Способ получения производных винбластина или их эпимеров Советский патент 1985 года по МПК C07D519/04 A61K31/475 A61P35/00 

1 Изобретение относится к способу получения новых химических соедине ний, являющихся -производными винблас на, а именно соединений общей формулы .R3(1) Н СООСНз где R - метоксигруппа; R - ацетил; R3 -этил или -этил; R - I -оксигруппа или атом во дорода; R - линейный С,-С -апкш1, или изопропил, изобутил, цикл гексил, аллил, бензил, или их эпимеров, обладающих цитост тической активностью. Известен природный алкалоид - вин бластин, который получают обработко водно-спиртового раствора растител ного сырья Vinca rosea - кислотой с последуннцим вьщелением винбластина экстракцией и хроматографией Известен также метод расщепления простой эфирной связи под дейст вием кислотных агентов,например анги ридов или хлорангидридов кислот t2J . Цель изобретения - получение но вых производных винбластина, прояв ющих цитостатическое действие. Цель достигается тем, что согла но способу получения производных йинбластина соединение общей форму -S W I V OR2 « HDCORI 32 где R,R,R и R имеют указанные значения; R имеет любое из значений R, кроме того, которое желательно для конечного продукта, подвергают взаимодействию с 30 50-кратным избытком спирта общей формулы где R - изопропил или изобутил, при рН 3, затем устанавливают рН реакционной смеси 7 и полученный продукт или его зпимеры выделяют с последующей при желании очисткой. Пример 1. Н-Дезметил-Ы-(метоксиметнл)-винбластин. 1,0 г (1,1 ммоль) сульфата винбластина растворяют в смеси 240 мл абсолютного не содержащего примесей спирта дихлорметана, 8,0 мл метанола и 25 мл ледяной уксусной кислоты и охлаждают полученный раствор до -55°С. К раствору винбластина добавляют в течение 5 мин в токе сухого азота при интенсивном перемешивании охлажденный до -55°С раствор 0.,5 г (5,0 ммоль) трехокиси хрома в 40 мл уксусного ангидрида. При этом нужно следить за тем, чтобы температура смеси не поднималась вьше -55°С. Ход окисления контролируют с помощью тонкослойной хроматографии (адсорбент: алюминиевая фольга для тонкослойной хроматографии - силикагель 60 F254 Art. 5554; подвижная фаза: смесь диэтилового эфира, этанола, бензола и дизтиламина в соотношении 10:0,5:0,5:0,5). Окисление, как правило, заканчивается через 2030 мин. После окончания реакции к реакционной смеси добавляют при охлаждении 190 мл концентрированного водного раствора аммиака и 200 г льда. Температура смеси поднимается до О-10°С. После этого прекращают охлаждение и энергично перемешивают смесь, рН которой равно 8,5-9, в течение 10 мин. Фазы разделяют и из водной фазы трижды проводят экстракцию 30 мл дихлорметаном. Экстракты четыре раза промывают 25 мл разбавленным 1:1 раствором аммиака, а затем дважды 30 мл воды, высушивают над сульфатом магния, фильтруют и упаривают фильтрат в вакууме. В результате получают 0,85 г сырого продукта, 0,3 г из которых подвергают хроматографии на колон31

ке, заполненной окисью алюминия активности П-Ш, используя в качестве элюента дихлорметан. Собирают фракции по 6 мл, которые анализируют с помощью тонкослойной хроматографии (адсорбент:алюминиевая фольга для тонкослойной хроматографии - силикагель Art. 5554, подвижная фаза: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:0,4, проявление парами иода или УФ-светом с длиной волны 254 нм).

Фракции, содержащие один и .тот же алкалоид, объединяют и по отдельности упаривают. Целевое соединение содержится в фракциях 6-25. В результате получают Н-дезметил-Н-(метоксиметил)-винбластин (хроматографическая чистота 64%), плавящийся при 205-2Ю С (этанол). К1 +23 (, хлороформ).

Масс-спектрометрия т/е: 840 (М 100%), 810, 809, 781, 751, 681, 651, 650, 601, 499, 355, 282, 243, 241, 154, 149.

Пример 2. Ы-Дезмётш1-Ы-(изобутоксиметил)-винбластин.

