Штамм патогенных лептоспир RаттUS NoRVeGIcUS, используемый для получения поливалентной противолептоспирозной вакцины Советский патент 1991 года по МПК A61K39/02 C12N1/10 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к производству противолептоспирозной вакцины.

Цель изобретения - получение штамма лептоспир серовара Copenhagen из серологической группы Icterohaemorrhagiae, обладающего высокой антигенной и имунной активностью с известной серовариантной и серогрупповой принадлежностью.

Штамм лептоспир Rattus norveglcus 382-В изолирован в 1975 г. в Краснодарском крае из почки серой крысы и принадлежит к серовару Copenhagen серогруппы Icterohaemorrhagiae.

Штамм лептоспир Rattus norvegicus 382-В депонирован в коллекции микроорга- низмов НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи под Мг 356/461 и характеризуется следующими признаками.

Морфологические признаки.

При микроскопии в темном поле, при увеличении Х400 представляют собой се-, ребристо-белые плотные спирали, заканчивающиеся крючками на концах, длина лептоспир 5-10 мкм, диаметр 0,1-0,15 мкм.

Физиологические свойства.

Растут в жидких сывороточных питательных средах Фервоорт-Вольфа, Терских, подвижны, характерное вращение вокруг

О

ю

ю о

своей оси и перемещение без полярной дифференциации. Максимального накопления 7.107-8.10 лептоспир в 1 мл питательной среды с рН 7,2-7,4 достигает на 6-8 день при (+28) - (+30)°С. Максимальное ко- личество жизнеспособных клеток наблюдается на 4-5 день роста культуры.

Антигенные свойства.

Штамм лептоспир R. norveglcus 382-B идентифицирован методом монофзктопно- го антигенного анализа и принадлежит к серовару Copenhagen сурологической группы Icterohaemovehagiae. Антигенность штамма лептоспир R. norvegicus 382-В определяли и сравнивали с вакцинным штам- мом Крыса 17 в опыте на кроликах. Пятидневную культуру каждого штамма летоспир с максимальным наполнением жизнеспособных клеток вводят трем кроликам весом 2,5-3 кг трехкратно, внутривенно в дозах 5 -107, 108,108лег1тоспир с интервалом два дня. На 10-й день после последней иммунизации у всех кроликов забирают кровь и в сыворотках определяют реакцией микроагглютинации и лизиса концентра- цию дМ и Igl - антител к гомологичному и 13 диагностическим штаммам лептоспир.

При этом устанавливают, что антиген- ность штамма лептоспир R. norvegicus 382- В выше, чем у вакцинного штамма Крыса 17 не менее чем в 10 раз.

Иммуногенные свойства.

Иммуногенность штаммов лептоспир исследуют методом пассивной защиты на золотистых хомячках весом 25-30 г.

Гомологичную от трех кроликов пулиро- ванную иммунную сыворотку с исходной концентрацией антител 1:30000 в объемах 0,05; 0,1; 0,5; 1,0 мл внутрибрюшинно вводят золотистым хомячкам. На каждую дозу используют по шесть животных. Через 2 ч после инъекции имунных сывороток хомячков инфицируют культурной лептоспир штамма R. norvegicus 382-B в дозе 250 LD +50.

Вирулентность контролируют и определяют LDso внутрибрюшинным заражением. Животным второй группы за 2 ч до инфицирования внутрибрюшинно вводят 1,0 мл сыворотки нормального кролика,

В результате сравните. но го анализа протективной активности иммунных сывороток выявляют, что в дозе 0,05 мл иммунная сыворотка к штамму R. norvegicus 382-В защищала практически всех инфици- рованных гомологичными лептоспир.ами животных от гибели, в отличие от сыворотки к вакцинному штамму Крыса 17, который только в дозе 0,5 мл проявляет свои защитные свойства.

Пример. Для получения поливалентной лептоспирозной вакцины используют штаммы лептоспир 4-х серологических групп - Pomona-Бронницз вода и Крыса- 223; grlppotyphosa - Суханов и Корнилов; Icterohaemorrhagiae - 853-Одесса-В и. R. norvegicus 382-B; Hebdomadis-Hebdornadis и 3705.

Каждый штамм выращивают на среде Герских отдельно до операции инактивации. Первоначально рост штаммов лептос- пир проводят в пробирках на среде с 5%-ным содержанием инактивированной сыворотки кролика. По истечении 4-5 сут проводят рассев лептоспир из пробирок по 40 мл в матрицы со средой в количестве 0,6 л, содержащей 2% инактивированной кроличьей сыворотки. По истечении 4-5 сут проверяют количественный и качественный рост штаммов лептоспир, делают посев на стерильность. Лептоспиры из стерильных матрацов вновь засевают в бутыли со средой в количестве 1,5л, содержащей 2% кроличьей сыворотки. На 4-5 сут проверяют количественный и качественный рост лептоспир и проводят посев на стерильность и внось засевают в бутыли со средой в количестве 1,5 л.

На 4-5 сут проверяют качественный и количественный рост микробной массы в бутыли и проводят посев на стерильность. Выращенные лептоспиры инактивируют на водяной бане в течение 30 мин при 56°С. По истечении времени добавляют фенол до 0,3% содержания.

Далее инактивированные штаммы, содержащие 7.10 -8.10 лептоспир в 1 мл в равных соотношениях сводят в одну емкость. Отконтролированный полуфабрикат разливают, запаивают, затем проверяют на стерильность, безвредность, физические свойства. Полученные результаты вносят в паспорт.

Полученный препарат используют для профилактики людей от лептоспирозной инфекции.

Более высокая антигенность и иммун- ногенность позволит использовать штамм 382-В при производстве поливалентной противолептоспирозной вакцины вместо применяемого сейчас при изготовлении этого препарата нетипированного штамма Крыса 17 серогруппы Icterohaemorrhagiae. Формула изобретения Штамм патогенных лептоспир Rattus norvegicus НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи № 356/461, используемый для получения поливалентной противолептоспирозной вакцины.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к производству противолептоспирозной вакцины. Цель изобретения - получение штамма лептоспир серовара Copenhagen из серологической группы Icterohaemorrhagiae, обладающего высокой антигенной и иммуногенной активностью с известной серовариантной и серо- групповой принадлежностью. Штамм выделен из почки серой крысы и депонирован в коллекции микроорганизмов НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи под Ms 356/461. Антиген- ность Штамма 382-В определяют,в опытах на кроликах. Установлено, что антигенность штамма 382-В выше, чем у вакцинного штамма Крыса 17 не менее чем в 10 раз. Иммуногенность штамма исследуют методом пассивной защиты на золотистых хомячках массой 25-30 г. В результате сравнительного анализа лротективной активности имунных сывороток выявлено, что им- муногенность лептоспир штамма 382-В в 10 раз выше, чем вакцинного штамма Крыса 17. w &