Способ получения винкристина Советский патент 1977 года по МПК C07D519/04 A61K31/475 A61P35/02 

(54)

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИНКРИСТИНА

1

Изобретение относится к усовериюнствованному способу получения винкристина.

Винкристин находит применение в клинической практике как .химикотерапевтиюское средство против рака, прежде всего для лечения лейкемии в детском возрасте 1 .

Известны способы получения винкристина экстракцией Vinca rosea 1, 2. Из обшей смеси, содержащей приблизительно 70 различных алкалоидов, можно с трудом получить 0,1% винкристина.

Известен также способ получения вннкристина из винбластина, заключающийся в том, что винбластин в резу;гьтате микробиологического окисления в присутствии перекиси водорода превращается в N дезметилнинбластин, который одним из известных способов формилирования превращается в винкристип 3.

Таким образом по 7ишюму способу винкристин П()л чают из винбластина довольно сложным путем в две стадии.

Целью данного изобретения является уменьщение числа стадий при получении винкристина из винбластина и упрощение процесса. Указанная цель дости1-ается за счет того, что винбластин и;ш его соль подвергают окислению с помо1Ц ю хромовой

кислоты или се соли при охлаждении,, полученный продукт экстрагируют из нейтрализованной или подщелоченной реакционной среды, экстракт выпаривают досуха и выделяют целевой продукт. Процесс окисления проводят при температуре от 30° до - 90° С, в органическом растворителе или в смеси растворителей, например ацетон - ледяная уксусная кислота в соотношешт 4:1.

Пример. Юг (0,011 моля) сульфата

винбластина растворяют в 2200 мл ацетона, добавляют 500 мл ледяной уксусной кислоты и охлаждают до -60° С. Одновременно 4,96 г (0,0494 моля) хромовой кислоты растворяют в 1860мл уксусного ангидрида, охлаждают до - 60° С и затем

прикапывают при перемешивании в раствор сульфата винкристина- После 8 - минутного перемешивания прикапьшают 4400 мл концентрированного аммиака, который охлаждался от - 40 до - .50° С, до величины рН 8. Температура раствора во время

нейтрализации не должна превьщлать (+) 50° С. Подщелоченная реакционная смесь смешивается с 10 л воды и экстрагируется хлористым метиленом до отсутствия алкалоида. Фазы хлористого метилена соединяют, образованшзш при нейтрализации и перещедший в органическую фазу ацетат аммония

дважды промывают водой (по 3000 мл). После jToro высушенный раствор хлористого метилена выпаривают лри пониженном давлении досуха. Получают 8,5 г аморфного сырого винкрист}ша, который в качестве примеси содержит еще N - дезметилвинбластин. Аморфный сырой винкристан растворяют в 30 мл бензола и хроматографируют на колонке, которая содержит пронитанную бензолом окись алюминия. Вначале производят элюирование с 1300мл бензола, носле этого с 5500мл смеси бензола-хлороформа (2:1) и, наконец, с 4250 мл смеси бензола-хлороформа (1:1). Собирают фрак1ШИ по 250 мл. Отдельные фракции исследуют методом хроматографии на бумаге или методом тонкослойной хроматографии. Смесь бензола - хлороформа с отношением 2:1 вымывает полученную в качестве побочного продукта окисления примесь N - дезметилвинбластина, а смесь с отношением 1:1 - образованный винкристин. Содержащие идентичные алкалоиды фракции, идентифицированные посредством хроматографии на бумаге или тонкослойной хроматографии, соединяют и выпаривают при пониженном давлении. Таким путем получают 5,9 г аморфного винкристина или 2,7 г аморфного N дезметилвинбластина.

Аморфный N - дезметилвинбластин растворяют в 27 мл безводного :)танола и при помонди 1%-ного ра.створа серной кислоты в этаноле устанавливают величину рН -4, причем, сульфат N - дезметилвинбластина выпадает в кристаллический осадок. Получают 2,5 г сульфата N - дезметилвинбластина, который растворяют в 13 мл метанола. К раствору добавляют 60 мл безводного этанола. Раствор выдерживают один час при комнатной температуре, после чего отфильтровьшают выкристаллизованный сульфат N - дезметилвинбластина.

Выход: 2,2 г (0,0024 моля) сульфата N - дезметилвинбластина (20%).

Из одной части сульфата N дезметил винбластина освобождается основание и идеитифицируется на основании следующих данных: точка плавления: 212-215 °С (Боетиус), а) 0° - 5,8 (с-1, хлороформ).

Образованный при окислении винбластина N дезметилвинбластин и.гш его соль может известным образом формилироваться, причем получается винкристин или его соль.