0,5 г (0,55 ммоль) сульфата винбластина растворяют в смеси 120 мл абсолютного дихлорметана, 3,7 мл изобутанола и 12,5 мл ледяной уксусной кислоты и охлаждают полученный раствор до -55°С. К этому раствору :добавляют охлажденный до -55°С раствор 0,25 г (0,5 ммоль) трехокиси хрома в 40 мл уксусного ангидрида. Протекание реакции контролируют с помощью тонкослойной хроматографии (адсорбент: полимерная пленка для тонкослойной хроматографии - силика гель 60 F, Art. 5735, подвижная фаза: смесь эфира, этанола, бензола и диэтиламина в соотношении 10:0,5: :0,5:0,5) описанным в примере 1 образом. Реакция заканчивается через 140 мин. Реакционную смесь обрабатывают далее описанным в примере 1 образом. В результате получают 0,65 г сырого продукта, который пЬдвергают очистке с помощью хроматографии на колонке, заполненной силикагелем 60 (Art. 9385), используя дихлорэтан в качестве растворителя Проявление и элюирование осуществ:ляют с помощью дихлорметэна. СобиIрают фракции по 10 мл. В первых I330 мл элюата не содержится алкалои да; Далее элюирование продолжают ди

80334

хлорметаном, содержащим 3% метанола. В первых 90 мл полученного элюата содержится целевое соединение, которое вьщеляют путем отгонки растворителя. Выход 169 мг (35% от теоретического выхода) .i - ИК (КБг): 3400 (NH, ОН), 1730 (COjCH), 1605, 1220 (ОАс). Масс-спектрометрия т/е: (М,

10 100%), 864, 851, 823, 810, 779, 751, 723, 651, 650, 514, 355, 346, 329, 154.

Пример 3. Ы-Дезметш1-Н-(гептоксиметкл)-винбластин.

15 Процесс проводят таким же образом, как это описано в примере 2, ни в качестве реагента используют. 3,7 мл 1-гептанола. Реакция продолжается в течение примерно 90 мин. В

20 результате переработки реакционной смеси получают около 4 г сырого продукта, который растворяют в 30 мл дихлорметана и вводят в колонку, заполненную силикагелем 60.(Art.

5 9385). Элюирование осуществляют с помощью дихлорметана. Собирают фракции по 10 мл. В первых 300 мл не содержится алкалоида. Далее элюирование продолжают дихлорме3Q таном, содержащим 3% метанола. В

первых 120 мл полученного элюата содержится целевой продукт. Выход 21% от теоретического выхода, т.пл. 200-205°С (смесь ацетона и эфира). ИК (КВг): 3450 (ОН, N11), 1740

-1,

(СО.СН-), 1610, 1220 см (ОАс).

л J --,

Масс-спектрометрия т/е: (М , 100%), 906, 893, 865, 822, 810, 765, 751, 737, 651, 650, 649, 469, р 455, 355, 282, 154, 135, 122.

Пример 4. Н-Дезметип-Н-(бензилоксиметил)-винбластин. Работают таким же образом, как

5 это-описано в примере 2, с той разницей, что вместо изобутанола используют 4,3 мл бензилового спирта. Реакция заканчивается через 45 мин. В результате получают 4 мл сырого

0 продукта в виде маслянистой жидкости, который вьщеляют с помощью препаративной хроматографии на бумаге (адсорбент: силикагель подвижная фаза: смесь 100 мл дихлорметана

5 и 8 мл метанола). Выход 75 мг (15% от теоретического выхода), т.пл. 215-218С (смесь метиленхлорида и эфира).

S11

ИК (KBr): 3400 (ОН, NH), 1740 (CGjCHj), 1610, 1230 (OAc).

Масс-спектрометрия m/e ; (M , 100%), 885, 857, 822, 810, 796, 799, 757, 751, 737, 651, 650, 649, 514, 355, 346, 329, 282, 154, 135.

Пример 5. N-fle3MeTHn-N-(Meтоксиметил)-винбластин.

