СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИДАНТОИНА, 1-АМИНОГИДАНТОИНА, ФУРАДОНИНА, ФУРАГИНА Российский патент 1994 года по МПК G01N30/90 

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано при определении содержания гидантоина, I-аммогидантоина фурадонина, фурагина в чистом виде, в смесях, в лекарственных формах, с применением хроматографических методов разделения, в частности тонкослойной хроматографии (ТСХ) в практике контрольно-аналитических лабораторий заводов, в аптеках. Так Rodes E. E. и др. в статье: "Microchеmical test Por hydantoins and barbiturate hgdantoin mixtures" - microchem I. (-1972-17-N5-р. 528-539 используют методики качественного определения гидантоина и его производных цветными и микрокристаллическими реакциями: реакция Дилле-Конпаньи, заключающаяся в том, что к одной капле исследуемого образца добавляют 2 капли 0,1% -ного раствора ацетата кобальта в абсолютном метиловом спирте и 1 каплю 5% -ного расствора изопропиламина в абсолютном метаноле. При микрокристаллической реакции Дэвиса реактивном служит 5% -ный раствор этилендиамина в 10% -ном растворе CuSO₄, окраску наблюдают в поляризованном свете. При микрокристаллической реакции Вагнааре к 1 капле образца на предметном стекле добавляют этилендиамин и 3% -ный раствор СuSO₄, образовавшиеся кристаллы рассматривают при увеличении 100 и другие. В книге Р. Полюдек-Фабини и Т. Бейриха "Органический анализ" //-Л. Химия-1981-с. 230 приведена реакция Цвиккера, в которой к 1 мл 1% -ного раствора производного гидантоина (фурадонин в диметилформамиде) прибавляют 2 мл дистиллированной воды и 6 капель 1% -ного раствора CuSO₄, затем 4 капли пиридина и 3 мл хлороформа, встряхивают, слой хлороформа окрашивается в зеленый цвет.

Недостатком этих способов является невозможность количественного определения содержания гидантоина и его производных в субстанциях, лек. формах, невысокая чувствительность, малая селективность.

Наиболее близким к предлагаемому по техническому решению и достигаемому результату является способ, преджложенный А. С. Квач, И. П. Павлик, О. О. Новиковым Способ количественного определения гидантоина и его производных 01. N 21/78 N 4771998/28-25/151401/ от 19.12.89г. заключающийся в обработке анализируемой пробы цветореагентом, в качестве которого используют 0,2% -ный раствор хромотроповой кислоты, полученную смесь нагревают при 170^оС в течение 4-5 мин и измеряют оптическую плотность образующегося раствора в диапазоне длин волн 530-560 нм. Способ характеризуется невысокой чувствительностью по сравнению с предлагаемым (см. табл. 15)
Целью изобретения является повышение чувствительности и селективности определения гидантоина и его производных. Поставленная цель достигается тем, что анализируемую пробу, содержащую гидантоин, 1-аминогидантоин, фурадонин, фурагин, предварительно наносят на стеклянную пластинку для тонкослойной хроматографии, хрооматографируют, используя в качестве подвижной фазы смесь хлороформа с метанолом, хлорируют свободным хлором, обрабатывают раствором иодида калия в этиленгликоле, полученный окрашенный продукт соскабливают в химический стакан, разбавляют водой, а в качестве цветореагента используют N, N-демитил - n-фенилдиамина дигидрохлорид.

Сопоставительный анализ заявляемого решения с прототипом показывает, что заявляемый способ отличается от известного тем, что анализируемая проба предварительно наносится на пластинку для тонкослойной хроматографии, хроматографируется, в качестве подвижной фазы используется смесь хлороформа с метанолом, хлорируется свободным хлором, опрыскивается раствором иодида калия в этиленгликоле, полученный окрашенный продукт соскабливают в химический стакан, разбавляют водой, а затем обрабатывается раствором N, N-деметил-n-фенилдиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте, то есть заявляемое техническое решение соответствует критерию "новизны".

Сравнение заявляемого решения не только с прототипом, но и с другими техническими решениями в данной области химии позволило выявить в них признаки, отличающие данное решение от прототипа применением нового реагента N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого решения критерию "существенные отличия". Предполагаемое техническое решение позволяет селективно и с высокой точностью определять производные гидантоина: в чистом виде по R_f, в смесях по R_f свидетелей. Сравнительные характеристики предполагаемого метода с прототипом приведены в табл. 15. Способ осуществляется следующим образом.

П р и м е р 1. Построение калибровочного графика для фотометрического определения гидантоина.

