Штамм гриба ASpeRGILLUS oRYZae (АнLвURG) сонN - продуцент ксиланазы Советский патент 1991 года по МПК C12N9/42 C12N1/14 

Изобретение относится к биотехнологии и касается высокоактивного .штамма гриба, способного синтезировать ксиланазу и амилазу для его использования в различных отраслях народного хозяйства.

Целью изобретения является выделение более активного штамма гриба Aspergillus oryzae (Ahlburg) Cohn BKM Р- 46Д, продуцента ксиланаз.

Штамм мезофильного гриба А.огу- zae - 46Д ввделен из проб, взятых с поверхности гниющих пней осины и

характеризуется следующими признаками.

Морфологические признаки. Колонии гриба на сусло-агаре в начале белые, затем постепенно становятся бледно- зеленоватыми, с возрастом желтовато- бурыми. Обратная сторона не окрашена. Запах слабый, неопределенный. Колонии растут быстро, достигают диамет-1- ра 45-50 мм через 7 сут при 2Ј°С с вегетативным мицелием, большей частью погруженным и поверхностным воздушным.

00 00

Культуральные признаки. Оптимальной средой для данного микроскопического гриба является сусло-агаровая г среда (7° по Баллингу). Через 5- 6 сут роста при 28° С на сусло-агаровой среде:

конидиальные головки диаметром 150-330 мк с кстадиальными цепочками, расходящимися и рыхло прилегающими,

конидиеносцы берут начало большей частью от глубинного мицелия, неокрашены, длиной 2-2,5 мм, постепенно увеличивающиеся в диаметре снизу

вверх от 4-6 до 12-25 мк со стенками относительно тонкими, шероховатыми,

конечные вздутия овально шаровидные, реже флажковидной формы, со стеригмами, покрывающими всю поверх- ность или верхние три четверти, часто тонкостенные, легко спадающие, диаметром 40-50 мк,

стеригмы обычно однородные 12- 15X 4-5 мк или двурядные, тогда пер- вый ряд 10-12 X 4,5 мк, второй ряд 8-10 хЗ-3,5 мк. Оба варианта встречаются у одного штамма и даже в одной головке,

конидии большей частью шаровидные гладкие, 4-7 мк в диаметре.

Очень молодые конидии грушевидные и эллипсоидные. Старые конидии обычно зеленовато-коричневых тонов:

на мальц-агаре колонии растут более быстро, чем на среде Чапека- Докса, более рыхлые, с поверхностным мицелием, спороношение обильное, в молодой культуре преобладают желтые оттенки с возрастом желтовато-бурые. Обратная сторона колонии слабо окрашена в желтовато-коричневый тон, . 1 на картофельно-глюкозной и карто- фельно-морковной агаризованной среде колонии растут быстрее, чем на среде Чапека-Докса, но менее плотные, паутинистые, почти прозрачные слабо- спорулирующие, бледно окрашенные.

Свет не имеет особого значения. Развитие идет одинаково как в тем- ноте, так и на рассеяном свету. Температура для развития на плотной питательной среде,°С: оптимальная 30- 35, максимальная 40, минимальная 10.

Физиолого-биохимические признаки. Преимущес/гпенно аэроб, мезофил. Оптимальная температура роста на агази рованной среде 30-35°С. Оптимум

Q

5

Q

5

-5

0

5

5

0

рН 4,5-5,0. Желатину разжижает при обильном росте мицелия со .спорообразованием. Молоко сварачивает и пепто- низирует.

Усвоение источников углерода. Использует арабинозу, глюкозу, мано- зу, фруктозу, мальтозу, глицерин. Слабо развивается на лактозе и рамно- зе. Не использует маннит, сорбит, инозит, рафинозу, инсулин, дульцит.

Образование органических кислот. При выращивании гриба на средах, в состав которых входит салицин, араби- ноза, глицерин, глюкоза и фруктоза, образуются органические кислоты.

Пример 1. Для выявления активной ксиланазы А.огуаде -46Д культуру выращивают в колбах Эрленмейера (250-750 мл) на следующей питательной среде, мас.%: NaNOj 0,3, KHZP04 0,2, MgS04 0,05, кукурузный экстракт 1,5, кукурузные кочерыжки 2, водопроводная вода до 1 л. Начальное рН среды 4,5-5,0. Оптимальная температура роста при глубинном культивировании на качалке (200- 220 об/мин) 28-30°С.

Инокуляцию проводят 3-суточной культурой конидий гриба, предварительно выращенного на сусло-агаре, и культивируют в глубинных условиях 2 сут. Полученную культуру используют как расплодку для массового засева из расчета 5% посевного материала на объем среды.

Продолжительность культивирования представлена в таблице и зависит от применяемого источника углерода (2-4 сут).

Лучшим источником углерода для биосинтеза ксиланазы являются пшеничные отруби. Активность ксиланазы в фильтрате культуральной жидкости на данном субстрате равна 350-490 ед/мл после 3-4 сут выращивания. При-фрак- ционировании культурального фильтрата этанолом активность препарата по ксиланазе составляет 60-70 тыс. ед/г, а по амилазе - 900 ед/г. Оптимальная температура гидролиза фермента с субстратом при определении активности 45°С. Оптимальное рН фильтрата культуральной жидкости при осаждении этанолом 4-5, а его концентрация (оптимальная) 65-70%.

Пример 2. Выращивание A. oryzae (Ahlburg.) Cohn-46 проведено на известной питательной среде

следующего состава, мас.%: NaN030,3, КН4Р04 0,2, MgS04 7Hj,0 0,5, солодовые ростки 1,5, вода до 100 мл.

Условия культивирования те же, что описаны в примере 1. Активность ксиланазы определяли по той же методике и в тех же условиях как у известного штамма. При этом ксиланаз- ная активность фильтрата культуральной жидкости на 72 ч культивирования составила 690 ед/мл, а на 96 ч - 730 ед/мл.

10

Формула изобретения

Штамм гриба Aspergillus oryzae Р-46Д - продуцент ксиланазы.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой высокоактивный штамм гриба, синтезирующий ксиланазу. Цель изобретения - выделение более активного штамма гриба Aspergillus oryzae ВКМ Г-46Д - продуцента ксиланаз. Штамм выделен из проб, взятых с поверхности гниющих пней осины. Штамм может быть использован как активный продуцент для получения мультиэнзимного ферментного препарата и использования его в животноводстве для расщепления поли- сахидов одревесневших (лигнннфици- рующих материалов, при производстве пива и различных соков из плодов и ягод, при экстракции из растительного сырья крахмала, белков, жиров,, эфирных масел и других веществ. Активность ксиланаэы в зависимости от источника углерода в культуральной жидкости после 3-4 суточного культивирования составляет 350-490 или 690-730 ед/мп. 1 табл. а $

Продолжительностькультивирования,ч

Активность культурального фильтрата ксилианазы гриба А.огугае-4бД на различных источниках углерода (2%), ед. мл

Пшенич ные отруби

Кукурузная кочерыжка

Подсолнечнаялузга

Древесныеопилки

Пшеничнаясолома

Виноградныевыжимки

Фильтровальнаябумага

250 340 350 490

134 171 230 233

Пшеничнаясолома

Виноградныевыжимки

Фильтровальнаябумага

76

80

137

115

О 54 55 60

О

46

55 51

О 18 23 26