Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения микроколичеств ртути, и может быть использовано для экспресс-анализа объектов окружающей среды.
Известны способы [1,2] ферментативного определения солей ртути (II) по ее ингибирующему эффекту на ферменты уреазу и холинэстеразу, заключающиеся в предварительной инкубации пробы с иммобилизованным ферментом и последующим определением скорости ферментативного гидролиза специфических субстратов (мочевины и эфиров холина соответственно) с помощью потенциометрических датчиков. Указанные способы неселективны, требуют подготовки пробы и специального оборудования, включая ион-селективные датчики и ферментсодержащие мембраны.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению по сущности и предложенному решению (прототипом) является способ [3] , заключающийся в том, что к анализируемой пробе последовательно добавляют предварительно выдержанную в течение 4 ч смесь 2 х 10-9 раствора пероксидазы и 2,5 10-4 М раствора тиомочевины; 8 ˙10-3 М раствор о-дианизидина, 0,2 М раствор бифталата калия и едкого кали, 5˙ 10-2 раствор пероксида водорода. Содержание ртути в пробе определялось с помощью спектрофотометра по временной зависимости поглощения полученной смеси при λ = 403 нм. Предел обнаружения ртути 1˙ 10-5 мкг/мл. Однако указанный способ весьма продолжителен, использует малостабильные водные растворы пероксидазы, которые необходимо готовить ежедневно, требует специального оборудования для регистрации аналитического сигнала.
Целью изобретения является снижение трудоемкости и упрощение процесса измерения, а также сокращение продолжительности анализа.
Цель достигается тем, что в процессе анализа последовательно смешивают ферментный препарат на основе пероксидазы, раствор тиомочевины и анализируемую пробу, а также растворы пероксида водорода и орто-дианизидина, регистрируют изменение окраски раствора, в качестве ферментного препарата используют водорастворимый твердый раствор пероксидазы в хитазане, а анализируемую пробу вводят через 3-7 мин после раствора тиомочевины.
При использовании предлагаемого изобретения повышается устойчивость во времени ферментного препарата: активность пероксидазы в твердом растворе хитазана сохраняется в течение полугода, отпадает необходимость использования малоустойчивых во времени водных растворов пероксидазы, которые необходимо готовить ежедневно и хранить в холодильнике . Сокращается с 4 ч до 3-7 мин продолжительность предварительного контакта фермента и тиомочевины. При продолжительности контакта менее 3 мин не наблюдается существенного изменения чувствительности пероксидазы к ртути, при увеличении продолжительности контакта более 7 мин перестает изменяться .
Кроме того, появляется возможность визуальной индикации сигнала и использования способа в полевых экспедиционных условиях.
Выявленные отличия в аналитической и других смежных областях науки и техники для решения указанных задач не используются.
П р и м е р 1. Для приготовления твердого раствора пероксидазы смешивают 0,1% -ный водный раствор хитазана и 2 ˙10-5 раствор пероксидазы в объемном соотношении 10: 1. Смесь тщательно перемешивают и дозируют в ячейки планшета для иммунологических исследований и сушат в токе воздуха при 50оС. Непосредственно перед началом анализа в ячейку вносят фталатный буферный раствор (рН 5,0), содержимое перемешивают до полного растворения ферментного препарата. После этого в ячейку вводят последовательно 0,02 мл 2,5˙ 10-4 М раствора тиомочевины, через 5 мин добавляют 0,02 мл раствора нитрата ртути, через 10 мин 0,01 мл 2,5˙ 10-3М раствора о-дианизидина, 0,01 мл 10-2 М раствора пероксида водорода. В момент введения пероксида водорода включают секундомер и фиксируют время появления красно-коричневого окрашивания в ячейке. Определение концентрации ртути в диапазоне 10-3 - 10-5 мкг/мл проводится по градуировочному графику, линейному в координатах
lgCHg2+ = 0,673 - 7,27 (to/ti), где to - время достижения красно-коричневого окрашивания в ячейке с контрольным раствором в отсутствии ртути;
ti - время достижения красно-коричневого окрашивания в ячейке с анализируемым на ртуть раствором;
CHg2+ - концентрация нитрата ртути.
При концентрации нитрата ртути 10-3 мкг/мл обнаружено (1,1±0,3)˙ 10-3 мкг/мл при стандартном отклонении S = 2,9 ˙10-4 (Р = 0,90).
