Способ определения активатора плазминогена Советский патент 1983 года по МПК A61K35/14 G01N33/48 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА

1

Изобретение относится к медицине, а именно гематологии.

Известен способ определения активатора плазминогена в плазме путем разведения плазмы водой, осаждения фибринолитически активной фракции (ФАФ) уксусной кислоты, растворения осадка ФАФ в обратном буфере, его инкубации на фибриновой пленке 1.

Однако известный способ не позволяет с точностью определить активность активатора плазминогена в плазме кролика в связи с использованием условий тестирования, не обеспечивающих выделение ФАФ.

Целью изобретения является повышение точности определения активатора плазминогена.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения активатора плазминогена в плазме путем разведения плазмы водой, осаждения ФАФ уксусной кислотой, растворения осадка ФАФ в обратном буфере, его инкубации на фибриновой пленке, отличительной особенностью является то, что осаждение ФАФ осуц ествляют при рН 5,7-5,8, инкубацию осуществляют в течение 48-50 ч.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. Кровь, берут у ненаркотизированных животных из сердца, используя обычные медицинские шприц и иглы.

5 Кровь смешивают с антикоагулянтом - 3,8°/о-ным цитратом натрия в соотношении 9:1. Центрифугируют при 2000 оборотах 10 мин при комнатной температуре на центрифуге типа РУ-180. Плазму сразу отсасы,0 вают в чистую, сухую пробирку. Выделение ФАФ проводят при использовании 0,5 мл плазмы (меньшие или большие объемы не позволяют выделить ФАФ) и разведении указанного объема дистиллированной водой в интервале 1:16-1:20 (разведения вы15 ше или Ниже указанных не позволяют выделить ФАФ).

Оптимальным разведением является 1:18 ( 19).

К плазме, разведенной 1:18 (19), по капля.м добавляют 1%-ную уксусную кислоту для получениия рН 5,, при котором и происходит осаждение ФАФ кролика (рН выше или ниже указанного интервала не обеспечивает выделение ФАФ).

Оптимальным является рН 5,7.

Раствор тщательно перемешивают до установления твердого значения рН.

Пробу инкубируют в холодильнике при 4°С в течение 20 мин.

Далее пробу центрифугируют при 3000 оборотах 7 минут.

Супернатант тщательно и осторожно сливают. Остатки супернатанта удаляют установлением пробирки в вертикальное положение на фильтровальную бумагу в течение 1 мин.

Осадок, содержащий фибринолитически активную фракцию, растворяют в 0,5 мл

N OT-IOH O боратного буфера (0,25% в 0,85% Nagi).

Сравнительная таблица определения активатора плазминогена известным и предлагаемым способом

Из таблицы видно, что предлагаемый способ повыщает диагностическую точность определения активатора плазминогена.

Способнеобходим при моделировании патологий, при которых нарущен антитромбогенный потенциал крови, а также для анализа вновь создаваемых антитромботических препаратов на этапе доклинического

Для определения активности активатора плазминогена, содержащегося в ФАФ, на ненагретую и гретую (30 мин при 86°С) фибриновую пленку микропипеткой наносят 0,05 мл раствора ФАФ.

Пробы ставят в термостат при 37°С.

Результаты учитывают через 48 ч (с целью преодоления толерантности бычьей фибриновой пленки к ФАФ кролика).

Наличие активатора плазминогена устанавливают по разнице площади зон лизиса (в мм) нагретой и гретой фибриновой пленки.

Предлагаемый способ позволяет точно определить активатор плазминогена.

изучения с целью повыщения точности оценки специфического действия препарата.

Формула изобретения

Способ определения активатора плазминогена в плазме путем разведения плазмы водой, осаждения фибринолитически активной фракции (ФАФ) уксусной кислотой, растворения осадка ФАФ в боратном буфере.

56

его инкубации на фибриновой пленке, оглн-1. Андреенко Г. В., Суворов А. В., Сечающийся тем, что, с целью повышенияребрякова Т. Н. Зависимость фибринолититочности определения активатора плазмино-ческой активности и степени осаждения гена, осаждение ФАВ осуществляют при рН эуглобулиновой фракции плазмы крови не 5,7-5,8, инкубацию осуществляют в те-которых животных от значения рН. «Физиочение 48-50 ч.5 логия и биохимия животных. Научные докИсточники информации,лады высшей школы. 1973, И, с. 45-48 принятые во внимание при экспертизе(прототип).

990227