Около 0,01 г порошка гидантоина (точная навеска) количественно переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, прибавляют 80,0 мл дистиллированной воды и нагревают на кипящей водяной бане до полного растворения. После охлаждения объем по- лученного расствора доводят до метки водой и перемешивают. Получают стандартный раствор гидантоина, в 1 мл которого содержится 100 мкг гидантоина.

На линию старта пластинки для тонкослойной хроматографии, покрытой слоем селикагеля марки КСКГ, предварительно обработанной хлороформом и высушенной в сушильном шкафу при 100^оС в течение 1 ч, наносят 5,0; 10,0; 15,0; 20,0; 30,0 мкг гидантоина. После подсушивания зон хроматограмму помещают на 1 мин в камеру для хроматографирования, начыщенную парами хлора, который получают действием концентрированной соляной кислоты (6 мл) на 2 г перманганата калия. Затем избыток хлора сдувают с пластинки воздухом и хроматограмму опрыскивают 3% -ным раствором иодида калия в этиленгликоле, пока слой селикагеля станет явно увлажненным. Полученные окрашенные продукты вместе со слоем сорбента площадью 1 см² соскабливают и переносят в химические стаканы, в которые предварительно вносят по 5,0 мл дистиллированной воды, перемешивают. Затем в каждый из стаканов, содержащих раствор гидантоина, прибавляют по 1,0 мл 1,0% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте и перемешивают. Полученные окрашенные растворы фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и измеряют оптическую плотность окрашенных продуктов реакции с помощью спектрофотометра СФ-46 в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм при λ = 555 ни или с помощью фотоколориметра КФК-2, при светофильтре с эффективной длиной волны λ_эф. = 540 ± 10 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10,0 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор холостого опыта. С этой целью с этой же пластинки для тонкослойной хроматографии соскабливают такой же по площади, как и в рабочем опыте слой сорбента, не содержащий гидантоина. Сорбент помещают в химический стакан, содержащий 5 мл дистиллированной воды, перемешивают и добавляют 1,0 мл 1% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и используют в качестве раствора сравнения. Зависимость светопоглощения окрашенных растворов от количества гидантоина взятого на реакцию представлена в табл. N1 и 2. Из данных табл. N 1 и 2 следует, что светопоглощение окрашенных растворов гидантоина подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера в пределах концентраций от 5,0 до 30,0 мкг в 6 мл конечного фотометрируемого объема. Данные зависимости светопоглощения окрашенных растворов от количества гидантоина, взятого на реакцию, использованы для расчета параметров уравнения прямой, соответствующей прямолинейному участку калибровочного графика, имеющего вид:
D = Kx + B, где D - оптическая плотность;
К - коэффициент пропорциональности, который равен тангенсу угла наклона калибровочного графика к оси абсцисс;
х - содержание определяемого вещества в анализируемой пробе (мкг);
В - константа, указывающая в каком месте прямая пересекает ось ординат.

С учетом рассчитанных параметров уравнений прямой, соответствующей прямолинейному участку калибровочного графика для спектрофотометрического определения гидантоина, имеет следующий вид: (см. табл. 2).

D = 0,0064x± 0,00974 И для фотоэлектроколориметрического определения гидантоина уравнение прямой имеет следующий вид: (см. табл. 3)
D = 0,033x± 0,07 . В дальнейшем при определении в анализируемых пробах гидантоина спектрофотометрическим и фотоэлектроколориметрическим методами расчет ведут по предварительно построенным калибровочным графикам, или по уравнению прямых, соответствующих прямолинейным участкам калибровочного графика. Молярный коэффициент светопоглощения ε_1см^IM = 23777,86 и удельный коэффициент светопоглощения Е_1cм^1% = = 2373,04.

П р и м е р 2. Фотометрическое определение гидантоина в порошке.

На линию старта стеклянной пластинки для тонкослойной хроматографии, предварительно обработанной хлороформом и высушенной при 100^оС в течение 1 ч в сушильном шкафу, с помощью калиброванных капилляров наносят 0,4 мл водного раствора гидантоина, содержащего около 100 мкг препарата в 1 мл. После подсушивания зон хроматограмму помещают в камеру для хроматографирования, в которую в качестве подвижной фазы, была предварительно помещена смесь метанол-хророформ (1: 9). После того как пробег фронта растворителя достигнет 10 см хроматографическую пластинку сушат и помещают на 10 мин в камеру, насыщенную парами хлора, который получают действием 6 мл концентрированной соляной кислоты на 2 г перманганата калия. Избыток хлора сдувают с пластинки воздухом и хроматограмму опрыскивают 3% -ным раствором иодида калия в этиленгликоле до полного увлажнения слоя. Полученный окрашенный продукт вместе со слоем сорбента площадью 1 см², соскабливают шпателем в химический стакан, содержащий 5,0 мл дистиллированной воды, перемешивают. В стакан, содержащий гидантоин, прибавляют по 1,0 мл 1% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина гидродихлорида в 95% -ном этиловом спирте и перемешивают. Полученные окрашенные растворы фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и фотометрируют с помощью спектрофотометра СФ-46 при длине волны λ = 555 мм в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм или с помощью фотоколориметра КФК-2 при светофильтре с эффективной длиной волны λ_эф. = 540± 10 нм в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор холостого опыта (условия см. выше). Для гидантоина R_f = 0,19 (см. в табл. 16).

