Способ определения холиномиметических и холиноблокирующих свойств фармакологических средств холинергической природы Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

трис-буферДрН 7,4), в соотношении 1 мг:1 мкл способом дифференциально сканирующей -калориметрии на калориметре DSC-2 (Perkfп-ЕImer) показывают следующие температуры фазового пе рехода гель-жидкий кристалл (табл,1) Т а б л и Ц а Температуры фазовых переходов контрольных препаратов в трис-буфёре 1:1 рН 7,4 Приведенные в табл. 1 температуры фазовых перезЛэдов могут иметь незначительные отличия в различных группа животных, в силу чего в каждой новой партии фосфолипидов должны производиться свои контрольные записи. Исследуемое фармакологическое вещество.в виде раствора в трисбуфере добавляется с помощью микрошприца к сухому порошку фосфолипида в соотношениях фосфолипид:буферный раствор 1;1. Полученная смесь герметизируется в; специальных алюминиевых капсулах.Общий объем смеси составляет З-б мкл. Капсула помещается в измерительную ячейку калориметра и выдерживается в изотермическом режиме при температуре, превышающей температуру фазового перехода фосфолипида на ICPc, до тех пор пока не прекратится смещение базовой линии прибора. Прекращение смещения базовой линии свидетельствует об окончании перемешивания компонентов смеси. Смесь охлаждается и нагревается со скоростью 5 /мин, при чувствительности прибора 0,5-1 мкал/с, при этом регистрируется температура фазового перехода смеси. В табл. 2 представлены данные по изменению температуры фазового перехода гель-жидкий кристалл фосфатидилхолина мозга крыс под влиянием ряда холиномиметиков в холиноблокаторов. Исследуемые вещества растворяют В трис-буфере рН 7,4 и доб;-гвляют к фосфолипиду из расчета фосфатидилхолин:исследуемое вещество 1 моль: 1 моль. Контролем служит температура фазового перехода смеси фосфатидилхолин:трио-буфер рН 7,4 1:1. Т а б л и д а 2

I Трис-буфер гаН 7,4 (контроль) 35,5±0,01 39 ,.2+0,49 +3,7± 0,49 Ацетилхолин 38,9+0,31 +3,4+ 0,31 Карбохолин 38,5+0,Г7 +3,0+ 0,17 Оксотреглорин 36,7+0,21 +1,2+0,21 Дреколин 37,,27 Пилокарпин 33,1+0,25 -2,4+0,25 АТРОПИН 33,1+0,07 -2,4+0,07 4eтaмизил 28,5+0,15 -7,0±0,15 Лрпенал 24,1+0,27 -11,4+0,27 Педифен Холиномиметики +2,1-0,27 Холиноблокато 5 ±0,46 О, 001 9 +1,11

Для к его из исследованных веществ вычислялась не менее чем из 4-х измерений, выполненных на различных образцах.

Из приведенных в таблице данных видно, что холиномиметики достовер но повышают температуру фазового перехода фосфатидилхолина, а в противоположность им холиноблокаторы понижают. Эта направленность изменений температуры фазового перехода под влиянием холиноблокаторов в холиномиметиков сохраняется и в других исследованных фосфолипидов:фосфатидилэтаноламина и сфинтомиелина.Таким образом, сопоставляя эффекты, различных фармакологических средств, можно in ;V it го без ппименения животных предсказать характер из физиологических свойств.

Предлагаемый способ позволяет за короткое время провести скрининг большого числа вновь синтезированных органических веществ и отобрать для дальнейших исследований те из них.

Продолжение табл. 2

которые проявляют активность in vitro, позволяет сократить потребность в экспериментальных животных.

Формула изобретения

Способ определения холиномиметических и холиноблокируюгцих свойств

30 фармакологических средств холинергической природы путем исследования свойств испытуемых веществ, о т л и ч а ю щ и иг,с я тем, что, с целью ускорения способа, водный раствор исJ5 пытуемого вещества добавляют к фосфолипиду, измеряют температуру фазового перехода смеси и по направлению смещения температуры фазового перехода определяют миметические или блокирующие свойства вещества.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Фармакопея СССР. Изд. 10-е, 1968, с. 3.