Способ активации плазминогена Советский патент 1977 года по МПК C12D13/10 

Изобретение относится к способам актТа нации тромболитических препаратов и может быть применена в медицине, фармакологии, физиологии. Известен способ активации плаэминогенй стрептокиназой, выделенной из гемолитичео кого стрептококка, путем введения фермента в организм, либо смешением его с плаз- миногеном IJ. Однако плазминоген, полученный извест ным способом, обладает повышенной токсичкостью. С целью снижения токсичности плазминогена по предлагаемому способу в качестве ш тйватора применяют препарат протеолитических ферментов, выделенных из гриба TpnchottieciuTn t seafnФермент Tnichottieciuw розеитп применяют для активации плазмнногена в активный фибринолитический фермент - плазмин. Для этого смешивают 4%-ный раствор фермента с таким, же раствором плазминогепа в соотношении 1:1 - 1:7 и инкубируют при 2228 С в теченне 2-х ч. Пример 1. Активацию плазминогена в организме животных проводят путем введения препарата из Tcictioiljeciutn roseUttt I внутривенно в количестве 15 мг на 200 г веса животных. До введения и спустя 10 мин после введения определяют фибринолитическую активность крови, которая возрастает благодаря активации. естественного плазминогена в русле крови. Для определения кровь центрифугируют 10 мин при 2ООО об/мин с охлаждением. Плазму осторожно отбирают. Из плазмы получают эугл обули новую фракцию, для чего 0,2 5 мл плазмы добавляют к 4 мл дистиллированной воды, подкисленной до рН 5, 3%-ной уксусной кислотой. Смесь оставляют при комнатной Tetvmepaiype на Ю мин. После центрифугирования при тех же условиях надосадоччую жидкость сливают, остатки жидкости удаляют фильтровальной бумагой. К осадку добавляют 0,25 мл О,01%-ного тетрабората натрия и растворяют в течеш е 4О мин йри комнатной температуре. В полученном растворе эуглобулинов определяют активаторную активность по разчо(;ти зон лизиса га прогретых и непрогретых фибриновых пластинках, наносят 0,03 мл испытуемого раствора, получают большие по величине зоны лизиса на непрогретыу фибриновых пластинках вследствие наличия в них плазминогена, который активируется в присутствии препарата из Тр;- oseoтп Пример 2. Активййию плазминогена вне организма получают при инкубации смеси плазмичогена с раствором трихолизина, {препарата из TMctiothuciu-m PoSeurrt}, Полученная смесь приобретает способность пиэировать образованные сгустки фибрина. К 4 МП 4%-ного очищенного раствора плазминогена добавляют Э, 5 мл растsopa трихолизина. Смесь инкубируют в течение, 30 мин при 24-28°С при рН 7,2 7,6. Затем 0,2 мл активированного плазминогена смешивают с 0,2 мл 0,03%-ного раствора фибриногена и 0,1 мл тромбина и 0,3 мл физиологического раствора. Смесь помещают в водяную баню при 37°С, в течение 5-7 мин наблюдают растворение сгуст ка, В случае использования неактивированного плазмцногена раствогание сгустка не происходит, а при испол1 зовании смеси трихолизина без плазминогена растворение сгустка происходит в течение 40 мин, Предлагаемый способ является простым и эффективным и позволяет проводить активацию плазминогена в организме и вне его и не оказывает побочного действия на животных. Формула из -Обретения Способ активации плезминогена с помощью протеолитических ; эрментов микробного происхождения,; отличающийс я тем, что, с целью снижения токсичности, в качестве активатора применяют препарат протеолитических ферментов, выделенных из гриба Tfidio.heciu-m roseurnИсточники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1. Atrr. I-CoirdioB. 6,2, I960, с. 387.