Способ получения убихинона Советский патент 1982 года по МПК A61K35/60 C07C50/02 

(5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УБИХИНОНА

Изобретение относится к медицинской промьпиленности и касается технологии получения биологически активных веществ из сырья животного происхождения.

Известен способ получения убихинона из сердца лошади, включающий измельчение ткани, гидролиз ее в кипящем растворе метанола, содержащем щблочь и антиоксидант, экстракцию диэтилоловым эфиром, дальнейшую обработку полученного экстракта для отделения сопутствующих линидов, хроматографическую очистку на колонке с окисью алюминия и последующее выделение и кристаллизацию целевого продукта 1

Однако известный способ не обеспечивает достаточно высокого выхода целевого продукта (95 мг убихинона из 1 кг сырья), а сырьевая база t для его получения является ограниченной.

Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и расширение сырьевой базы.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения убихинона из сырья животного происхсвкдения, включающему измельчение исходного сырья, его гидролиз раствором щелочи в метаноле в присутствии антиоксиданта, экстракцио органичес10ким растворителем, обработку полученного экстракта для отделения сопутствующих липидов, последующую хроматографическую очистку, выделение и кристаллизацию целевого про15дукта, в качестве исходного сырья используют непищевые и малоценные виды морепродуктов и отходы переработки пищевых видов, гидролиз раствором щелочи в метаноле проводят с

20 одновременной экстракцией трихлорэтиленом, полученный экстракт упаривают, обрабатывают его смесью метанол - вода при соотношении растворителей 4:1, затем охлажденной cfJieсью ацетон - метанол при соотношении растворителей 1:1, а хроматографическую очистку осуществляют на кремнийсодержащем сорбенте с последующей последовательной элюцией гексаном и бензолом.

Пример 1. В качестве сырья используют рыбную мелочь (несортовую скумбрию). Рыбную мелочь целиком перерабатывают на мясорубке. Навеску 5 кг рыбного фарша помещают в реактор на 20 л, приливают k л трихлорэтилена, 3,5 л раствора КОН в метаноле (вес/объем), со держащего 50 г пирогаллола, и содержимое непрерывно перемешивают мешалкой 45 мин при 25 С „ После отстаивания нижний слой трихлорэтилена сливают, в отстойник на 30 л и проводят дважды повторную экстракцию 4,0 л трихлорэтилена при непрерывном перемешивании содержимого реактора 30 мин. Собранные вместе экстракты (11,2 л) промывают при плавном перемешивании 4 л воды, а затем дважды проводят нейтрализацию 2,5 л 2,5 -ного раствора НС в воде. После тщательного отделения водного раствора проводят вакуумную отгонку растворителя до 1/10 первоначального объема - 1200 мл. Концентрированный липидный экстракт однократно промывают 500 мл метанолводного раствора (:1) для удаления поверхностно-активных веществ, а затем полностью удаляют растворитель на вакуумном испарителе. Получают г суммарных липидов и растворяют их в трехкратном объеме (30 мл) метанол-ацетонового раствора (1:1) при +(5С и оставляют на ночь при -15°С. Полученный осадок отфильтровывают и промывают двумя ббъемами охлажденного до (-15) (-20)С метанол-ацетонового раствора (300 мл), выпаривают под вакуумом и получают 100 г сопутствующих липидов. Экстракт, содержащий убихинон, упаривают под вакуумом и полУчаютна этом этапе 40,7 г липидного остатка, содержащего убихинон. Наносят указанный липидный остаток в минимальном объеме гексана на колонку с кремниевой водной кислотой предварительно отмытой перегнанным метанолом и активированной при в течение 5 ч.

;

Сорбент берут в 10-кратном по весу к липиду количестве ( г кремниевой водной кислоты Si02.n ). Соотношение диаметра столба колон5 ки к его высоте 1: 4-1:5. Элюирование проводят десятикратным объемом (объем/вес) гексана, а затем бензола. Собирают фракции по 250-500 мл элюатов. Убихинон выходит с первой

О половиной порции бензола. Упаренные фракции объединяют, удаляют растворитель в вакууме и получают суммарный препарат убихинона г. После повторной хроматографической очи15 стки и двухкратной кристаллизации из абсолютного этанола получают 17,90мг убихинонаi в том числе 6,8 мг кристаллического вещества, или на 1 кг навески ткани 3,58 мл убихинона, в

20 том числе 1,36 мг кристаллического вещества (38% от общего выделенного убихинона).

Пример2„ В качестве сырья 25 используют печень сельдевой акулы. Навеску 25 кг измельченной печени акулы помещают в реактор на 100 л, приливают 20 л трихлорэтилена, 17,5 я 16%-ного раствора КОН в ме, таноле, содержащего 250 г пирогаллола. Проводят аналогично примеру 1 одновременно гидролиз и экстракцию материала, обработку экстракта соответствующими количествами воды, 2,5%-ного раствора НС в воде, упаривание до 1/10 (5,0 л) первоначального объема (5б л), промывание 2,5л метанолводным раствором (4:0, удаление растворителя на вакуумном испарителе. Получают 950 г суммарных липидов, отделяют 352 г сопутствующих липидов и 590 г липидного остатка наносят в гексане на колонку с 3 кг кремниевой водной кислоты., Элюируют последовательно 30 л гексана и 20 г бензола. Получают 35, г суммарного препарата убихинона. После повторной хроматографической очистки и двухразовой кристаллизации из абсолютного этанола получают 1б5,2 мг убихинона, в том числе 51 мг кристаллического вещества, или на 1 кг навески печени 6,6 мг убихинона, в том числе 2,04 мг кристаллического вещества (30,9% от общего выделен5 ного убихинона).

Эффективность извлечения убихи- нона по предлагаемому способу в дан