СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДУОДЕНОГАСТРАЛЬНОГО РЕФЛЮКСА Российский патент 1994 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для качественной экспресс-диагностики дуоденогастрального рефлюкса (ДГР).

Известен метод качественного и количественного выявления желчных кислот в желудочном содержимом - метод тонкослойной хроматографии (прототип).

Желудочное содержимое, полученное натощак, или любая порция базального содержимого, полученная при фракционном исследовании, фильтруется через марлю для удаления комочков слизи и непереваренной пищи, рН сока доводят до 7,0-8,0 добавлением нескольких капель насыщенного раствора углекислого натрия. К 1 мл подготовленного таким образом желудочного содержимого приливают 5 мл 96^о этилового спирта, перемешивают и нагревают в течение 5 мин в водяном термостате при 80^о С. После центрифугирования (3000 об/мин, 5 мин) надосадочную жидкость сливают в пробирки с широким горлышком ("сахарные стаканчики") и выпаривают на кипящей бане досуха. Осадок дважды промывают 5 мл эфира с целью удаления холестерина и растворяют в 0,2 мл 96^о спирта для качественной реакции.

Для качественного выявления ЖК микроколичества спиртового экстракта (10-20 мл) наносят на хроматографические пластины. После высушивания пластины проявляют опрыскиванием 10%-ным спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты и помещают в сушильный шкаф при 105^о С. При достаточно высокой концентрации ЖК в желудочном содержимом на хроматограмме выявляют их в виде отдельных пятен. В случае небольшой концентрации - в виде сплошной линии [1].

Недостатком метода является трудоемкость метода выполнения в ходе подготовки материала и качественного выявления ЖК, т.е. подготовки его к хроматографии, а именно: полная потеря нативности желудочного содержимого за счет добавления 96^о этилового спирта, нагревание в течение 5 мин при 80^оС, выпаривание на кипящей водяной бане досуха, промывание в эфире; наличие хроматографических пластин, которые производятся за рубежом.

Все выше перечисленное затрудняет возможность применения хроматографического метода определения ЖК в желудочном содержимом, в связи с чем уменьшается возможность ранней диагностики ДГР.

Цель изобретения - упрощение способа и повышение точности. Указанная цель достигается тем, что проводят кристаллооптическое исследование пробы в виде высушенных капель желудочного содержимого (средняя порция базального и стимулированного содержимого) исследуемого больного с последующим изучением ее оптической картины в скрещенных николях поляризационного микроскопа.

С целью упрощения процесса и повышения точности капли базального и стимулированного пентагастрином содержимого, объемом 0,01-0,03 мл каждая, наносят на стеклянную пластинку, накрывают покровным стеклом, затем сушат при Т = 35-38^о С на протяжении 3-6 ч, микроскопируют в поляризованном свете и при наличии в препарате оптически активных дендритных включений регистрируют изменение состава желудочного содержимого.

Способ осуществляют следующим образом. Среднюю (2-3) порцию базального и стимулированного (например, пентагастрином) НЖС в виде капель (3-4), объемом 0,01-0,03 мл каждая, наносят раздельно на предметные стекла, накрывают каждую покровным стеклом и высушивают в суховоздушном шкафу при Т = 35-38^о С на протяжении 3-6 ч - для полного удаления влаги.

Полученный препарат микроскопируют в поляризованном свете (например в поляризационном микроскопе "МИН-8") и при наличии в нем оптически активных дендритных включений определяют присутствие ЖК, а следовательно, наличие ДГР.

Кристаллооптическое исследование выполнено поляризационным микроскопом (МИН-8). При повышенном содержании ЖК и НЖС (базального и стимулированного секретов) в препаратах присутствуют дендритные формы.

Всем исследуемым больным проводили количественное определение содержания ЖК в НЖС.

На фиг.1-6 представлен способ определения дуоденогастрального рефлюкса.

П р и м е р 1. Здоровый С., 31 г., без наследственной отягощенности по патологии ЖКТ.

Технология: при зондовом исследовании желудочного содержимого получены 4 порции базального и 4 порции стимулированного пентагастрином секрета. На предметное стекло нанесли 3 капли НЖС третьей порции базального секрета, каждая объемом 0,01 мл, накрыли покровными стеклами и высушили в термостате при Т = 35^о С на протяжении 3 ч, затем микроскопировали. При исследовании препаратов в поляризованном свете микроструктурные поверхности высушенных капель НЖС оптически не активны, так как отсутствуют оптически активные включения. Видны ветвящиеся структуры (фиг.1). При исследовании третьей порции базального содержимого методом тонкослойной хроматографии ЖК не определяются, что свидетельствует об отсутствии ДГР.

