Способ определения алкалоидов изохинолинового ряда в мачке желтом Советский патент 1982 года по МПК G01N31/08 

(5) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛКЛЛОИДОВ ИЗОХИНОЛИНОВОГО РЯДА В МАЧКЕ

1

Изобретение относится к медицине, в частности к исследованию и анализу, биологически активных природных соединений, применяемых.; в качестве лекарственных средств, а именно к количественному определению алкалоидов .в мачке желтом.

Vy

Известен способ определения алкалоидов изохияолинового ряда путем экстракции их из растительного материала хлороформом с последующей тонкослойной хроматографией экстракта в системе растворителей бензол-метанол, взятых в соотношении 80:20 Г.

Недостаток способа - неселективHOtTb.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемым результатам является способ определения алкало идов ИЗОХИНОЛИНОВОГО ряда в мачке желтом путем экстракции алкалоидов петролейным эф||ром, разделения экстракта методом тонкослойной хроматографии в смеси растворителей хлрроЖЕЛТОМ

форм - метанол - аммиак, взятых в соотношении 22,5-2,5-0,1 с последующим проявлением пластинки реактивом- Драгендорфа и спектоофотометрированием 2 .

Недостатком способа является его неселективность.

Цель изобретения - повышение селективности способа.

Указанная цель достигается тем,

10 что в способе определения алкалоидов ИЗОХИНОЛИНОВОГО ряда в мачке желтом путем экстракции экстрагентом, тонкослойной хроматографии экстракта в смеси органических растворителей с

15 последующим проявлением пластинки и спектрофотометрированием, в качестве экстрагента используют смесь этанила, хлороформа и 2S% аммиака, взя- . тых в соотношении (О,5-1):(1-3):

20 : (0,08-0,64), в качестве смесг, органических растворителей используют смесь бензола, ацетона и метанола, (ВЗЯТЫХ в соотношении 8-,6-9,4:1-3:0,8-1 ,и проявление пластинки ведут в парах иода с последующим опрыскиванием ее раствором тиосульфата натрия. Отличительная особенность способа состоит в том, что в качестве экстра гента используют смесь этанола, хлороформа и 25 -ного аммиака, взятых в соотношении (О ,5-1):(1-3,0): (р,080,64), в качестве смеси органических растворителей используют смесь бензо ла, ацетона и метанола, взятых в соотношении (8,6-9,):(1-3):(0,8-1) и проявление пластинки ведут в парах иода с последующим опрыскиванием ее раствором тиосульфата натрия. Пример. 1,0г (точная навеска) воздушно-сухого измельченного (0,1 мм) растительного материала экст рагируют 25 мл смеси этанола - хлороформа 25 аммиака в соотношении 1:1:0,1 в течение 16 ч при настра ваНИИ. Полученный экстракт отфильтровывают и замеряют его объем. К фильтрату прибавляют 10 мл 10%-ного раствора уксусной кислотьи Из образовавшейся двухфазной системы этанол и хлороформ отгоняют под вакуумом на водяной бане. Полученный горячий водно-кислый раствор разбавляют 10 мл воды и охлаждают После охлаждения кислый раст вор отфильтровывают при отсас|1вании через стеклянный фильтр . Образующийся осадок промывают 5 мл воды. -Водно-кислый фильтрат многократно экстрагируют хлороформом (20 мл х k) при подщелачивании аммиаком (рН 9) до полноты извлечения, которую контролируют по реакции с реактивом Драгендора. Хлороформенные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия и хлороформом отгоняют досуха. Сухой остаток количественно растворяют в 1 мл этанола. Для приготовления пластинок 13 х X 18 см используют 6,0 г силикагеля, 0,3 г гипса и k мл 0,5 и. КОН. Для проведения разделения пластинку делят на k равные полоски. На каждую из трех полосок наносят штрихом 0,1 м этанольного раствора суммы алкалоидов Четвертая полоска служит в качестве ХОЛОСТОГО;; опыта. Хроматографическое разделение проводят восходящим спосо-бом в системе бензол - ацетон - метанол в соотношении 9:2:1. После прохождения растворителя пластинку сушат на воздухе и проявляют в течение не более мин в парах иода. После того, как пятна алкалоидов отмечены, пластинку опрыскивают 10%-ным водным раствором тиосульфата натрия и высушивают на воздухе. Отмеченные зоны силикагеля с алкалоидами согласно их Rft , соскабливают, тщательно растирают на кальке и алкалоиды элюируют 10 мл этанола, насыщенного тиосульфатом натрия, в течение 30 мин при встря хивании. Измеряют оптическую плотност элюатов, полученных после фильтрования через стеклянный фильтр № 4 при отсасывании и доведенных до 10 мл, на СФ-+А при 280 нм - для глауцина, изоболдина и таликмидина, 289 нм для прототипа и норхелидонина, 285 нм для синоакутина и аллокриптопина, 2б5 нм - для коридина и 272 нм для оксоглауцина, хелеритрина и сангвинарина против контроля, в качестве которого используют элюат с контрольной полоски силикагеля, взятый на уровне пятен определяемых алкалоидов. , Содержание алкалоидов в элюатах рас:читывают по калибровочным графикам. В табл. 1 приведено влияние соот:ношений этанола, хлороформа и 25 ного аммиака в экстрагенте на извлечение глауцина из травы мачка желтого. Как видно из табл. 1, наибольшая полнота экстрагирования алкалои{ ов из растительного материала наблюдается при соотношениях этанол - хлороформ - 25 аммиак в следующих пределах (0,5-1):(1-3):(0,08-0,6it) . В табл., 2 приведены значения алкалоидов мачка желтого при разделении их тонкослойной хроматографией. В табл. 3 приведены значения алкалоидов мачка желтого при разделении их тонкослойной хроматографией.

Соотношение 0,5-1 ,08-0,64 этайол - хлороформ - 2S% аммиак

0:Jk:0,25

0,,25

1:3:0,25

1:2:0,25

1:1:0,25

2:1:0,25

3:1:0,25

4:0,5:0,25

4:0:0,25

1:2:0,00

1:2:0,08

1:2:0,16

1:2:0,32

1:2:0,4

1:2:1,38

Таблица 1

Обнаружено глауцина в образце, мг/г

21,93 25,90 25,92 25,94 25,94 24,87 19,84 19,65 19,52 21,86 25,90 25,92 25,90 25,90 17,36

Таблица 2

римечание. I бензол-ацетон-метанол (9:2:1)

III- - (9:2:0,8) (9:2:1,2)

(9:3:i:

.(:1-.V

(9,А:2:1) VII.(8,6:2:1) Формула изобретения Способ определения алкалоидов изо . хинолинового ряда в мачке желтом путем экстракции алкалоидов из растительного материала экстрагеитом, тон кослойной хроматографии экстракта в смеси органических растворителей с последующим проявлением пластинки и спектрофотометрированием, отличающийся тем, что, с целью повышения селективности способа, в качестве экстрагента используют смес этанола, хлороформа и 25%-ного амми(эка, взятых в соотношении (0,5-1): : (1-3) : (О,.08-0,), в качестве смеТаблица 3 си органических растворителей используют смесь бензола, ацетона и мет нола, взятых в соотношении (8,6-9,): : (1-З): (0,8-1), и проявление пластинки ведут в парах иода с последующим опрыскиванием ее раствором тиосульфата натрия. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Хроматография в тонких слоях. Под ред. Э. Шталь, М., Мир, 19б5, с. 280-30. 2.Маслова Г. А.-Методика количественного определения глауцина в траве. армация. 197, № Ц, 68 (прототип).