Результаты количественного определения гидантоина в порошках спектрофотоколориметрическим и фотоэлектрометрическим методами, представленные в табл. 3, позволяют сделать вывод о том, что с помощью данного способа можно определить содержание гидантоина в порошках с относительной ошибкой А = ±2,19% .

П р и м е р 3. Построение колибровочного графика для фотометрического определения 1-аминогидантоина.

Около 0,01 г порошка 1-аминогидантоина (точная навеска) количественно переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, прибавляют 80,0 мл дистиллированной воды и нагревают на кипящей водяной бане до полного растворения. После охлаждения объем полученного раствора доводят до метки водой и перемешивают. Получают стандартный раствор 1-аминогидантоина, в 1 мл которого содержится 100 мкг 1-аминогидантоина.

На линию старта стеклянной пластинки для тонкослойной хроматографии, предварительно обработанной хлороформом и высушенной в сушильном шкафу при 100^оС в течение 1 ч, наносят (20,0; 30,0; 40,0; 60,0; 80,0) мкг 1-аминогидантоина. После подсушивания зон хроматограмму помещают на 1 ч в камеру для хроматографирования, насыщенную парами хлора, который получают действием концентрированной серной кислоты (6 мл) на 2 г перманганата калия. Затем избыток хлора сдувают с пластинки воздухом и хроматограмму опрыскивают 3% -ным раствором иодида калия в этиленгликоле, пока слой селикагеля станет увлажненным. Полученные окрашенные продукты вместе со слоем сорбента площадью 1 см² соскабливают и переносят в химические стаканы, в которые предварительно вносят по 5,0 мл дистиллированной воды, перемешивают. Затем в каждый из стаканов, содержащих раствор 1-аминогидантоина, прибавляют по 1,0 мл 1,0 % -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте и перемешивают. Полученные окрашенные растворыфильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и измеряют оптическую плотность окрашенных продуктов реакции с помощью спектрофотометра СФ-46 в кюветах толщиной рабочего слоя 10,0 мм при λ = 555 нм или с помощью фотоколориметра КФК-2 при светофильтре с эффективной длиной волны λ_эф = 540±10 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10,0 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор холостого опыта. Для этого с этой же пластинки для тонкослойной хроматографии соскабливают такой же по площади, как и в рабочем опыте слой сорбента, не содержащий 1-аминогидантоин. Сорбент помещают в химический стакан, содержащий 5 мл дистиллированной воды, перемешивают и добавляют 1,0 мл 1% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилдиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте. Полученную смесь фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и используют в качестве раствора сравнения. Зависимость светопоглощения окрашенных растворов от количества 1-аминогидантоина, взятого на реакцию, представлена в табл. 4 и 5. Из данных табл. 4 и 5 следует, что светопоглощение окрашенных растворов 1-амингидантоина подчиняется закону Бугера -Ламберта-Бера в пределах концентраций от (20,0 до 80,0) скг в 6 мл конечного фотометрируемого объема. Данные зависимости светопоглощения окрашенных растворов от количества 1-амингидантоина, взятого на реакцию, использованы для расчета параметров уравнения прямой, соответствующей прямолинейному участку калибровочного графика.

С учетом рассчитанных параметров уравнение прямой, соответствующей прямолинейному участку калибровочного графика для спектрофотометрического определения 1-аминогиантоина, имеет следующий вид: (см. табл. 2)
D = 0,01 x - 0,17 И для фотоэлектроколориметрического определения 1-аминогидантоина уравнение прямой имеет следующий вид:
D = 0,01 x - 0,048. В дальнейшем при определении в анализируемых пробах 1-аминогидантоина спектрофотометрическими, или фотоэлектроколориметрическим методами расчет ведут по предварительно построенным калибровочным графикам или по уравнению прямых, соответствующих прямолинейным участкам калибровочного графика. Молярный коэффициент светопоглощения ε_1см^1м = 7008,68 л, удельный коэффициент светопоглощения Е_1см^1% 609,45.

