разжижает. Хорошо растет на средах с нитратным и аммиачным азотом, однако при возможности выбора предпочитает нитратный. Из углеводов усваивает арабинозу, ксилозу, рибозу, глюкозу, фруктозу, сахарозу, сорбозу, лактозу, маннит, галактозу, трегалозу. Из органических кислот слабо усваивает щавелевую, фумаровую, барбитуровую. Отмечается рост на средах с добавлением глицерина и Твинов (85, 61, 40). Хорошо растет в пределах рН 5,5-7,0, оптимум рН 6,0 в пределах температуры 15-50^оС (оптимальная 28^оС). Рост культуры стимулируется внесением в среду витаминов группы В с исключением рибофлавина, а также добавлением многих естественных субстратов.

Предлагаемый штамм не загрязняет окружающей среды и не является источником профессиональных заболеваний.

Субстратная специфичность аминоацилазы штамма такова, что она расщепляет следующий ряд N-ацетил-L-аминокислот:
N-ацетил-dL-норлейцин
N-ацетил-dL-тирозин
N-ацетил-dL-метионин
N-ацетил-L-триптофан
N-ацетил-L-лизин
N-ацетил-dL-валин
N-ацетин-dL-аланин
N-ацетил-dL-серин
П р и м е р. Культуру Aspergillus oryzae N 13 выращивают на первом этапе в пробирке со скошенной средой сусло-агар следующего состава:пивное сусло крепостью 2-2,5^о. Баллинга и 2% агар-агара. Среду стерилизуют при 0,8 атм в течение 30 мин. Культуру на косяках выращивают 5 суток при 28±1^оС. Данная культура является посевной. На втором этапе культуру выращивают в колбах. В качестве питательной среды используют пшеничные отруби 60% влажности, слой 1,5 см. Среду стерилизуют при 0,8 атм в течение 20 мин. Посев в колбы со средой производят вводом петлей кусочка мицелия с агаровой поверхности.

После культивирования в течение 3 суток при 28±1^оС полученную массу пшеничных отрубей, полностью поросших мицелием, экстрагируют дистиллированной водой (1). Фильтрат экстракта служит ферментным раствором. Активность фильтрата, установленная по тому же методу, что и активность фильтрата прототипа, а именно по количеству деацилированной аминокислоты при помощи нингидриновой реакции, составляет 25,0 мкм/мл/ч по метионину.

Таким образом, предлагаемый штамм позволяет получить ферментный раствор с высокой аминоацилазной активностью 25,0 мкм/мл/ч по метионину вместо 11,0 мкм/мл/ч по прототипу и меньшим периодом культивирования - трое суток вместо четырех.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм, обладающий способностью продуцировать аминоацилазу. Цель изобретения - штамм плесневого гриба, продуцирующий аминоацилазу с более высокой активностью и культивируемый в более короткие сроки. Сущность изобретения заключается в том, что выделен новый штамм плесневого гриба Aspergillus oryzae ВКПМ F-335 из почв Армении. Культуру выращивают на первом этапе в пробирке со скошенной средой сусло-агар следующего состава: пивное сусло крепостью 2 - 2,5° Баллинга и 20% агар-агара. Активность аминоацилазы 25,0 мкм/мл/ч или 8,2 мг аминного азота (мл) 24 ч по метионину.

ШТАММ ГРИБА ASPERGILLUS ORYZAE - ПРОДУЦЕНТ АМИНОАЦИЛАЗЫ.

Штамм гриба Aspergillus oryzae ВКПМ F-335-продуцент аминоацилазы.