Способ определения эритропоэтина у животных-парабионтов Советский патент 1982 года по МПК A61B10/00 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭРИТРОПОЭТИНА У ЖИВОТНЫХ-ПАРАБИОНТОВ

Изобретение относится к биологии, частности к экспериментальной физи Ьлогии, и может быть, преимущественн использовано при изучении механизмов специфической гуморешьной регуляции эрйтропоэза на животных-парабионтах. Известен способ определения эритр позтина, заключающийся в установлении изменений количества эритроцитов и концентрации гемоглобина в крови интактного парабионта после эритропоэзстимулируквдего воздействия на партнера-парабионта Щ. Данный способ определения эритропоэтина имеет недостаток, выражакиций ся в том, что в эксперименте используются животные с нестабилизированньм зритропоэзом, а. это приводит к тсялу, что интактные парабионты реагируют на большую группу неспецифических факторов - вазоактивные вещества, па ргилетаболиты, гормоны v щ. Все это маскирует действие эритропоэтина и затрудняет оценку эффективности эритропоэзстимулирутащего воздействия на партнера-парабионта. Наиболее близким к предлагаемому является способ определения эритропоэтина на животных-парабионтах, включакхций этиропоэзстимулирующее воздействиена одно из животшлх-. парабионтов и последующее определение изменения числа ретикулоцитов в крови интактного парабионта 2 . Недостатком известного способа наряду с реакцией интактного парабионта на большую группу неспецифических факторов является низкая чувствительность к эритррпоэтину, позволяквдё1я давать лишь качественную оценку величины образования эритропоэтина. Цель изобретения --повышение точности способа путем исключения дей- ствия неспецифических факторов при эритропоэзстимулирующем воздействии. Для достижения указанной цели до эритропоэзстимулирукицего воздействия на парабионТа-партнера интактного парабионта подвергают двухкратной с интервалом в одни сутки трансфузии 80%-ной взвесью гомологичных эритроцитов с разовой дозой из расчета 3 мл на 100 г веса животного, а эритропоэзстимулирующее воздействие на партнера производят через сутки после последней трансфузии. Пример . Опыты проведены на 17 парах крыс линии Вистар. Парабионты были подобраны по полу и возрасту Наложение кожно-мышечного анастомоза выполнено под эфирным наркозом. По боковой поверхности туловища (.слева у правого и справа у левого пйрабионтов) произведен кожный разрез с иссечением участка кожи с подкожной клетчаткой в виде удлиненного овала (2x10 см), обнаженные собствен ные фасции с мышечно-апоневротическими образованиями сшиты по длиннику раны. Следующий ряд швов наложен по краю раны. Введено 500 тыс.ед J eнициллини. Через 8 дней после операции проведено определение эффективности кожно-мышечного анастомоза с помощью вещества индикатора, в качестве которого вводили полиглюкин. Об эффективности кожно-мышечного ана стомоза, судили по развитию у интактного парабионта отека акральных органов . Среди подготовленных таким образом крыс-парабионтов были выделены группы 1 и П (соответственно 9 и 7 .пар парабионтов), одна пара парабион тов вследствие нагноения кожно-мышечного анастомоза исключена из опыта. Для 1-ой группы использован известный способ, для П-ой - предлагае№лй. Согласно предлагаемому способу сн чала одному из парабионтов каждой пары крыс П-ой группы внутривенно ввели 80%-ную взвесь гомологичных зр троцитов в физиологическом растворе в количестве 3 мл взвеси на 100 г веса животного. Через 24 ч после это го произвели повторную трансфузию в количестве 3 мл взвеси на 100 г веса животного. Используемая доза эритроцитарной взвеси (3 мл/100 г) и временной интервал между ее введением (24 ч) установлены в контрольных опытах и вызывают увеличение количества эритроцитов в периферической крови - полицитемию на 75%, а также прекращени-е образования почечного эритропоэтина, что обеспечивает исключение воздействия неспецифических факторов на образование эритропоэтина. . . По прошествии 48 ч (экспериментально установленного временного ин.тервала, в течение которого имеющийс в крови парабионта эритропоэтин пс5лностью метаболизируется, а количество ретикУлоцитов в крови уменьшается до 0,31-0,1%) парабионты-партнеры П-ой группы были подвергнуты зри- тропоэзстимулирующему воздействию анемизированы (кровойускание 15% от объема циркулирующий крови с одно временным введением гомологичной плазмы в объеме, равном количеству ;взятой крови). Количество крови, взятое при кровопускании, как показали контрольные опыты, является минимильной пороговой величиной, вызывающей регистрируемое увеличение образования эритропоэтина. Аналогичному воздействию - анемизации были подвергнуты и парабионтыпартнеры 1-ой контрольной группы. После эритропоэзстимулирующего воздействия - анемизации парабионтов-партнеров 1 и П группы у интактных парабионтов 1-ой группы и парабионтов с эритроцитарной полицитемией П-ой группы определяли количество ретикулоцитов, сопоставляя их изменение с данными, полученными у этих же животных за 10 мин до анемизации их партнеров-парабионтов. В , группе 1 проведенная анемизация п рабионтов-партнеров не вызвала увеличения количества ретикулоцитов в крови интактного парабионта, что ложно расценивается как отсутствие зменения. количества эритропоэтина; В группе П проведенная анемизация парабионтов-партнеров вызвала в крови полицитемического парабионта.увеличение (Р.0,60б1) количества ретикулоцитов. Сопоставляя данные изменения числа ретикулоцитов у полицитемических парабионтов с показателями доз-реактивной кривой стандартного эритропоэтина, определяют количество эритропоэтина, поступившего в организм полицитемического парабионта от партнера-парабионта, у которого образование эритропоэтина было индуцировано кровопотерей - анемизацией. По сравнению с известным предлагаемый способ отличается высокой чувствительностью к эритропоэтину, позволяет определять эритропоэтин в малых количествах и исключает возможность действия неспецифических факторов, возникающих при эритропоэзстимулирующих воздействиях. Формула изобретения 1.Способ определения эритропоэ1;ина у животных-парабионтов, включаю- щий эритропоэзстимулирующее воздействие на одного из животных-парабионтов и определение эритропоэтина по количеству ретикулоцитов в крови интактного парабионта до и после воздействия на партнера-парабионта, отличающийся тем, что, с целью повышения точности путем исключения действия неспецифических факторов при эритропоэзстимулирующем воздействии, до эритропоэзстимулирую щего воздействия на парабионта-партнера интактного парабионта подвергают двухкратной с интервалом в одни сутки трансфузии гомологичных эритроцитов, а эритропоэзстимулирующее воздействие на парабионта-партнера проводят через сутки после последней трансфузий. 2.Способ ПОП.1, отличаК) щ и и с я тем, что, трансфузию

59540926

проводят 80%-ной взвесью гомологи-Источники информации,

чных эритроцитов с разовой дозойпринятые во внимание при экспертизе 3 мл взвеси на 100 г массы животно- 1. Арх,катал., 1947, 3,48. го.2. Blood., 1950, 5,372. .