П р и м е р 4. Фотометрическое определение 1-аминогидантоина в порошке.

На линию старта стеклянной пластинки для тонкослойной хроматографии (изготовитель см. выше) предварительно обработанной хлороформом и высушенной в сушильном шкафу при 100^оС в течение 1 ч, с помощью калибровочных капилляров наносят 0,4 мл водного раствора 1-аминогидантоина, содержащего около 100 мкг препарата в 1 мл. После подсушивания зон, хроматограмму помещают в камеру для хроматографирования, в которую в качестве подвижной фазы была предварительно помещена смесь метанолхлороформ (1-9). После того как пробег фронта растворителя достигнет 10 см, хроматографическую пластинку сушат и помещают на 1 ч в камеру, насыщенную парами хлора, который по- лучают действием 6 мл концентрированной соляной кислоты на 2 г перманганата калия. Избыток хлора сдувают воздухом и хромотограмму опрыскивают 3% -ным расствором иодида калия в этиленгликоле до полного увлажнения слоя. Полученный окрашенный продукт вместе со слоем сорбента площадью 1 см² соскабливают шпателем в химический стакан, содержащий 5,0 мл дистиллированной воды, перемешивают. В стакан, содержащий 1-аминогидантоин, прибавляют по 1,0 мл 1% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте и перемешивают. Полученные окрашенные растворы фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и фотометрируют с помощью спектрофотометра СФ/46 при длине волны λ = = 555 нм в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм или с помощью фотоколориметра КФК-2 при светофильтре с эффективной длиной волны λ = 540±10 нм в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор холостого опыта (условия см. выше). Для 1-аминогидантоина R_f = 0,41 (см. табл. 16).

Результаты количественного определения 1-аминогидантоина в порошках спектрофотометрическим и фотоэлектроколориметрическим методами, представленные в табл. 6, позволяют сделать вывод о том, что с помощью данного способа можно определить содержание 1-аминогидантоина в порошках с относительной ошибкой А ± 1,25% .

П р и м е р 5. Построение колибровочного графика для фотометрического определения фурадонина.

Около 0,01 г порошка (точная навеска) количественно переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, прибавляют 80,0 мл дистиллированной воды и нагревают на кипящей водяной бане до полного растворения. После охлаждения объем полученного раствора доводят до метки водой и перемешивают. Получают стандартный раствор фурадонина, в 1 мл которого содержится 100 мкг фурадонина.

На линию старта пластинки для тонкослойной хроматографии, покрытой слоем селикагеля марки КСКГ, предварительно обработанной хлороформом, высушенной в сушильном шкафу при 100^оС в течение 1 ч, наносят (20,0; 30,0; 40,0; 60,0; 80,0) мкг фурадонина. После подсушивания зон, хроматограмму помещают на 1 ч в камеру для хроматографирования, насыщенную парами хлора, который получают действием концентрированной соляной кислотой (6 мл) на 2 г перманганата калия, затем избыток хлора сдувают с пластинки воздухом и хроматограмму опрыскивают 3% -ным раствором иодида калия в этиленгликоле, пока слой селикагеля не станет явно увлажненным. Полученные окрашенные продукты вместе со слоем сорбента площадью 1 см² соскабливают и переносят в химические стаканы, в которые предварительно вносят по 5,0 мл дистиллированной воды, перемешивают. Затем в каждый из стаканов, содержащих раствор фурадонина, прибавляют по 1,0 мл 1,0% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте и перемешивают. Полученные окрашенные растворы фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и измеряют оптическую плотность полученных окрашенных продуктов реакции с помощью спектрофотометра СФ-46 в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм при λ = 555 нм или с помощью фотоколориметра КФК-2 при светофильтре с эффективной длиной волны λ_эфф. = 540 ± 10 ни в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор холостого опыта. Для этого с этой же пластинки для тонкослойной хроматографии соскабливают такой же по площади, как и в рабочем опыте слой сорбента, не содержащий фурадонина. Сорбент помещают в химический стакан, содержащий 5 мл дистиллированной воды, перемешивают и добавляют 1,0 мл 1% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилдиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте. Полученную смесь фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и используют в качестве раствора сравнения. Зависимость светопоглощения окрашенных растворов от количества фурадонина взятого на реакцию, представлена в табл. 7 и 8. Из данных табл. 7 и 8 следует, что светопоглощение окрашенных растворов фурадонина подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера в пределах концентраций от 20,0 до 80,0 мкг в 6 мл конечного фотометрируемого объема. Данные зависимости светопоглощения окрашенных растворов от количества фурадонина, взятого на реакцию, использованы для расчетов параметров уравнения прямой, соответствующей прямолинейному участку калибровочного графика.

