Изобретение относится к медицине и мэжет быть использовано при диагностике сепсиса.
Известен способ идентификации бактерий рода Citrobacter путем посева исследуемэго материала на элективную и дифференцирующую среды с последующим пересевом и инкубированием посевов на накопительной среде, а затем на среде, содержащей в качестве ферментируемого субстрата малоната натрия, и идентифицирующие кскомле бактерии по изме нвтю окраскк среды в присутствии индикатора.
Однако известный способ длителен, так как предусматривает пересев на накопительные среды и культивирование на среде с малонатом натрия в течение 18-24 ч (до 3 сут).
Целью изобретения является ускорение способа.
Поставленная цель достигается тем, что, согласно способу идеитификации бактерий рода Citrobacter, включающему посев исследуемого материала на злективную и дифференцируюП1ую среды с последующим пересевом и инкубированием чистой культур на питательной среде, содержащей фер-.
ментируекый Субстрат, и идентификацией бактерий по изменению окраски среды, культуру с элективной и дифференцирующей сред непосредственно пересевают на среду, содержащую, г/л дистилированной воды: DL-фенилаланин 2,3-2,5 и NaCI 8,0-8,5, и инкубируют при 40-45 0 в течение 3,5-4 ч.
10
Способ осуществляют следующим образом.
Материал от больного или из объектов .внешней среды засевают в питательные среды для первичного выделения
15 (среды Эндо, Плоскирева, Левина, висмут-сульфитная среда и среды обогащения) , инкубируют 18-24 ч при в термостате, затем часть колонии, подозрительной на Citrobac€ r,
20 инокулируют одновременно в 2 ряда лунок плексигласовой пластины (или бактериологические пробирки) с 0,2 мл питательной среды, предварительно автоклавированной при 112 С
25 в течение 15 мин, состава, г/Л1
DL-фенилаланин . 2, 3-2,5 Натрий хлористый 8,0-8,5 Диcтиллиpqвaннaя водаОстальное
30 дн среды 7,4-7,6.
Для подаделачивания среды используют 0,1 н. NaOH. Инкубсщию посевов исследуемых культур проводят в термостате при 40-45 С.
Необходимость инокуляции колонии одновременно в 2 ряда лунок связана с тем, что инкубация представителей трибы Proteeae того же семейства при указанном режиме через 10-15 мин вызывает деэаминирование фенилаланина питательной среды. Внесение в среду хлорного железа вызывает химическую реакцию и среда приобретает сине-зеленую окраску.По истечении 10-15 мин инкубации в первый ряд лунок вносят по 1 капле раствора индикатора (10%-ый водный раствор хлорного железа). Результаты учитывают в течение 1-2 с nocjie внесения индикатора. При наличии в лунках представителей трибы Proteeae питательная среда приобретает сине-зеленую или интенсивно зеленую, окраску.
После учета результатов палетку (пробирки) инкубируют еще 3,5-4 ч в тех же условиях. Затем в лунки, в которых были получены отрицательные результаты на присутствие бактерий трибы Proteeae, вносят по 1 капле индикатора и уч:итывают результаты. При наличии в лунках (пробирках) культур Citrobacter питательная среда приобретает цвет интенсивно сине-зеленый, изумруднозеленый или светло-зеленый. Способ обеспечивает 100% положительных реакций.
Питательная среда на основе фенилаланина может быть приготовлена в малых объемах (10-100 мл5 ех tempore. Для этого соответствующие навески ингредиентов вносят в дистиллированную воду, предварительно подтитрованную 0,1 н. NaOH, и нагревают на пламени горелки до полного растворения. .Используется среда после охлаждения.
Использование изобретения позволяет ускорить способ идентификации бактерий рода Citrobacter -(30 ч) , дифференцировать эти микроорганизмы от других представителей семейства Enterobac eriaceae, Pseudomonadeae и Vibrionaceae без дополнительных тестов , а также идентифицировать одновременно и представителей трибы Proteeae.
Формула изобретения
Способ идентификации бактерий рода Citrobacter путем посева исследуемого материёша на элективную и дифференцирующую среды с последующим пересевом и инкубированием чистой культуры на питате гьной среде, содержащей ферментируемый субстрат, и идентификацией бактерий по изменению окраски ,среды, отличающийся тем, что, с {хелью ускорения способа, культуру с элективной и дифференцирующей сред непосредственно пересевсцот на среду, содержащую, г/л дистилированной воды: DL-фенилаланин 2,3-2,5 и NaCI 8,08,5, и инкубируют при 40-45 С в течение 3,5-4 ч.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Методические рекомендации по идентификации бактерий рода цитробак0 тер. М., МЗ СССР 1973, с. 4-9.