5 г {5,5 ммоль) сульфата винбластина растворяют в 150 мл воды. Винбластиновое основание выделяют в свободном виде, добавляя к раствору концентрированный раствор аммиака (рН 8) и проводят четырежды экстракцию 50 мл дихлорметана. Органическую фазу высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме досуха. В результате получают 4 г винбластинового основания, которое растворяют в смеси 1000 мл не содержащего примесей спирта дихлорметана, 120 мл уксусной кислоты и 6 мл метанола и охлаждают раствор до . К полученному раствору добавляют в течение примерно 5 мин охлажденный до -55°С раствор 2,5 г (25 ммоль) трехокиси хрома в 470 мл уксусного ангидрида. Реакционную смесь перемешивают в течение 45 мин при -55°С и затем выливают в смесь 940 мл концентрированного раствора аммиака и 940 мл ледяной воды. При этом нужно следить за тем, чтобы температура не поднималась выше 30°С. Затем фазы разделяют и органическую фазу встряхивают в делительной воронке с 1 л 1%-ного раствора аммиака. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают досуха в вакууме. Полученные 3,8 г сырого продукта подвергают очистке с помощью хроматографии на колонке. Колонку заполняют 230 г окиси алюминия активности П-Ш (Brockmann), которую увлажняют бензолом. Сырой продукт растворяют в 20 мл смеси бен зола и хлороформа, взятых в соотношении 8:2, и вводят полученный раствор в.колонку. Элюирование осуществляют этой же смесью (около (8 л). Собирают фракции по 100 мл. Содержащие одно и то же вещество фракции объединяют и упаривают (адсорбент: силикагель, подвижная фаза: смесь бензола, этанола, диэтиламина и диэтилового эфира в соотношении 5:5:5:100). В резуль36

тате получают 2,1 г продукта. После перекристаллизации из 6 мл этанола получают 1,5 г очищенного продукта с такими же физическими константами, как и у продукта, полученного по способу в соответствии с примером 1.

Пример 6. К-Дезметил-Н-(пропоксиметил)-винбластин.

Работают таким же образом, как это описано в примере 5, но вместо метанола при меняют 4,5 мл пропанола. В результате получают 0,6 г целевого соединения, плавящегося при 200210°С, () 31,2°(с 1, хлороформ) .

Пример 7. Н-Дезметил-Ы- , -(метоксиметил)-винбластин.

Работают таким же образом, как это описано в примере 1, но в качестве исходного соединения вместо сульфата винбластина применяют винбластиндигидрохлорид. Выход полученного продукта 28% от теоретического. Физические константы его такие же,как и у продукта, полученного по способу в соответствии с примером 1.

Пример 8. К-Дезметил-Н-(метрксиметил)-винбластин,

Работают таким же образом, как это описано в примере 1, но в качестве растворителя вместо дихлорметана используют не содержащий примеси спирта хлороформ, дихлорэтан или

ацетон. Выход 40-50% от теоретического (в зависимости от природы используемого растворителя). Физические характеристики полученного продукта такие же, как и продукта, полученного по способу в соответствии с примером 1.

Пример 9. N-Дeзмeтил-N-(метоксиметил)-20-дезокси-лейрозидин.

60 мг (0,067 ммоль) сульфата 20 -дезокси-лейрозидина (полученного путем каталитического гидрирования 3 ,4-ангидровинбластина в среде метанола в присутствии палладия на