С учетом рассчитанных параметров уравнение прямой, соответствующей прямолинейному участку калибровочного графика для спектрофотометрического определения фурадонина, имеет следующий вид: (см. табл. 17)
D = 0,0074х + 0,01. И для фотоколориметрического определения фурадонина уравнение прямой имеет следующий вид: (см. табл. 8)
D = 0,0064x + 0,00974 В дальнейшем при определении в анализируемых пробах фурадонина спектрофотометрическим или фотоколориметрическим методами расчет ведут по предварительно построенным калибровочным графикам, или по уравнению прямых, соответствующих прямолинейным участкам калибровочного графика. Молярный коэффициент светопоглощения ε_1см^IМ = 11352,83, где удельный коэффициент светопоглощения Е_1см^1см= 443,158.

П р и м е р 6. Фотометрическое определение фурадонина в порошке.

На линию старта стеклянной пластинки для тонкослойной хромотографии (изготовитель см. выше) предварительно обработанной хлороформом и высушенной в сушильном шкафу при t 100^оС в течение 1 ч с помощью калибровочных капилляров наносят 0,4 мл водного раствора фурадонина, содержащего около 100 мкг препарата в 1 мл. После подсушивания зон хроматограмму помещают в камеру для хроматографирования, в которую в качестве подвижной фазы была предварительно помещена смесь метанол/хлороформ (1-9). После того как пробег фронта растворителя достигнет 10 см, хроматографическую пластинку сушат и помещают в камеру, насыщенную парами хлора, который получают действием 6 мл концентрированной соляной кислоты на 2 г перманганата калия. Избыток хлора сдувают с пластинки воздухом и хроматограмму опрыскивают 3% -ным раствором иодида калия в этиленгликоле до полного увлажения слоя.

Полученный окрашенный продукт вмессте со слоем сорбента площадью 1 см² соскабливают шпателем в химический стакан, содержащий 5,0 мл дистиллированной воды, перемешивают. В стакан, содержащий фурадонин, прибавляют по 1,0 мл 1% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% этиловом спирте и перемешивают. Полученные растворы фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и фотометрируют с помощью спектрофотометра СФ-46 при длине волны λ = = 555 мм в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм или с помощью фотоколориметра КФК-2 при светофильтре с эффективной длиной волны λ_эф. = 540± 10 нм в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор холостого опыта (см. условия выше). Для фурадонина R_f = 0,55 (см. табл. 16).

Результаты количественного определения фурадонина в порошках спектрофотометрическим и фотоэлектроколориметрическим методами, представленные в табл. 9, позволяет вывод о том, что с помощью данного способа можно определить содержание фурадонина в порошках с относительной ошибкой А = ± 2,19% .

П р и м е р 7. Фотометрическое определение фурадонина в таблетках.

Точную навеску порошка 10 тщательно растертых таблеток фурадонина серия 180187 (около 0,01 г) растворяют при нагревании в воде в мерной колбе на 250 мл, охлаждают и доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают. Полученный расствор фильтруют через фильтр (красная лента), отбрасывают первые 20 мл фильтрата.

На линию старта пластинки для тонкослойной хроматографии наносят по 1,0 мл водного раствора фурадонина. После подсушивания зоны хроматограмму вносят в камеру для хроматографирования, в которую в качестве подвижной фазы была предварительно внесена смесь метанол-хлороформ (1-9). Когда пробег фронта растворителя досстигнет 10 см, хроматографическую пласстинку сушат и помещают на 1 ч в камеру, насыщенную парами хлора, который по-лучают действием 6 мл соляной кислоты на 2 г перменганата калия. Затем избыток хлора сдувают с пластинки воздухом и хроматограмму опрыскивают 3% -ным раствором иодида калия с этиленгликоле, пока слой селикагеля станет явно увлажненным. По- лученные окрашенные продукты вместе со сслоем сорбента площадью 1 см²соскабливают и переносят в химические стаканы, в которые предварительно вносят по 5,0 мл дистиллированной воды, перемешивают. В стаканы, содержащие фурадонин, прибавляют по 1,0 мл 1% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дегидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте и перемешивают. Полученные окрашенные растворы фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и измеряют их оптическую плотность с помощью спектрофотометра СФ-46 в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм или с помощью фотоэлектроколориметра КФК-2 при светофильтре λ_эф. = 540 ±10 нм в кюветах с толщиной слоя 10,0 мм.

