Способ очистки низкомолекулярных белков Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

(5 СПОСОБ ОЧИСТКИ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ БЕЛКОВ

Изобретение относится к химии белков и пептидов и касается получения чистых препаратов. Известен способ очистки низкомолекулярных белков путем сорбционной хроматографии их растворов с последующей элюцией продукта р . Однако известный способ длителен так как он состоит из трех стадий, первая - обессоливание белка гельфильтрацией на сефадексе или биогел вторая - концентрирование, которая включает сорбцию белка на ионообмен нике в требуемых условиях и элюцию белка раствором хлористого натрия в сокой концентрации, третья - обессоливание белка гельфильтрацией на сефадексе или биогеле. Цель изобретения - ускорение спо соба путем одновременной концентрации и обессоливания. Эта цель достигается тем, что пр осуществлении способа очистки низко молекулярных белков путем сорбционной хроматографии их растворов с последующей элюцией продукта, в качестве сорбента используют политетрафторэтилен, а элюцию ведут водным раствором этанола. . Пример . Раствор нейтротоксина I из актинии Homostichantes duerdemi (м.в. StiOO, 50 мкг/мл, 6000 мл) в 2 М хлористом натрии наносят на колонку с политетрафторэтиленом (1x20 см), уравновешенным водой. Элюцию проводят сначала 250300 мл дистиллированной воды, чтобы избавиться от следов соли, а затем белок элюируют 50 мл kO%-Horo водного этанола. Спиртовый раствор белка упаривают на роторном испарителе или диализом. Белок используют в растворе (15 мг/мл, мл)или лиофилизуют ,05 мТУкг. П р и м-е р 2. Раствор нейтротоксина 11 из актинии Homostichantus duerdemi (м.в. 5000, 1 мкг/мл, 10 мл) в 6м гуанидинхлориде наносят на колонку с политетрафторэтиленом {O. см), уравновешенным водой. После нанесения смеси гуанидинхлори элюируют 50 мл дистиллированной вод а затем белок - 30 мл Ю -ного этанола. Этиловый спирт удаляют упариванием на роторном испарителе или диализом. Белок используют в раство ре (2 мг/мя, мл) или лиофилизую LD( мг/кг. П р и м е р 3. Раствор токсина из Stoichactus hellanthus (м.в. 16000, 100 мкг/мл, 200 мл) в 2 М хлористом натрии наносят на колонку (1X10 см) с политетрафторэтиленом, уравновешенным водой. Элюцию проводят сначала 50 мл дистиллированной воды, а затем белок элюируют водным этанолом. Этиловый спирт удаляют увариванием или диализом.. Белок используют в растворе (1,5 мг/мл, ,5 мл)- или лиофил зуют. .-8 мг/кг. 5t Предложенный способ прост, высокая .емкость сорбента позволяет быстро концентрировать большие объемы разбавленных растворов и элюировать их небольшим количеством водного этанола. Формула изобретения Способ очистки низкомолекулярных белков путем сорбционной хроматографии их растворов с последующей элюцией продукта, отличающийс я тем, что, с целью ускорения способа путем одновременной концентрации и обессоливания белка, в качестве сорбента используют политетрафторэтилен , а ЭЛЮЦИЮ ведут водным растворо м этанола. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. The Tools Biochemisty, Ni-J. Т. Wiley and sons, 1977, PP- 385-388.