П р и м е р 2. Условия определения как в примере 1. Концентрация нитрата ртути 10-5 мкг/мл. Найдено (0,8±0,2) 10-5 мкг/мл при стандартном отклонении S = 2,3˙ 10-6 (Р = 0,90).
П р и м е р 3. Условия определения как в примере 1. Концентрация нитрата ртути 10-4 мкг/мл. Найдено (0,9±0,25) 10-4 мкг/мл при стандартном отклонении S = 2,7˙ 10-5 (Р = 0,90).
П р и м е р 4. Условия определения как в примере 1. Раствор нитрата ртути добавляют через три минуты после раствора тиомочевины. Концентрация ртути 10-3 мкг/мл. Найдено (0,9±0,3) 10-3 мкг/мл при стандартном отклонении S = 3,2 ˙ 10-4 (Р = 0,90).
П р и м е р 5. Условия определения как в примере 1. Раствор нитрата ртути добавляют через семь минут после раствора тиомочевины. Концентрация ртути 10-3 мкг/мл. Найдено (0,9±0,2) 10-3 мкг/мл при стандартном отклонении S = 2,2˙ 10-4 (Р = 0,90).
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОКОЛИЧЕСТВ РТУТИ | 1994 |
|
RU2073864C1 |
| СПОСОБ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОКОЛИЧЕСТВ РТУТИ | 1997 |
|
RU2144184C1 |
| СПЕЦИФИЧЕСКИЙ РЕГУЛЯТОР АКТИВНОСТИ НУКЛЕОТИД-ЗАВИСИМЫХ ФЕРМЕНТОВ | 1997 |
|
RU2130490C1 |
| СПОСОБ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНОЛОВ | 1993 |
|
RU2073723C1 |
| ДОНОР ОКСИДА АЗОТА И АКТИВАТОР РАСТВОРИМОЙ ФОРМЫ ГУАНИЛАТЦИКЛАЗЫ | 1998 |
|
RU2139932C1 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ 1,2,5-ОКСАДИАЗОЛО-[3,4-D]-ПИРИДАЗИН-5,6-ДИОКСИДА В КАЧЕСТВЕ АКТИВАТОРОВ РАСТВОРИМОЙ ФОРМЫ ГУАНИЛАТЦИКЛАЗЫ И СРЕДСТВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЫ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ НА ИХ ОСНОВЕ | 1997 |
|
RU2165256C2 |
| ИНГИБИТОР NO-ЗАВИСИМОЙ АКТИВАЦИИ РАСТВОРИМОЙ ФОРМЫ ГУАНИЛАТЦИКЛАЗЫ | 2001 |
|
RU2189392C1 |
| СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АРОМАТИЧЕСКИХ ГИДРОКСИПРОИЗВОДНЫХ | 1995 |
|
RU2078333C1 |
| ДОНОР ОКСИДА АЗОТА, АКТИВИРУЮЩИЙ РАСТВОРИМУЮ ФОРМУ ГУАНИЛАТЦИКЛАЗЫ, ИНГИБИРУЮЩИЙ АГРЕГАЦИЮ ТРОМБОЦИТОВ И ОБЛАДАЮЩИЙ СПАЗМОЛИТИЧЕСКИМ И СОСУДОРАСШИРЯЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ | 2001 |
|
RU2208438C1 |
| СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РАУНДАПА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ | 1996 |
|
RU2105973C1 |
Использование: определение микроколичеств ртути, экспресс-анализ объектов окружающей среды. Сущность: последовательно смешивают ферментный препарат на основе пероксидазы, раствор тиомочевины и анализируемую пробу, а также растворы пероксида водорода и орто-дианизидина. При этом в качестве ферментного препарата используют водорастворимый твердый раствор пероксидазы в хитазане, а анализируемую пробу вводят через 3 - 7 мин после раствора тиомочевины. В момент введения пероксида водорода начинают отсчет и фиксируют время появления красно-коричневого окрашивания в ячейке с полученным раствором. Определение концентрации ртути в диапазоне 10-3-10-5мкг/мл проводится по градуировочному графику.
СПОСОБ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОКОЛИЧЕСТВ РТУТИ, предусматривающий последовательное смешивание ферментного препарата на основе пероксидазы, раствора тиомочевины, анализируемой пробы, растворов пероксида водорода и ортодианизидина, регистрацию изменения окраски раствора и спектрофотометрическое определение количества ртути в анализируемой пробе, отличающийся тем, что в качестве ферментного препарата используют раствор пероксидазы в хитазане, а анализируемую пробу вводят через 3 - 7 мин после раствора тиомочевины.