В качестве раствора сравнения используют расствор холостого опыта. Для этого с этой же пластинки для тонкослойной хроматографии соскабливают такой же по площади, как в рабочем опыте слой сорбента, не содержащий фурадонина. Сорбент помещают в химический стакан, содержащий 5 мл дистиллированной воды, перемешивают и добавляют 1,0 мл 1,0% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте. Полученную смесь фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и используют в качестве раствора сравнения.

Результаты количественного определения фурадонина в таблетках спектрофотометрическим и фотоэлектроколориметрическим методами преставлены в табл. 10, позволяют сделать вывод о том, что с помощью данного способа можно определить содержание фурадонина в таблетках с относительной ошибкой А = ± 2,66.

П р и м е р 8. Построение калибровочного графика для фотометрического определения фурагина.

Около 0,01 г порошка фурагина (точная навеска) количественно переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, прибавляют 80,0 мл дистиллированной воды и нагревают на кипящей водяной бане до полного растворения. После охлаждения объем полученного раствора доводят до метки водой и перемешивают. Получают стандартный расствор фурагина, в 1 мл которого содержится 100 мкг фурагина.

На линию старта пластинки для тонкослойной хроматографии, покрытой слоем силикагеля марки КСКГ, предварительно обработанной хлороформом в сушильном шкафу при t = 100^оС в течение ч, наносят (20,0; 30,0; 40,0; 60,0; 80,0) мкг фурагина. После подсушивания зон хроматограмму помещают на 1 ч в камеру для хроматографирования, насыщенную парами хлора, который получают действием концентрированной соляной кислоты (6 мл) на 2,0 г перманганата калия. Затем избыток хлора сдувают с пластинки воздухом и хроматограмму опрыскивают 3% -ным раствором иодида калия в этиленгликоле, пока слой силикагеля станет явно увлажненным. По- лученные окрашенные продукты вместе со слоем сорбента площадью 1 см² соскабливают и переносят в химические стаканы, в которые предварительно вносят по 5,0 мл дистиллированной воды, перемешивают. Затем в каждый из стаканов, содержащих раствор фурагина, прибавляют по 1,0 мл 1,0% -ного раствора N, N-димедил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте и перемешивают. Окрашенные растворы фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и измеряют оптическую плотность полученных окрашенных продуктов реакции с помощью спектрофотометра СФ-46 в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм при λ = 555 нм или с помощью фотоколориметра КФЕ-2 при светофильтре с эффективной длиной волны λ_эф.= 540±10нм в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор холостого опыта. Для этого с этой же пластинки для тонкослойной хроматографии соскабливают такой же по площади, как и в рабочем опыте слой сорбента, не содержащий фурагина. Сорбент помещают в химический стакан, содержащий 5 мл дистиллированной воды, перемешивают и добавляют 1,0 мл 1% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилдиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте. Полученную смесь фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и используют в качестве расствора сравнения. Зависимость светопоглощения окрашенных растворов от количества фурагина, взятого на реакцию представлена в табл. 11 и 12. Из данных табл. 11 и 12 следует, светопоглощение окрашенных растворов фурагина подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера в пределах концентраций от 20,0 до 80,0 мкг в 6 мл конечного фотометрируемого объема. Данные зависимости светопоглощения окрашенных растворов от количества фурагина, взятого на реакцию, использованы для расчетов параметров уравнения прямой, соответствующей прямолинейному участку калибровочного графика.

С учетом рассчитанных параметров уравнение прясой, соответствующей прямолинейному участку калибровочного графика для спектрофотометрического определения фурагина, имеет следующий вид: (см. таблицу N 2)
D = 0, 007х + 0,016.

И для фотоэлектроколориметрического определения фурагина уравнение прямой имеет следующий вид: (см. табл. 3)
D = 0,007x + 0,0069
В дальнейшем при определении в анализируемых пробах фурагина спектрофотометрическим, или фотоэлектроколориметрическим методами расчет ведут по предварительно настроенному калибровочному графику, или по уравнению прямых, соответствующих прямолинейным участкам калибровочного графика. Молярный коэффициент светопоглощения ε_1см^1м = 11309,19. Удельный коэффициент светопоглощения равен: Е_1см^1% = = 428,25.