угле в качестве катализатора и последующего получения сульфата) растворяют в смеси 20 мл абсолютного дихлорметана, 1,5 мл ледяной уксусной кислоты и 0,5 мл метанола. Раствор охлаждают до -55°С и смешивают с охлажденным до -55°С раствором 30 мг (0,3 ймоль) трехокиси хрома в 3,5 мл уксусного ангидрида. Реакция проте7кает в течение 60 мин, после чего реакционную смесь вливают в смесь 12 мл концентрированного раствора аммиака и 12 г льда. После разделения фаз водную фазу трижды встряхивают в делительной воронке с 10 м дихлорметана. Объединенные органические фазы дважды промывают 10 мл разбавленного 1:1 раствора аммиака и затем дважды водой, порциями по 5 мл. После высушивания органическую фазу упаривают. В результате получают 48 мг сырого продукта, кот рый подвергают очистке с помощью хроматографии на колонке (адсорбент силикагель с размером частиц 0,0400,063 мм фирмы Merck, Art. 9385, элюент: дихлорметан и затем дихлорметан, содержащий 3% метанола). В результате получают 18 мг (32% от теоретического выхода) продукта, ко торьгй плавится с разложением при iBS-igo-c. (. )jj +50° (с 1, хлороформ). ИК (КВг): 3400 (NH), 1720 (С02СН 1610, 1230 (АОс). В качестве побочного продукта пр хроматографической очистке получают 46 мг (22% от теоретического выхода Ы дезметил-К-формил-20-дезокси.-лейрозидина, т.пл. 205-210°С (с разложением), («)j5+54°(с 1, хлороформ). Пример 10. Ы-Дезметил-К-(изобутилоксиметш1)-винбластин. 0,80 г полученного по способу в соответствии с примером 1 сырого продукта, с содержанием N-дезметил -Н-(метоксиметш1)-винбластина 65% растворяют в смеси 50 мл безводног дихлорметана и 2,4 мл (25 ммоль) из збутанола. Раствор охлаждают до 0°С и добавляют к нему при перемешивании в атмосфере азота безводный раствор соляной кислоты в эфире до .достижения рН 3. Протекание реакции контролируют с помощью тонкослойной ; хроматографии (адсорбент: алюминие 1вая фольга для тонкослойной хромат : графин - силикагель 60 Fj, Art. 5554, подвижнал фаза: смесь эфира, этанола, бензола и диэтиламина в соотношении 10:0,5:0,5:0,5). После ;окончания реакции смесь вливают в 2 мл концентрированного раствора аммиака, фазы разделяют и из водной фазы трижды экстракцию проводят дихлорметаном, порциями по 5 мл, Объе 3 диненные экстракты трижды промывают 3 мл воды, высушивают над сульфатом магния, фильтруют и упаривают. Полученные 1,7 .г сьфого продукта растворяют в 25 мл дихлорметана и подвер1гают хроматографии на колонке- чсиликагель 60, Art. 9385). Элюированйе влачале проводят 120 мл дихлорметана, а затем смесями метанола и дихпорметана с содержанием метанола 1,2 и 4%. В первых 290 мл элюата не содержится алкалоида. Следующие 300 мл элюата содержат N-дезметил-Н-(изобутоксиметил)-винбластин. В результате получают 416 мг продукта с такими же физическими характеристиками, как и у продукта, полученного по способу в соответствии с примером 2. Пример 11, К-дезметил-К-(гептоксиметил)-винбластин. Работают таким же образом, как это описано в примере 10, с той разницей, что вместо изобутанола используют 2,5 мл (17 ммоль) 1-гептанола. Протекание реакции контролирзтот с помощью тонкослойной хроматографии, причем в качестве адсорбента используют полимерную пленку для тонкослойной хроматографии с нанесенным на нее силикагелем 60 Fog (Aft. 5735) . Полученный сырой продукт подвергают очистке с помощью хроматографии на колонке, как это описано в примере 10. В первых 310 мл элюата не содержится алкалоида. Следующие 200 мл содержат Н-дезметил-Ы-(гептоксиметил)-винбластин. Выход 350 мг. Физические характеристики полученного продукта таке же, как и у продукта, полученного по способу в соответствии d примером 3. Прим е р 12,Н-Дезметил-Ы-(бензилоксиметил)-винбластин. Работают таким же образом, как это описано в примере 10, с той разницей, что в качестве исходного реагента применяют 3,0 мл (.27 ммоль) бензилового спирта. Полученный сырой продукт подвергают очисгке описанным в примере 10 способом. В первых 350 мл элюата не содержится алкалоида. Целевой продукт содержится в следующих 300 мл элюата. Выход 320 мг. Физические характеристики полученного соединения такие же, как и соединения, полученного по способу в соответствии с примером 4.

Пример 13. Ы-Дезметил-Н-(изобутоксиметил)-винбластин.

О,1 г сырого продукта, полученного по способу в соответствии с примером 1, содержащего 65% Ы-дезметил-Ы-(метоксиметш1)-винбластина, растворяют в смеси 15 мл дихлорметана и 30-50 моль эквивалентов изобутанола. К раствору добавляют при 0°С при перемешивании безводный раствор соляной кислоты в эфире до рН 3. После окончания реакции смесь нейтрализуют карбонатом калия до рН 7, выпадающий осадок соли отфильтровывают, а фильтрат - после упаривания при желании в вакууме - подвергают очистке с помощью хроматографи на колонке описанным в 10 способом. В результате получают целевой продукт с 53%-ным выходом, физические характеристики которого такие же, как и у продукта, полученного по способу в соответствии с примером 2.

