Штамм микроскопического гриба @ @ НРВ-169- продуцент @ -амилазы Советский патент 1985 года по МПК C12N9/30 C12N1/14 C12N15/00 C12R1/69 

Штамм микроскопического гриба Aspergillus oryzae НРБ-169. (коллекция Центрального Музея промышленных микроорганизмов Института ВНИИГенегика, коллекционный номер ЦМПМ F-257) - продуцент б -амилазы.

сл

СХ)

ел

со Изобретение.относится к ферментной отрасли микробиологической промьшшенности и может быть использовано в хлебопекарной, спиртовой, пивоваренной и других отраслях промьшшен ности. Существует ряд штаммов-продуцентов амилазы, образующих комплекс амилолитических ферментов при поверхностном и глубинном культивировании. Это прежде всего грибы из рода AspergillusJ штамм Aspergillus oryzae И-476-76-А, обладающий активностью культуры 400-500 ед/г (АС) по колориметрическому методу (ОСТ 59-3-71). Цель изобретения - получение высокоактивного штамма-продуцента амилазы в условиях глубинного культивирования. Предлагаемый штамм получен в реэультате трех ступенчатого отбора пр использовании мутагенов физической и химической природы. На первом этапе селекции в качестве мутагенов использовали 1%-ный раствор нитрозометилмочевины (НИМ), на втором этапе - 1%-ный НММ в комбинации с УФ-лу чами (доза 25-10 эрг/см), на третьем этапе - УФ-лучи. Исходным микроорганизмом для индуцирования селек ции служил штамм Aspergillus oryzae, В результате индуцированной селекции была выделена новая мутантная форма НРВ-169, активно.синтетизирующая aL-амилазу. Штамм имеет следующие характеристики. 1.Морфология. Мицелий с ветвящимися гифами,разделенными на многоядерные клетки.Ширина клеток мицелия вырьируетсяв пределах 2-6 мк. Конидиеносцы - длинные и короткие, расширяющиеся кверху. Головки конидиеносцев имеют булавовидную форму диаметром 13,5-15,5 мк. Конидии - , блестящие, круглые 2.Культурально-биохимические при 3 наки. Среда сусло-агар. Небольшая колония характеризуется белым пушистым мицелием с ровными краями, диаметр колоний 2-4 см. При росте среда не окрашивается. Шнеральная агаризованная среда Чапека. Пушистые белые колонии с неровными краями. Диаметр колоний 2-3 см. На обратной стороне колонии наблюдается радиальная складчатость. Конидиеносцы с конидиями формируются в большей степени по краю колонии. Картофельный агар. Белая пушистая кол.ония с неровными краями. Диаметр колонии 2-3 см. Складчатость отсутствует. Морковньй агар. Рост очень йнтенсивньй колонии белые, пушистые. На обратной сторот не колонии наблюдается радиальная складчатость. Диаметр колонии 5-7 -см. Синтетическая,агаризованная ередаКолонии мелкие, пушистые, серого цвета. Диаметр колонии 1-1,5 см. Складчатость отсутствует. Рост на молоке. Растет хорошо, молоко пептонизирует. Рост на ломтиках картофеля. Рост очень интенсивный, образует много конидий зеленого цвета. Желатину не разжимает. Ассимилирует маннит, сорбит, декстринь, крахмал, глюкозу, галактозу, арабинозу, ксилозу, рамнозу, лактозу, саяарозу потребляет, при росте происходит подщелачивание среды. , Температурные границы развития Азрег. oryzae НРВ-169: при 20°С рост замедленный, при 30°С рост хороший, при 40С рост слабый, при 50°С рост очень слабый. Отношение к кислороду: аэроб. Пример. 0 -амилазу получают путем вьфащивания штамма Asper. oryzae НРВ-169 при глубинном культивировании на среде следующего состава. Крахмал картофельный или кукурузный5,0 ВВК1.0 КС10,05 KjHPO 0,10 ,45 MgS04 .0,05 ч рН исходной среды5,2 Колбы на 750 мл с готовой питательной средой засевают конидиальной суспензией. Кукурузу выращивают на качалке при 180 об/мин при 30°С в течение 4 сут. Активность ot-амилазы, определяемая по колориметрическому методу (ГОСТ 2.264.4-74), составляет 4055 ед/мп. . Результаты культивирования получе кого мутанта представлены в таблице. Таким образом, в результате 3-х ступеней селекции получили мутант с активностью в 2,,5 раза выше активности исходного штамма. Амилолитическая активность в культуральной опыта жидкости, ед/мл ;- ;i : 2 Примечание. В таблице :представлены средние данные не менее З-х повторностей.