СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГИПОХОЛЕСТЕРИНЕМИЧЕСКИМ И ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ИЗ ШРОТА КЛЮКВЫ Российский патент 2011 года по МПК A61K36/45 B01D11/02 A61P3/00 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к получению лечебно-профилактических средств из растительного сырья.

Известен способ получения [пат. РФ 2125459] биологически-активных веществ (БАВ) из растительного сырья путем его экстракции органическим растворителем и последующего разбавления полученного экстракта водой. В качестве исходного сырья используют жом плодов облепихи, или лист облепихи, или их смесь, а в качестве органического растворителя 90-96%-ный этиловый спирт. Экстракцию проводят при температуре кипения растворителя. Получаемое по данному способу средство содержит как липофильную фракцию (жиры, каротиноиды и хлорофиллы), так и водорастворимые БАВ. Тритерпеновые кислоты, обладающие биологической активностью, в сумме биологических веществ в указанном патенте не получают.

Наиболее близким аналогом (прототипом) к заявляемому изобретению является способ получения средства, обладающего гиполипидемическим и противоатеросклеротическим действием, гепатозащитной, желчегонной и антилитогенной активностью [пат. РФ 2011383]. По данному способу в качестве сырья используют шрот ягод облепихи, остающийся после получения облепихового масла. Экстракцию сырья проводят изопропиловым спиртом, а выделение суммы тритерпеновых кислот из упаренного концентрата осуществляют осаждением петролейным эфиром и последующей фильтрацией целевого продукта.

Недостатком способа-прототипа является низкое содержание в экстракте тритерпеновых кислот и значительное содержание полярных компонентов, в том числе сильных органических кислот (яблочной, щавелевой и лимонной), обладающих раздражающим действием. Это связано с природной особенностью плодов облепихи, а также с технологией: при получении средства из шротов облепихи с использованием полярного экстрагента (изопропилового спирта) наряду с тритерпеновыми кислотами извлекается значительное количество полярных балластных примесей, в том числе сильных кислот.

Предварительная экстракция нативного сырья с целью получения облепихового масла в прототипе проводится последовательно растительным маслом и фреоном, при этом извлекается преимущественно липофильная фракция, в то время как полярные соединения, в том числе алифатические и тритерпеновые кислоты, остаются в шроте.

Задачей настоящего изобретения является создание нового способа получения средства на основе концентрата тритерпеновых кислот, обладающего гипохолестеринемической, гиполипидемической активностью.

Поставленная задача решается способом, по которому концентрат тритерпеновых кислот получают из шрота ягод клюквы путем трехкратной экстракции метилтретбутиловым эфиром в общей сложности 15 ч, последующей очистки средства от примесей концентрированием экстракта до 1/5 объема и отделением осадка целевого продукта.

Средство, получаемое по заявляемому способу, характеризуется повышенным содержанием тритерпеновых кислот в экстракте и пониженным содержанием сильных кислот (яблочной, щавелевой, винной, лимонной), обладающих нежелательным раздражающим действием по сравнению со средством, получаемым по способу-прототипу.

Шроты клюквы, являющиеся отходом пищевой промышленности (производство сока клюквы), содержат меньшее количество балластных примесей, в частности сильных кислот, что позволяет получить субстанцию, не обладающую раздражающим действием.

Задача получения средства, содержащего более высокую концентрацию тритерпеновых кислот и не содержащего сильных кислот и балластных примесей, решается также использованием в качестве экстрагента метилтретбутилового эфира и осаждением тритерпеновых кислот из концентрата экстракта. Метилтретбутиловый эфир эффективно извлекает тритерпеновые кислоты и плохо растворяет полярные компоненты, содержащиеся в шротах клюквы, в том числе сильные кислоты. Неполярные и полярные примесные соединения из экстрактов клюквы остаются в маточниках, отделяемых от осадков, содержащих концентраты тритерпеновых кислот.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Шрот клюквы экстрагируют 3 раза метилтретбутиловым эфиром в общей сложности 15 ч, объединенный экстракт концентрируют при 60-70°С до 1/5 исходного объема, после чего упаренный раствор выдерживают и отделяют осадок, содержащий тритерпеновые кислоты, от маточника, содержащего липофильные и полярные примесные соединения. На слой экстрагированного шрота после слива органического растворителя, содержащий остаточное количество растворителя, загружают воду и при нагреве до 80-90°С отгоняют остаточный растворитель со шрота с водяным паром.