Используя соответствующие исходные соединения, аналогичным образом получают Ы-дезметил-Ы-(изопропоксиметш1)-винбластин. Выход 35% от теоретического, т.пл. 172-182С (с разложением) .

ИК (КВг): 3400 (ОН, NH), 1730 (COjCHj), 1610, 1220 смЧлОс). 1Н-ЯМР (С DClj) 100МГц: с 8,.1 (S, 1Н, N-H), 7,51 (т, 1Н, C,j-H), 7,2-7,03 (m, ЗН, Сд,-С,-Н), 6,70 (S, 1Н, С9-Н),,6,35 (S, 1Н. ) 5,85 (dd, 1Н, ). 5,38 (S, 1Н, С„-Н), 5,30 (d, 1Н, С,5-Н), 4,75, 4,15 (2Н, Гц, Na-CHj-O-), 4,0 OS, Ш, ), 2,1 (S, ЗН, OCOCHj), ,60 (12Н, CH -группы

N-fle3MeTmT-N- (алилоксиметил)-.-винбластин (выход 55% от теоретического), т.пл. 205-210°С (с разложением) .

ИК (КВг): 3300 (ОН. NH), 1730 (COjCHj), 1610, см (АОс).

N-Де зме тил-N-(цикло гексилметил)-винбластин.

Выход 36% от теоретического, т. пл. 175-180°С (с разложением).

ИК (КВг): 3400 (ОН, NH), 1730 (COjCHj), 1610, 1230 см (ОАс).

Пример 14. Ы-Дезметил-Н-(метоксиметшт)-винбластин.

0,15 г (0,17 ммоль) N-дезметил-N- (изобутоксиметил) - винбластина, плученного по способу в соответствии

с примером 2, растворяют в смеси 30 мл дихлорметана и 1,5 мл метанола. Раствор охлаждают до 0°С и устанавливают его рН равным 3 с помощью безводного раствора соляной кислоты в эфире. Протекание реакции контролир тот с помощью тонкослойной хроматографии (адсорбентгсиликагель 60 , подвижная фаза: смесь эфира,

О этанола, дизтилового эфира и бензола в соотношении 20:1:1:1). После окончания реакции реакционную смесь нейтрализуют твердым карбонатом калия, раствор фильтруют и фильтрат

5 упаривают д вакууме. Выход 14 г. ,Физические характеристики полученного продукта такие же, как и продукта, полученного по способу в соответствии с примером 1.

0Пример15. N-Дeзмeтил-N-(этоксиметил)-винбластин.

Охлажденный до 0°С раствор 50 мг Ы-дезметш1-N-(алилоксиметил)-винбластина в 10 мл безводного дихлор-

5 метана и 0,3 мл этанола подкисляют безводным раствором соляной кислоты в эфире до рН 3. Через 5 мин раствор нейтрализуют твердым.карбонатом калия. Выпадающий осадок соли

0 отфильтровьшают, а фильтрат упаривают. В результате получают 46 мг N-дeзмeтшloкcи-N-(этоксиметил)винбластина, т.пл. 235-238°С. (с6) +30.5° (с 1, хлороформ).

Пример 16. Ы-Дезметил-Н-(пропоксиметил)-винбластин.

К раствору 100 мг Н-дезметил-К-(гептоксиметил)-винбластина в 20 мл безводного бензола добавляют

0 1 мл н-пропилового спирта. Раствор подкисляют безводным раствором соляной кислоты в эфире до рН 3 и через 5-10 мин нейтрализуют твердым карбонатом калия. После упаривания фильтрата получают 90 мг N-дезметил- -N-(пропоксиметил)-винбластина. Физические характеристики полученного соединения такие же, как и у продукта, полученного по способу

0 в соответствии с примером 6.

Реакция протекает также полностью, если в качестве растворителя использовать диэтиловый эфир, диоксан, ацетон-ИЛИ этилацетат.

-5 Пример 17., Н-Дезметил-К-(аллилоксиметил)-винбластин.