Полученные 5,9 г аморфного винкристина растворяют в 60 мл безводного этанола и подкисляют раствором серной кислоты в этаноле до величины рН 4, причем сульфат винкристина выпадает в кристаллический осадок. Получают 5,6 г сульфата винкристина. Последний растворяют в 30 мл метанола и к раствору добавляют 120 мп безводного этанола. Раствор выдерживают один час при комнатной температуре и затем отфильтровывают выкристаллизованный сульфат винкристина. Выход: 5,2 г (0,0055 моля) сульфата винкристкнз (507с).

rt 2 -:-(+) 1 1 -- (+) 1 2 (с . вода).

Rf 0,30 (появляется с яркч).- олубой окраской).

Продукт индентифицнруется но инфракрасному спектру, который по сравнешпо с инфракрасным спектром винбластина имеет при 5,94 мкм сильную полосу поглон1е1шя.

Исследования методом тонкослойной хроматографии проводились с окисью алюминия марки G. Merck. Элюирование осуществлялось хлороформом с содержа1шем 0,5% метанола, для проявления использовалась концентрированная фосфорная кислота, содержащая 1% сульфата цераммония. Пример2. 5 г (0,0055 моля) сульфата винбластина растворяют в 1100 мл ацетона и добавляют 250 мл 99,5% очищенной ледяной уксусной кислоты, которая не содержит окисляемых веществ. Раствор охлаждают до - 60° С. Одновременно 2,48 г (0,0297 моля) хромовой кислоты растворяют в 930 мл уксусного ангидрида, охлаждают до (-) 60° С и при перемещивании добавляют к раствору сульфата винбластина. Реакционную смесь перемешивают в течение 8 мин и затем добавлением охлажденного от (-) 40 до (-) 50° С концентрированного аммиака устанав;тивают величину рН 9. Во время нейтрализации температура реакционной смеси не должна превышать (+) 50° С. Подщелоченную реакционную смесь разбавляют 5000 мл воды и экстрагируют 3 раза по 1000 мл хлористым метиленом до отсутствия алкалоида. Фазы хлористого метилена соединяют и образованный при нейтрализации и перещедший в органическую фазу ацетат аммония промьтают 2 раза по 1500 мл воды. После этого фазу хлористого метилена сушат и выпаривают при пониженном давлении досуха. Остаток растворяют в смеси из 75 мл концентрированной муравьиной кислоты и 12,5 мл уксусного ангидрида и вьщерживают 5 мин при комнатной температуре. Затем кислый раствор разбавляют водой в три раза и с помощью концентрированного аммиака при охлаждении устанавливают Бе:гшчину рН 9. Алкалоиды экстрагируют 3 раза порциями по 100 мл хлористого метилена. Фазы хлористого метилена соединяют и при пониженном давлении вьшаривают досуха. Сухой остаток, который содержит винкристин, растворяют в 20 мл бензола и хроматографируют на колонке, содержащей пропитанную бензолом окись алюминия с активностью IV-V. Сначала производят элюирование при помощи 500 мл бензола, затем 1000 мл смеси бензола - хлороформа в отношении 9:1, после этого 700 мл смеси бензола хлороформа в отношении 8,5; 1,5, затем 2300мл смеси в отношении 8:2 и, наконец, при помощи смеси бензола - хлороформа в отношении 1:1. Улавливают фракции по 250 мл. Бензол и смеси бензола - хлороформа в отношении 9:1 и 8,5:1,5 служат для лучшего разделения веществ на адсорбенте; первые алкалоидсодержашие фракции появляются при элюировании с первой половиной смеси бензола - хлороформа в отношении 8:2. Эти фракции соединяют и вьшаривают при понижетшом

давлении, причем получают 5-10% побочного продукта, в пересчете на вес образованного при окислении конечного продукта, сульфата винкристипа. Содержащие винкристин фракции получают при элюировании со второй половиной смеси бензола хлороформа в отношении 8:2, удаление винкрисTtffla растворением заканчивают при помощи смеси бензола - хлороформа в отношении 1:1. Содержащие винкристин фракции, идентифицированные посредством тонкослойной хроматографии или хроматографии на бумаге, соединяют и вьшаривают при пониженном давлении досуха. Получают 3,8 г сухого остатку который растворяют в 40 мл безводного этанрла, и раствор при помощи 1%-ного раствора серной кислоты в этаноле доводится до величины рН 4. Винкристин осаждают в форме своего сульфата, отделяют, растворяют в 30 мл метанола, и раствор смешивают с 120 мл безводного этанола. Сульфат винкристина выкристаллизовывают при одночасовой выдержке. Продукт отфильтровьшают, промывают и сушат. Выход 3,5 г (0,0039 моля) сульфата винкристина (70%). Физические константы сульфата винкристина совпадают с названными в примере 1.

Формула изобретения

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

3.ПатентСША№3354163,кл. 260-287, 21.11.67.