Способ консервации иммобилизованных ферментов Советский патент 1982 года по МПК A61K38/43 C12N11/00 

Изобретение относится к способшл ксжсервации иммобилизованных ферментов, позволяющим избежать существенной потери активности при длительном хранении и транспортировке промьшшенно изготовленных препара-. тов иммобилизованных ферментов. Способ консервации может найти широкое применение при изготовлении препаратов иммобилизованных ферментов для использования их в пищевой, химической и микробиологической промышленности.

Известно, что для длительного хранения белков и ферментов используют лиофильное высушивание, которое в большинстве случаев обеспечивает стопроцентное сохранение активности и нативности препаратов. В случае потерь активности при лиофилизации в раствор фермента перед высушиванием добавляют различные инертные наполнители, растворимые в воде 1.

Лиофильное высушивание иммобилизованных ферментов также широко применяется для получения форм препаратов , выдерживающих длительное хранение, однако часто сопровождается частичной потерей активности.

Наиболее близким к предлагаемому является способ консервации иммобилизованных ферментов путем лиофильного высушивания суспензии иммобилизованного фермента, в частности пепсина, в воде или буфере, который имеет тот недостаток, что в зависимости от использованного для иммобилизации носителя, при высу10шивании теряется от 10 до 90% активности 2 .

Цель изобретения - уменьшение потерь активности фермента при высуши15вании.

Цель достигается тем, что согласно способу консервации иммобилизированных ферментов путем лиофольного вы20сушивания их суспензии в воде или буфере, у суспензии добавляют инертный растворимЛ) наполнитель при соотношении фермент;наполнитель 1:(1-20).

75

В качестве инертного наполнителя используют неорганические соли, например поваренную соль.

В качестве инертного наполнителя используют аминокислоты, например

JO глицин.

В качестве инертного наполнителя используют углеводы, например глюкозу, сахарозу.

В качестве инертного наполнителя используют водораствори у1ые полисахариды, например декстран.

В качестве инертного наполнителя используют полиспирты, например полиэтиленгликоль.

В качестве инертного наполнителя используют водорастворимые синтетические полимеры, например поливинилпирролидон.

Перед высушиванием к суспензии иммобилизованного фермента в воде или буфере добавляют инертный растворимый в воде наполнитель, который предохраняет препарат иммобилизованного фермента от потери активности при лиофильном высушивании и легко может быть удален перед использованием препарата иммобилизованного фермента путем отмывания водой.

Препараты иммобилизованных ферментов сохраняют активность, превышающую в несколько раз (в ряде случаев в 8 раз) активность препаратой подвергнутых лиофильному высушиванию без наполнителя.

Перед последующим использованием фермента наполнитель может быть легко удален отмыва 1ием буфером или центрифугированием.

Пример. 20 мг пепсина свиньи, иммобилизованного на аэросиле, суспендируют в 1 мл воды, содержаще инертный растворимый наполнитель в весовом соотношении к препарату иммобилизованного фермента от 1:1 до 20:1. Смесь -лиофильно высушивают Перед использованием препарат суспендируют в 0,01 М ацетатном буфере, рН 4,5 и удаляют наполнитель путем отмывания буфером на колонке или с помощью центрифугирования. Активность препаратов, определенная по гемоглобину в качестве субстрата, приведена ниже в виде процентного отношения активности лиофильно высушенных препаратов к активности исходного препарата до лиофилизации Без наполнителя9

С глицином в соотношении 10:116 20:125 С глюкозой в соотношении 1:150 10:153 С сахарозой в соотношении 1:144 20:1 .63 .С поливинилпирролидоном (MB 25000) 1:167 10:175 С декстраном . (MB 500000)

. 1:125

С полиэтиленгликолем (МБ 3000) 1:178

С NaCE в соотношении 1:1 21

10:1 31 20:1 35

Пример 2. 20 мг куриного пепсина, иммобилизованного на диатомите, консервируют аналогично иммобилизованному пепсину свиньи.

Активность по гемоглобину лио0 фильно высушенных препаратов, %: Без наполнителя50

С глицином в соотнсяиении 1:160

10:167

5 Пример 3. 20 мгпротосубтилина, иммобилизованного на сфероне АгА 1000, .суспендируют в 1 мл 0,01 М фосфатного буфера, рН 8,0 и консервируют аналогично консервации и;«пиобилизованного пепсина. Активность лиофильно высушенных препаратов по гемоглобину, %:

Без наполнителя80

С глюкозой в соотношении 1:193 С полиэтиленгликолем (MB 3000) 1:1 86 Пример 4. 20 мг протосубтилина, иммобилизованного на энзакриле АА, консервируют аналогично консервации

протосубтилина, иммобилизованного на сфероне. Активность лиофильно высушенных препаратов по гемоглобину, %:

Без наполнителя74

5 с глюкозой в соотношении 1:1100 С полиэтиленгликолем (MB 3000) 1:193

Формула изобретения

1.Способ консервации иммобилизованных ферментов путем лиофильного

высушивания их суспензии в воде или буфере, отличающийся тем, что, с целью уменьшения потери активности фермента при высушивании, к суспензии добавляют инертный растворимый наполнитель при соотношении фермент:наполнитель 1:(1-20).

2.Способ по П.1, отличающий с я тем, что в качестве инертного наполнителя используют неорганические соли, например поваренную

соль.

3.Способ по П.1, отличающийся тем, что в качестве инертного наполнителя используют аминокислоты, например глицин.

4. Способ по П.1, отличающийся тем, что в качестве инертного наполнителя используют углеводы, например глюкозу, сахарозу. 5. Способ по П.1, отличающ и и с я тем, что в качестве инер59432806

тного наполнителя используют водораст- Источники информации,

воринфле полисахариды, например дек-принятые во внимание при экспертизе стран.

6.Способ по п. 1, отличаю- 1. Патент США 3133001,

щ и и с я тем, что в качестве инер-кл. 195-68, опублик. 12.05.64.

THot-o напсшнителя используют поли- 5

спирты, например полиэтиленгликоль. 2, Крылова ГО.И., Козлов Л.В., Ан7.Способ ПОП.1, отличаю-тонов В.К. Гаина Б.С., Датунашвили щ и и с я тем, что в качестве инерт-Е.Н., Павленко Н.М. Иммобилизация ного наполнителя используют водораст-кислых протеиназ. - Виоорганичесворимые синтетические полимеры, ю химия , 1976, вып.2, с.273 например псливинилпирролидон,(прототип).