П р и м е р 9. Фотометрическое определение фурагина в порошке. На линию старта стеклянной пластинки для тонкослойной хроматографии, предварительно обработанной хлороформом и высушенной в сушильном шкафу при 100^оС в течение 1 ч, с помощью калибровочных капилляров наносят 0,4 л водного раствора фурагина, содержащего около 100 мкг препарата в 1 мл. После подсушивания зон хроматограмму помещают в камеру для хроматографирования, в которой в качестве подвижной фазы была предварительно помещена смесь метанолхлороформ (1-9). После того как пробег фронта растворителя достигнет 10 см, хроматографическую пластинку сушат и помещают на 10 мин в камеру, насыщенную парами хлора, который получают действием соляной кислоты (6 мл) на 2 г перманганата калия. Избыток хлора сдувают с пластинки водухом и хроматограмму опрыскивают 3% -ным раствором иодида калия в этиленгликоле до полного увлажения слоя. Полученный окрашенный продукт вместе со слоем сорбента площадью 1 см²соскабливают шпателем в химический стакан, содержащий 5,0 мл дистиллированной воды, перемешивают. В стакан, содержащий фурагин, прибавляют по 1,0 мл 1% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте и перемешивают. Полученные окрашенные растворы фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и фотометрируют с помощью спектрофотометра ЧФ-46 при длине волны λ = 555 нм в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм, или с помощью фотоколориметра КФК-2 при светофильтре с эффективной длиной волны λ_эф. = 540±10 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10,0 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор холостого опыта (условия см. выше). Для фурагина R_f = 0,51 (см. табл. 6).

Результаты количественного определения фурагина в порошках спектофотометрическим и фотоэлектроколориметрическим методами, представленные в табл. 1, позволяют сделать вывод о том, что с помощью способа можно определить содержание фурагина в порошках с относительной ошибкой А = ± 2,14% .

П р и м е р 10. Фотометрическое определение фурагина в таблетках.

Точную навеску порошка 10 тщательно растертых таблеток фурагина серии 260287 (около 0,01 г) растворяют при нагревании в воде в мерной колбе на 250 мл, охлаждают и доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают. Полученный раствор фильтруют через фильтр (красная лента), отбрасывают первые 20 мл фильтрата.

На линию старта пластинки для тонкослойной хроматографии наносят по 1,0 мл водного раствора фурагина. После подсушивания зоны хроматограмму вносят в камеру для хроматографирования, в которую в качестве подвижной фазы была предварительно внесена смесь метанолхлороформ (1-9). Когда пробег фронта растворителя достигнет 10 см, хроматографическую пластинку сушат и помещают на 1 ч в камеру, насыщенную парами хлора, который получают действием 6 мл соляной кислоты на 2 кг перманганата калия. Затем избыток хлора сдувают с пластинки воздухом и хроматограмму опрыскивают 3% -ным раствором иодида калия в этиленгликоле, пока слой силикагеля станет явно увлажненным. Полученные окрашенные продукты вместе со слоем сорбента площадью 1 см² соскабливают и переносят в химические стаканы, в которые предварительно вносят по 5,0 мл дистиллированной воды, перемешивают. В стаканы, содержащие фурагин, прибавляют по 1,0 мл 1% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте и перемешивают. Полученные окрашенные растворы фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и измеряют их оптическую плотность с помощью спектрофотометра СФ-46 в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 нм или с помощью фотоэлектроколориметра КФК-2 при светофильтре λ_эфф. = = 540 ± 10 мм в кювете с толщиной слоя 10,0 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор холостого опыта. Для этого с этой пластинки для тонкослойной хроматографии соскабливают такой же по площади, как и в рабочем опыте, слой сорбента, не содержащий фурагина. Сорбент помещают в химический стакан, содержащий 5 мл дистиллированной воды, перемешивают и добавляют 1,0 мл 1,0 мл 1,0% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте. Полученную смесью фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и используют в качестве раствора сравнения.

Результаты количественного определения фурагина в таблетках спектрофотометрическим и фотоэлектроколориметрическим методами, представленные в таблице 10, позволяют сделать вывод о том, что с помощью данного способа можно определить содержание фурагина в таблетках с относительной ошибкой А = ± 2,11.

П р и м е р 11. Фотометрическое определение производных гидантоина в смесях.

