Способ иммобилизации ферментов Советский патент 1976 года по МПК A61K38/43 

(54) СПОСОБ ИММОБИЛИЗАЦИИ ФЕРМЕНТОВ

и промывают на фильтре 1 н. НСВ, а затем дистиллированной водой до нейтральной реакции. Подготовленный к активации порошок металлического титана переносят в круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой, капельной воронкой и газоотводной трубкой, добавляют 50 мл дистиллированной воды, охлаждают до и к полученной суспензии прикапывают в течение 10 мин 5 мл четыреххлористого титана. Смесь перемешивают: при охлаждении 30 мин, а затем 30 мин при комнатной температуре. Порошок титана отфильтровывают, промывают на стеклянном фильтре дистиллированной водой до нейтральной реакции, высушивают на воздухе и прокаливают при 540°С в течение 3 час. Выход 9 г.

/ Пример 2. Иммобилизация пепсина.

К 9 г активированного сорбента приливают 50 мл 2 %-ного раствора пепсина в 0,1 М ацетатном буфере, рН 4,5, смесь взбалтывают на механической качалке в течение 18 час при 4° С. Порошок титана с иммобилизованным ферментом промывают на фильтре от несвязанного фермента 1 М водным раствором NaCl до исчезновения светопоглощения при 280 нм в промьшных водах и 0,1 М ацетатным буфером (рН 4,5) до отсутствия ионов хлора. Активность полученного препарата иммобилизованного пепсина по гемоглобину составляет 1000 ед/г. Активность препарата полностью сохраняется при лиофильном высушивании.

Пример 3. Иммобилизация протеиназы из Aspergillus oryzae, штамм 251.

К 1 г активированного сорбента приливают 5 мл 1 %-ного раствора протеиназы из Aspergillus oryzae в 0,1 М ацетатном буфере, рН 4,6. Смесь взбалтьшают на механической качалке 1 час при 4° С и 10 час при 20° С, Промьшают препарат аналогично примеру 2. Активность полученного препарата иммобилизованной протеиназы по гемоглобину 200 ед/г.

Пример 4. Иммобилизация протеиназы из Asperg i I lus awamort 78-2.

Kir активированного сорбента приливают 5,мл 1 %-ного раствора протеиназы из Aspergiltus awamorj в 0,1 М ацетатном буфере, рН 4,0. Смесь взбалтывают на механической качалке 1 час при 4° С и 10 час при 20° С Промьшают препарат аналогично примеру 2. Активность полученного препарата иммобилизованной протеиназы 380 ед/г.

Пример 5. Иммобилизация пектиназы из Aspergillus awamori.

Kir активированного сорбента приливают 5 мл 0,25%-ного раствора пектиназы из Aspergillus awamori в 0,1 М ацетатном буфере, рН 5,6. Смесь взбалтывают на механической качалке 2 часа при 4° С и 12 час при 20° С Промьшают препарат аналогично примеру 2. Активность иммобилизованной пектиназы по пектину 4670 ед/г.

Формула изобретения

Способ иммобилизации ферментов на носителе, отличающийся тем, что, с целью улучшения свойств препаратов иммобилизованных ферментов, в качестве носителя используют порошок металлического титана, последовательно обработанньш дымяшей азотной кислотой и четыреххлористым титаном в присутствии воды.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1, Hasselberger F.X. et al., BBRC, 1974, 57,1054.