Способ получения фракций,содержащих гидроперекиси фосфатидилэтаноламина Советский патент 1983 года по МПК C07C179/02 C07F9/10 

Изобретение относится к биологи- ческой химии, а именно к способам по лучения биологически активных вещест принимающих участие в мембранных изменениях различных физиологических процессов.. Известен способ получения фракций содержащих гидроперекиси фосфатидилэтаноламина, включающий окисление суспензии фосфатидилэтаНоламина в бу ферном растворе с помощью прооксидан тов Однако известный способ не обеспечивает достаточно высокого выхода целевого продукта. Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения фракций, содержащих гидроперекиси фосфатидилэтаНоламина, включающему окисление суспензии фосфатидилэтанол амина в буферном растворе, окисление суспенз ИИ фосфатидилэтaнoлa Iинa проводят в присутствии липоксигеназы в концентрации 3-1СГ -5-10 мг/мл при и рН 7,8-8,0 при постояннойпродувке кислородом с последующе экстракцией липидов смесью растворителей хлороформ-метанол, растворением липидов в хлороформе и выделением целевого продукта тонкослойной хроматографией. П м е р 1. 100 мг ФЭА суспендируют в 100 мл буфера трис-HCl-NaCI (рН 7,8), охлажденного до с. В суспензию липидов добавляют 3 мг фермента липоксигеназы, окисляют в течение 30 мин при постоянной продувке кислородом на водяной бане с температурой 4с. После окисления липиды экстрагируют пятикратным объемом смеси растворителей хлороформ-метанол (2:1) в делительной воронке. После расслаивания хлороформную фракцию, содержащую липиды, отбирают и растворители отгоняют на роторном испарителе. Выход липидов, представляющих собой смесь неокислившегося ФЭА и его гидроперекисей равен 70 мг. После растворения липидов в 3,5 мл хло-. роформа пастеровской пипеткой наносят липидил на нижний край хроматографической.пластинки, покрытой тонким слоем силикагеля, пластинки помещают в хроматографиче-скую банку, содержащую 63 МП смеси раст-ворителей хлороформ: мет анрл: 28% NH40H (объемное соотношение 13:7:1). После хроматографического разделения и последующей . трехкратной экстракции гидроперекисе смесью хлороформ: метанол (2:1) выхо липида, обогащенного гидроперекисями . на 30%, равен 5 мг. Пример 2. Осуществляют аналогично примеру 1, но окисление проводят при рН буфера 8,0, температура буфера и водяной бани при окислени-и . К суспензии липидов добавляют 5 мг липрксигеназы и окисляют в тече ние 20 мин. 9 этих условиях выход липида, обогащенного гадроперекися-. ми на 35% равен 8 мг. Контроль за частотой фракции гидроперекисей ФЭА проводят с помощью УФ-спектрофотометрйи.. Экспериментальные исследования по изучению биологической а стивности гидроперекисей фосфатидилэтаноламина показь1вают, что данное вещество оказывает влияние на мембраны саркоп аз матичес«ого ретикулума клетки путем встраивания в мембраны и формировани каналов, через которые происходит утечка ионов Са, протонов. Таким образом, предлагаемый спосо позволяет получать фракцию, содер жащую гидроперекиси фосфатидилэтаноламина, которые могут быть использова ны при исследовании действия первичных продуктов перекисного окисления фосфатидилэтаноламина на различные мембраны клеток и роли перекисного окисления мембранных фосфолипидов в осуществлении ряда мембранных функций. По сравнению с прот )типом продлагаемый способ получени I фракций, СОфосфат идилэ т адержащих гидроперекиси ноламика, позволяет су ;ественно повысить (до 30-35%) накоп 1ение гидроперекисеи, благодаря ферме 1тативном;/ окислению фосфолипида 1, кроме того, получить более высокую степень очистки от примесных продук ков. Формула и3обрат Sния Способ получения фр 1кций, содер;фатидилэ т анолжащих.-гидооперекиси фо амина, включающий окис 1ение суспензии фосфатидилэтаноламина ) буферном ) щ и и с я растворе, о т л и ч а тем, что, с целью увел 1чения выхода целевого продукта, оки шение суспензии фосфатидилэтанолам ша проводят в присутствии липоксиген 13Ы в концентрации 3-1(Г -5-10- мг1Л при O-fc и рН 7,8-8,0 при постоян юй продупке й экстршсцией кислородом с последующ телей хлоролипидов смесью раствор Форм-метанол, растворе 1ием пилшцов в хлороформе и выделение f целевого продукта тонкослойной .хро laTO {рафией. Источники инфор принятые во внимание п и экспертизе 1. Владимиров Ю.А. I Арчаков A.M. Первкисное окисление л шидов в (5иоI., Наука, логических мембранах, il972.