50.МГ N-дезметил-N-(метонсиметил)-винбластина растворяют в смеси 10мл безводного дихлорметана и 0,5 мл аллилового спирта. Охлажденный до 0°С раствор подкисляют безводным 50%-ным эфирным раствором бортрифторидэфирата до рН 3. Через 5 мин раствор нейтрализуют карбонатом калия, выпадакяций осадок соли отфильт ровьюают и фильтрат упаривают, В ре зультате получают 40 мг N-дезметип-N-(аллилоксиметил)-винбластина с такими же физическими характеристиками, как и у продукта, полученного по способу в соответствии с примег ром 13. Соединения общей формулы (1) цитостатически активные. Они менее ядовиты, чем известные соединения. Острая токсичность соединений испытьгаалась на самцах швейцаре312ких мышей. Каждая группа подопытных животных состояла из 6 мьшей весом 27-31 г. Из испытуемых соединений гоовили на физиологическом растворе поваренной соли растворы для инъекций, в которые при нeoбxoдf мocти добавляли кашпо Tween 80. Полученные растворы вводили животным внутрибрюшинно в дозах от не вызывающих смертельного исхода до вызывакицих 100%-ную смертность. Ниже приведены результаты испытаний, оценивающихся по методу Lichfield и Wilcoxon (для сравнения приведены также данные, полученные при использовании известных соединений, винбластина, виндецина и винкристина)

Способ получения производных винбластина общей формулы R R3 OR ш.о OR где R - метоксигруппа; R - ацетил; R -оС-этил, или -этил; Я - -оксигруппа, или атом водорода; R - линейный С -Ст -алкил, или изопропил, изобутил, циклогексил, аллил, бензил, или их эпимеров, отличающийс я тем, что соединение общей формулы « OR СНзО ( СОК СО 00 OR о со где R ,R2,;R3 и R имеют указанные значения, а R имеет любое из знаСАЭ чений R, кроме того, которое желн тельно для конечного продукта, подвергают взаимодействию 30-50кратном избытком спирта общей формулы ROH где R имг-ет указанные значения, при рН 3, затем устанавливают для реакционной смеси рН 7 и пoлyчeнныi продукт или его эпимеры вьщеляют с последующей при желании очисткой.

(метоксиметил1-винбластин

(этоксиметш1)-винбласхин

(пропоксиметш1)-винбластин

(изобутоксиметил)-винбластин

(гептоксиметш1)-винбластин

(аллилоксиметил)-винбластин

(бензш10ксиметил)-винбластин

(циклогексилоксиметил) -вин Наблюдается побочное парализующее действие.

Предлагаемые соединения в 15-25 раз менее токсичны, чем винкристин и виндецин и в 8-13 раз менее токсич- ®

ны, чем винбластин. В отличие от винкристина и виндецина в случае предлагаемых соединений вплоть до

средней смертельной дозы не наблюдается побочных парализующих яв- W лений.

Цитостатическую активность предлагаемых соединений испытывали на тка-100

-110

- 80

60

- 60

45

70

60 4,2 7,6 4,0

невых культурах в различных трансплатированных опухолях.

