Способ получения амилолитических ферментных препаратов Советский патент 1984 года по МПК C12N9/34 

Изобретение относится к спиртовой и микробиоло1ической промьшшенности, а именно к снособам получения амннолитических ферментных препарат-овИзвестны способы получения амило литическнх ферментных препаратов; предусматривающие ультрафильтрацию культуральной жи,цкости с последующей сушкой полученного кондентрата распылением l j , Из известных способов наиболее близким по технической сущности является способ получения амилолитических ферментньк гфепаратов предусматривающий глубинное культивиро загпш продудентов5 отделение биомас Cii от культуральной жидкости и кокцентрированЕШ выпариванием до cpipoТообразпого состояния, или высушиванием на распьшительной сушилке с поллчеиием поропгкообразного препаpaia или ультрафильтрацией с полгучением кондентра.та,, содержащего фер гйяпть 2 , 11е,;:г,остатком этого способа являет ся то,, что Б культуральной жидкости остаются caxfipa; глюкоза, фруктоз.;., сахароза., мальтоза, нв.ляюиитеся средоа ;гг: развития иосторсшлей микрофлорЬ, -ТО затруггняет процесс копцецтриг1г; ания звицv большой в ;зкос-Цел: изобретении): -- ут:- лмзапня са ::.ароь ку.пьтуральной кидкостм с полу чен.и ег-.; A.fpK этом наряду с ферментны-ми п1) спирта., а так/хо лозы лцеила удельной активности делелых |,РОАУКТОВ, Для дос7: ;;1се1И1Я зтой дели, Р. спо-собе получения ами,;чолит1-1ческих ферме11.,1х iiperiapaTOB, предусматриваю(п,ек глубигкое культив::.рование iipoдудентов с последугадим коидентрироьааием ультраёильтрадией пли зьптариванием,,, согласно 1з:збрете л-ип иол ченную культуральну;о жидкость с био массой или без нее сбраживают спиртовымя дрожжами Sac.iharomyces cerev до содержап -; оста очиьпс Сахаров Os5-1% и кодч;:-:трации спирта 3-5%,, а конт1,еятрированию тгодверга-,;iT :е:;ме,ТЯО Спиртав1лй uaciBop с-БЫ :але11ие1-,1 спирта из раст.ворг.о :е;сс,-гндуется при концеитр11роваi-Hi-i ул:олрафи.пьтращ1ей сяирт выделят из у- ьтрафильтрйтя парегонкой. При 52 ; онцентрировании -выпариванием можно выделение спирта осуществлять одновременно с концентрированием ферментного препарата о Сущность предлагаемого способа заключается в следуюц.;ем. Осуществляют глубинное культивирование микроорганизмов-продуцентов ам1-шолитических ферментов на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и необходимые минеральные соли, при температуре 30:33°С и рИ 3,8-5,,О в течение 72-144 ч до получения культуральной жидкости, содержаи1ей амилолитическую активность 5-25 ед ЛС в 1 мл и глюкоамилазпуи активность 20 - 200 ед ГлС в 1 t..n , в культуральной жидкости после опрсде.пемия биомассь или ле отделяя последнюю вводят дрожжи Saccharomyc;e,s cerevj.siae и сбраживают в течение 24 ч до содержания остаточных сахароз 0.5-1% и кондентрации спирта 3 - ,э об,%„ После этого получен- iiyio ферме Т1{о-слиртовую смесь KO)i11еЕ триру пт путем ультрафильтрации через адетатцеллюлозные мембраны с получе;лте | ультрафильтров, содержаПД1Х спирт., и концентрата, содержац.его фермент Спирт опреде.17.чют из ультрафильт р а т а п е р е г о н к о и 5 а к о и ц е н q- р и D о в а н ,ый фермент используют на технологические нужды. При концентрировании -; ;париванием спирт выделяют непосредственно в процессе выпаривания. Р о Осуществляют глуЛзр, ergillus avaniorl - 465 па кукуруз юм сусле с концентрацт1ей сухих веществ 16-20 Б, Получе ная купьтуральная жидкость имеет рлюкоамилазну о активность ГлС 150 е.ц/мЛэ сбраживаемых Сахаров 8 ,5% Отделяют биомассу фильтрованием,, Затем в культуральную жидкость добавляют ,дролиеи Saccijaromyces сегеv.isiaGj сбра ::;1Бают -культуральную идкость в течение 24 ч .до содерания сахарчзв до 0,9% и концентра,ии спирта до 353 об,%. Далее ферментно-сп.чртовый растэр концентрировали ультрафи.пьтраизй через ацетатцел.люлозную мемра-у типа УМ--100 ВладилорЧ Полуенный Koi-щентрат содер кит фермент люкоамилазы с активностью 600 ед ГлС 3 в 1 г препарата, который испбльзуется на осахаривание. Ультрафильтр содержит спирт концентрацией 2,5об который направляют на перегонку. Пример 2, Осуществляли глу бинное культивирование Asp awamcH ri-466 на среде следующего состава Кукурузная мука Кукурузный 0,7 экстракт 0,2 Мел 0,15-0,2 Магнезит Аммиачная се0,75 литра До 100 Барда Полученная культуральная жидкос имеет: Амилолитическую активность (АС) 10 ед/мл Глюкоамилазную активность (ГлС) 30 Остаточных Сахаров . 6,8% Биомассу не отделяют от культуральной жидкости, а всю ее сбраживают. Вводят дрожжи Saccharomyces cerevisiae и сбраживают смесь в те чение 22 ч до содержания остаточных Сахаров 0,5% и концентрации сп та 3,0 об.%. Затем смесь фильтруют и ферментно-спиртовый раствор концентрИРуют выпариванием. Получают концентрат с активност по АС 100 ед/мл и по ГлС 300 ед/мл, Спиртовый раствор соб рают в спиртоловушке и конденсирую В предлагаемом способе утилизируются сахара культуральной жидкос ти с получением при этом наряду с 5 также повьшается удельная активность ферментных препаратов. Это достигается совокупностью указанных в формуле признаков, а именно сбраживанием культуральной жидкости спиртовыми дрожжами с получением концентрата, содержащего ферментные препараты, и ультрафильтрата, содержащего спирт. Культуральная жидкость поступает на концентрирование очищенной от моно- и дисахаров, что предотвращает процесс от инфицирования, так как благодаря наличию этих Сахаров (глюкозы, фруктозы, сахарозы, мальтозы и т.д.) создаются благоприятные условия для развития посторонней микрофлоры и потерям ферментативной активности. В связи с уменьшением исходной концентрации сухих веществ в куль- туральной жидкости за счет сбраживания углеводов создаются условия для получения концентратов с более высокой удельной активностью. В таблице приведены сравнительные данные активностей ферментных препаратов прототипа и предлагаемого способа, а также моно- и дисахаров в культуральной жидкости. Экономический эффект за счет получения дополнительного количества спирта составляет около 30 тыс. руб по заводу производительностью 2000 дал спирта в сутки. При осуществлении предлагаемого способа наряду с получением дополнительного количества спирта увеличивается активность ферментных препаратов и

Содержание моно- и дисахаров в культуральной жидкости, %

Активность препаратов АС, е.д/мл

0,5-1,0 130