Средство, получаемое из шрота клюквы по предлагаемому способу, обладает повышенной активностью, содержит больше тритерпеновых кислот, не обладает раздражающим действием и может применяться в меньшей дозировке.

Пример 1. Описание способа получения средства

80 кг шрота клюквы заливают 400 л метилтретбутилового эфира, настаивают в течение 5 ч. Экстракцию повторяют еще два раза. Объединенные экстракты концентрируют до 1/5 объема. Концентраты, остающиеся в кубе после отгонки экстрагента, выдерживают в течение 24 час для отделения осадков тритерпеновых кислот (ТТК). Маточники, содержащие раствор малополярных примесей в метилтретбутиловом эфире, отделяют декантацией, остаточное количество маточников отделяют фильтрованием. Осадок тритерпеновых кислот сушат в сушильном шкафу при температуре 40-50°С. Выход 2,8-3,6 кг (35-45 г/кг шрота 3,5-4,5%) с содержанием суммы урсоловой и олеаноловой кислот 75% (титриметрически), кислотное число 1,6 мг КОН/г.

Средство, полученное по способу-прототипу, характеризуется содержанием тритерпеновых кислот 62% (титриметрически), кислотным числом 151 мг КОН/г, выход 1,8%.

Средство, получаемое по заявляемому способу экстракцией шрота клюквы метилтретбутиловым эфиром с выделением осадка из концентрата экстракта, характеризуется повышенным содержанием тритерпеновых кислот, практически не содержит сильных кислот и выделяется с более высоким выходом по сравнению со средством, получаемым по способу-прототипу.

Пример 2. Испытания средства, получаемого по заявляемому способу

Экспериментальная гиперхолестеринемия у белых крыс вызывалась внутрибрюшинным введением твина-80 из расчета 200 мг/100 г массы тела. Одновременно перорально вводилось исследуемое средство в дозах 10-500 мг/кг. Через 12 ч крыс забивали декапитацией и в сыворотке крови определяли содержание холестерина. В качестве вещества сравнения использовался полученный по способу-прототипу экстракт облепихи, гипохолестеринемическое действие которого было изучено ранее.

Как показали опыты (табл.1), в результате введения твина-80 у крыс контрольной группы уровень холестерина в крови по сравнению с интактными животными существенно повысился (на 52%). Введение исследуемого средства задерживало повышение холестерина в крови у животных под влиянием твина-80, дозы средства 10 и 50, 100, 200 мг/кг обусловили снижение холестерина 30-38%.

Гипохолестеринемическое влияние средства, получаемого по заявляемому способу, превышало действие экстракта облепихи (получаемого по способу-прототипу), что может быть обусловлено более высоким содержанием тритерпеновых кислот и отсутствием побочных и раздражающих веществ, которые могут снижать гипохолестеринемическое действие средства.

Из данных, представленных в таблице 1, видно, что средство, полученное по заявляемому способу, более эффективно снижает уровень холестерина по сравнению со средством из облепихи, полученным по способу-прототипу, в дозировках 10 мг/кг -100 мг/кг, а в дозировках 200 мг/кг- 500 мг/кг, не уступает средству из облепихи.

Для оценки гиполипидемического действия средства, получаемого по заявляемому способу, определяли следующие биохимические показатели: в крови - содержание общих липидов, β-липопротеидов и пре-β-липопротеидов. Данные представлены в таблице 2.

Из данных, представленных в таблице 2, видно, что в результате использования средства отмечается улучшение показателей крови (общих липидов; β-липопротеидов и пре-β-липопротеидов) по сравнению с контролем при дозировке от 10 до 500 мг/кг.