Испытуемые соединения растворяли в культурах клеток (Hela культуре) в количествах от пороговой дозы мкг/мл до верхнего предела 100 мкг/мл. Через 24 ч исследйвали культуры in vivo под микроскопом.При этом были получены следующие резуль- таты (с учетом зафиксированных в метафазе клеток). В аналогичных условиях были проведены опыты с окрашенными культурами клеток, что дало возможность фиксировать более точные различия. При этом обнаруженное действие можно разрелить на 5 стадий. Первая стадия характеризует дозу вызьюающую минимальное действие возрастание количества блокирован- ных митоз. Часть этих митоз, например тройные митозы, вырождается или на полюсах их появляется несколь ко отделившихся хромосом, анафазы в большинстве случаев пропадают. На второй стадии происходит сильное бл кирование метафаз и нормальные мито зы практически отсутствуют. Хромосомы располагаются в более рыхлом клубке. Доля клеток, находящихся в интерфазе, незначительна. На третьей стадии хромосомы скучиваются (коале цируют) в виде плотной массы в цент клетки. Это состояние можно охарактеризовать как пикномитоэ или шаро ,вая метафаза. На четвертой стадии действие соединений на находящихся в интерфазе клетки проявляется в том, что уже имеется сравнительно небольшое количество блокированных клеток, поскольку они уже не в состоянии входить в митозу. Цитоплазма клеток в интерфазе расширяется, кра ее становятся неопределенными, бах рсадчатыми, клетки часто принимают вытянутую, фибробластовую форму. На пятой стадии цитоплазма заполняется тонкой счетчатой структурой, и находящиеся в интерфазе клетки явно погибают в результате обработки. Указанные пять стадий можно легко отличить друг от друга. Наиболее активными являются гепТОКСИ-, а также аллилоксипроизводные. Уже в дозе 0,001 мкг/мл эти соединения вызывают сильное блокирование метафазы, пикномитоза появляется при дозе 0,1 мкг/мл, а воздействие на клетки/, находящиеся в интерфазе, проявляется при дозе 1-10 мкг/мл. Действие изобутокси- и циклогексилоксипроизводных на порядок ниже: при минимальной дозе 0,001 мкг/мл еще имеются нормальные митозы. Самой низкой активностью обладает бензилоксипроизводное. При минимальной дозе оно оказывает слабое блокирующее действие, имеется еще некоторое количество вьфожденных митоз, анафазы уже однако отсутствуют. При дозе 0,01 мкг/мл блокирование умеренное; сильное блокирование и пикномитоз проявляются только при дозе 1 мкг/мл. Действие предлагаемых соединений на внутрибрюшинно трансплантированные опухоли (лейкемия мьш1ей Р 388 и Ascites Lymphoma Ж/Ly) . Лейкемия Р 388 поддерживалась у мьшхей (BDF -гибриды) . Каждый из опытов проводили на 6 животных, которым внутрибрюшинно трансплантировали по 10 опухолевых клеток. Лечение начинали через 24 ч после трансплантации, для чего животным ежедневно вводили внутрибрнилинно соединения. Ежедневно контролировали вес и состояние подопытных животных. Лродолжительность жизни мьш1ей, подвергнутых лечению, вьфажали в

процентах от продолжительности жизни контрольных животных.

Результаты приведены в табл. 1.

Из данных табл. 1 видно, что предлагаемые соединения дают возможность значительно продлить жизнь пораженных лейкемией мышей.

Аналогичные опыты были проведены с использованием Н-дезматил-Н-(метоксиметил)-20-дезокси-лейрозидина. При этом помимо дозировки варьировалась также продолжительность лечения (см. табл. 2).

Подопытным мышам (Swiss-H/Riop, неродственное разведение) трансплантировали внутрибрюшинно 5x10 опухрлевых клеток ascites. Каждьсй из опытов проводили на 10 мьшах. Лечение начинали через 24 ч после трансплантации. Исследуемые соединения ввоН-Дезметил-К-(гептоксиметил)-винбластин

Ы-Дезметил-Ы-(бензилоксиметил) -винбластин

К-Дезметил-Н-(изобутоксиметил) -винбластин

К-Дезметил-Ы-(метоксиметш1)-винбластин

дили ежедневно в течение 5 дней. Средняя продолжительность жизни мьшей из контрольной группы составляла 15,7 дня. Эффективность соединений проявляется в увеличении продолжительности жизни подопытных животных, что следует из табл. 3.

Предлагаемые соединения сущест; венно тормозят развитие опухолевых

штаммов Р 388 и Ж/Ly в дозах

4-8 мг/кг. При этом тормозящее действие их такое же, как и в случае известных дииндоловых алкалоидов. Предлагаемые соединения однако значительно менее токсичны, чем известные аналогичной структуры.

При лечении людей предлагаемые соединения следует применять в виде внутривенных инъекций или вливаний.

,Т а б л и ц а 1

122

12,7

10,3 178 10,5 18,7 155 16,8 171 19,0

11,1 17,7 163 182

10,5 19,2 172 10,9 205 20,2

17

Н-Дезметил-Н-(пропоксиметил) При этой прдибали

Ы-Дезметил-Ы-(метоксиметш1)-20-лейрозидин

1138033

18 Продолжение табл. 1 концентрации соединение оказьшало токсическое действие: и животные, не зараженные опухолью. Таблица2

Н-Дезметил-Ы-(гептокснметил)-винбластин, 5x6,0, внутрибрюшинно

N-Дeз feтил-N-(изoбyтoкcимeтил)-винбластин, 5x4,0

Н-Дезметил-Н-(аллилоксиметил)-винбластин, 5x4,0

Н-Дезметил-Н-(циклогексилоксиметил)-винбластин, 5x4,0

Таблица J

3/10 7/10 6/10 3/10