На предметные стекла нанесли 3 капли НЖС второй порции стимулированного пентагастрином секрета, каждая объемом 0,03 мл, накрыли покровными стеклами, сушили в термостате при Т = 38^о С на протяжении 6 часов, затем микроскопировали. При исследовании препаратов в поляризованном свете микроструктурные поверхности высушенных капель НЖС оптически не активны. Видны ветвящиеся микротипы (фиг.2). При исследовании этой же порции стимулированного секрета методом тонкослойной хроматографии ЖК не определяются, что свидетельствует об отсутствии ДГР.

Модельный композит, приготовленный из наборов стандартных ЖК, содержание гликохолевой кислоты в которых равно 80 ммоль/л. Для приготовления препарата 3 капли стандартного раствора гликохолевой кислоты, каждая объемом 0,01 мл, нанесли на предметные стекла, накрыли предметными стеклами и сушили 3 часа при Т = 35^о С, затем микроскопировали. При исследовании препарата в поляризованном свете присутствуют дендритные оптически активные структуры (фиг.3).

Второй модельный композит, приготовленный из набора стандартных ЖК, содержание которых равно 40 ммоль/л, нанесли в виде 3 капель (каждая объемом 0,03 мл) на предметные стекла, накрыли покровными стеклами и сушили 6 ч при Т = 38^о С, препарат микроскопировали в поляризованном свете. В препарате присутствуют дендритные оптически активные включения (фиг.4).

П р и м е р 2. Больной А., 35 лет. Диагноз: язвенная болезнь пилородуоденальной зоны, подострая фаза рецидива, с локализацией язвенного дефекта в луковице ДПК. Функциональный дуоденостаз с наличием ДГР (рентгенологически и гастродуоденофиброскопически).

Технология: 3 капли НЖС третьей порции базального секрета больного, объемом 0,01 мл каждая, нанесли на предметные стекла, накрыли покровными стеклами и сушили в термостате при Т = 35^о С на протяжении 3 ч, затем микроскопировали в поляризованном свете. В закристаллизованной капле присутствуют дендритные оптически активные включения (фиг.5). При исследовании третьей порции базального содержимого методом, описанном в прототипе, повышено содержание ЖК до 31,2 ммоль/л, что подтверждает наличие ДГР.

П р и м е р 3. Больной И., 45 лет. Диагноз: хронический антральный гастрит, типа В, с сохраненной секреторной функцией, фаза обострения. Функциональный бульбодуоденостаз с наличием ДГР.

Технология: 3 капли НЖС второй порции стимулированного секрета больного нанесли на предметные стекла, каждая объемом 0,03 мл, накрыли покровными стеклами, сушили 6 ч в термостате при Т = 38^о С, затем микроскопировали в поляризованном свете. В препарате выявлены оптически активные дендритные включения, свидетельствующие о наличии ЖК, а следовательно, ДГР (фиг.6). При исследовании этой же порции желудочного секрета методом, описанным в прототипе, повышено содержание ЖК до 30,1 ммоль/л, что подтверждает наличие ДГР.

Эффективность кристаллографического способа диагностики ДГР по сравнению с прототипом заключается в том, что, не проводя хроматографического и биохимического исследований, требующих больших технических и материальных затрат, можно по типам оптически активных включений проводить качественный анализ желудочного содержимого и диагностировать ДГР (бульбодуоденостаз с недостаточностью пилорического жома желудка). Способ информативен, прост в исполнении. Присутствие ЖК диагностируется по наличию оптически активных дендритных форм.

Использование: в медицине и биологии, может применяться для качественной экспресс-диагностики дуоденогастрального рефлюкса. Сущность: капли базального и стимулированного содержимого объемом 0,01 - 0,03 мл каждая, наносят на предметное стекло, накрывают каждую покровным стеклом, сушат при t = 35 - 38°С в течение 3 - 6 ч, затем исследуют в поляризованном свете. И при наличии в препаратах оптически активных дендритных включений определяют дуоденогастральный рефлюкс. Способ прост и позволяет повысить точность определения наличия дуоденогастрального рефлюкса. 6 ил.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДУОДЕНОГАСТРАЛЬНОГО РЕФЛЮКСА путем определения желчных кислот в желудочном содержимом in vitro, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения точности способа, капли базальной и стимулированной порций нативного желудочного содержимого наносят на предметное стекло, накрывают каждую покровным стеклом и сушат 3 - 6 ч в термостате при 35 - 38^oС, затем исследуют в поляризованном свете и при наличии в препарате оптически активных дендритных включений определяют наличие дуоденогастрального рефлюкса.