Таблица 1
Влияние средства, получаемого по заявляемому способу, и экстракта облепихи (полученного по способу-прототипу) на содержание холестерина в крови подопытных животных   Экстракт облепихи (по способу-прототипу) n=6 Средство по заявляемому способу n=6 Интактные животные n=6 Контроль, n=13 Твин-80 и средство 10 мг/кг 1,54±0,063
Р_к>0,05
Р_и<0,05
-17% 1,31±0,084
Р_к>0,05
Р_и>0,05
-30% 1,22±0,111 1,86±0,1
91 Р_и<0,05
+52% Твин-80 и средство 50 мг/кг 1,40±0,020
Р_к>0,05
-27%
Р_и>0,001 1,15±0,110
Р_к<0,01
-38%
Р_и>0,05     Твин-80 и средство 100 мг/кг 1,34±0,106
Р_к>0,05
-28%
Р_и>0,001 1,17±0,185
Р_к<0,01
-37%
Р_и>0,05     Твин-80 и средство 200 мг/кг 1,21±0,111
Р_к<0,01
-35%
Р_и>0,05 1,20±0,104 Р_к<0,01
-35%
Р_и>0,05     Твин-80 и средство 500 мг/кг 1,28±0,111
Р_к>0,05
Р_и>0,001 1,2±0,089
Р_к<0,01
-30%
Р_и>0,05     Примечание: Р_И - уровень достоверной разницы по отношению к интактным значениям; Р_К - уровень достоверной разницы по отношению к контрольным значениям; n - количество животных в группе

Таблица 2
Влияние средства, получаемого по заявляемому способу, на показатели липидного обмена в крови на фоне твиновой гиперлипидемии Группы животных ОЛ крови, г/л β- и пре-β-ЛП крови, г/л Интактные, n=6 1,31±0,288 0,73+0,129 Контроль, n=13 3,29±0,247
Р_и<0,001
+151% 3,15+0,385
Р_и<0,001
+332% ТК, 10 мг/кг, n=6 2,92+0,199
Р_к>0,05
Р_и<0,001
+123% 2,49+0,304
Р_к>0,05
Р_и<0,001
+241% ТК, 50 мг/кг, n=6 2,33+0,188
Р_к<0,05
-29%
Р_и<0,001+123% 2,15+0,401
Р,<>0,05
Р_и<0,001
+195% ТК, 100 мг/кг, n=5 2,08±0,139
Р_к<0,05 - 2,22+0,232
Р,<>0,05 ТК, 200 мг/кг, n=6 2,10±0,123
Р_к<0,05 - 1,84+0,142
Р_к<0,05- ТК, 500 мг/кг, n=6 1,79+0,007
Р_к<0,05 - 1,70+0,220
Р_к<0,05 -

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно: к получению средства, обладающего гипохолестеринемическим и гиполипидемическим действием. Способ получения средства, обладающего гипохолестеринемическим и гиполипидемическим действием, осуществляется путем трехкратной экстракции шрота ягод клюквы, настаивания, объединения экстрактов, отгонки растворителя, отделения целевого продукта, при определенных условиях. Средство, полученное вышеописанным способом, характеризуется повышенным содержанием тритерпеновых кислот, не вызывает раздражения. 2 табл.

Способ получения средства, обладающего гипохолестеринемическим и гиполипидемическим действием, путем трехкратной экстракции шрота ягод, настаивания, объединения экстрактов, отгонки растворителя, отделения целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве шрота ягод используют шрот ягод клюквы, экстракцию проводят при соотношении шрот ягод клюквы: метилтретбутиловый эфир 1:5 в течение 15 ч, объединенные экстракты концентрируют до 1/5 объема, полученные концентраты выдерживают в течение 24 ч для отделения осадка тритерпеновых кислот, осадок сушат при температуре 40-50°С, причем целевой продукт содержит не менее 75 вес.% тритерпеновых кислот.