На линию старта стеклянной пластинки для тонкослойной хроматографии, предварительно обработанной хлороформом и высушенной в сушильном шкафу при 100^oС в течение 1 с, с помощью калибровочных капилляров наносят 1,0 мл смеси водных растворов фурадонина, гидантоина, 1-аминогидантоина, фурагина. После подсушивания зон хроматограмму помещают в камеру для хроматографирования, в которую в качестве подвижной фазы была предварительно помещена смесь метанол-хлороформ (1-9). После того как пробег фронта растворителя достигнет 10 см, хроматографическую пластинку сушат и помещают в камеру насыщенную парами хлора, который получают действием 6 мл концентрированной соляной кислоты на 2 г перманганата калия. Избыток хлора сдувают с пластинки воздухом и хроматограмму опрыскивают 3% -ным раствором иодида калия в этиленгликоле до полного увлажнения слоя. Затем дают качественную оценку пятен на хроматограмме и пределяют какому из производных гидантоина они соответствуют. Количество полупродуктов в пробах определяют путем соскабливания с пластин окрашенных пятен площадью 1 см², вместе со слоем сорбента шпателем в химические стаканы, содержащие 5,0 мл дистиллированной воды, перемешивают. В стаканы, прибавляют по 1,0 мл 1% -ного раствора N, N-диметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном этиловом спирте и перемешивают. Полученные растворы фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и фотометрируют с помощью спектрометра СФ-46 при длине волны λ = 555 нм в кюветах с толщиной рабочего слоя 10,0 мм или с помощью фотоколориметра КФК-2 при светофильтре с эффективной длиной волны λ_эфф. = 540 ± 10 нм в кюветах с толщиной слоя 10,0 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор холостого опыта, условия приготовления которого, объемы серной кислоты, воды, раствора триптофана, время настаивания приведены выше. (56) [1] Rodes E. F. "Mecrochemical test for hydantoins and barbitinate - hydantoin mixtures" microhem, 1972, 17, N 5: р. 528-539.

Полюдек-Фабини Р. , Бейрих Т. Органический анализ, Л. : Химия, 1981, с. 230.

Авторское свидетельство СССР N 169192, кл. G 01 N 21/78, 1989.

Т а б л и ц а 7
Зависимость оптической плотности продукта взаимодействия фурадонина с N, N-диметил-n-фенилендиамином дигидрохлоридом от количества фурадонина, взятого на реакцию и расчет уравнения калибровочного графика для фотоэлектроколориметричского определения фурадонина.

Т а б л и ц а 8
Зависимость оптической плотности продукта взаимодействия фурадонина с N, N-диметил-n-фенилендиамином дигидрохлоридом от количества фурадонина, взятого на реакцию и расчет уравнения калибровочного графика для спектрофотометрического определения фурадонина.

Т а б л и ц а 9
Результаты определения фурадонина в порошке (серия N 270287)
Т а б л и ц а 10
Результаты количественного определения фурадонина в таблетках по 0,05 (серия 180187)
Т а б л и ц а 11
Зависимость оптической плотности продукта взаимодействия фурадонина с N, N-диметил-n- фенилдитамином дигидрохлоридом от количества фурагина, взятого на реакцию и расчет уравнения калибровочного графика для фотоэлектроколориметрического определения фурагина
Т а б л и ц а 12
Зависимость оптической плотности продукта взаимодействия фурагина с N, N-диметил-n-фенилендиамином дигидрохлоридом от количества фурагина, взятого на реакцию и расчет уравнения калибровочного графика для спектрофотометрического определения фурагина
Т а б л и ц а 13
Pезультаты определения фурагина в порошке (серия 3131088)
Т а б л и ц а 14
Результаты количественного определения фурагина в таблетках по 0,05 (серия 1050688)
Т а б л и ц а 15
Сравнительная характеристика методов
Т а б л и ц а 16
Значения Rf для гидантоина, 1-аминогидантоина, фурадонина, фурагина, в различных системах растворителей.

Сущность изобретения: способ предусматривает нанесение пробы, содержащей гидантоин, 1-аминогидантоин, фурадонин, фурагин, на пластинку для тонкослойной хроматографии, хроматографирование с использованием в качестве подвижной фазы смеси хлороформа с метанолом, хлорирование свободным хлором, опрыскивание раствором иодида калия в этиленгликоле. Полученный окрашенный продукт соскабливают в химический стакан, разбавляют водой, а затем обрабатывают раствором N, N-диметил-п-фенилендиамина дигидрохлорида в 95% -ном растворе этанола. 16 табл.

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИДАНТОИНА, 1-АМИНОГИДАНТОИНА, ФУРАДОНИНА, ФУРАГИНА, заключающийся в добавлении к анализируемой пробе цветореагента и измерении оптической плотности полученного окрашенного раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и селективности определения, анализируемую пробу наносят на пластинку для тонкослойной хроматографии, хроматографируют, используя в качестве подвижной фазы смесь хлороформа с метанолом, хлорируют хлором, опрыскивают раствором иодида калия в этиленгликоле, полученный окрашенный продукт переносят в химический стакан, разбавляют водой, а в качестве цветореагента используют N, N-диметил-п-фенилендиамина дигидрохлорид.