СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИПЕРАДРЕНЕРГИЧЕСКОЙ ФОРМЫ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ Российский патент 1995 года по МПК G01N33/48 G01N33/52 

Изобретение относится к медицине и касается способа диагностики и прогнозирования гиперадренергического варианта течения гипертонической болезни, который обосновывается на оценке адренорецепции клеточных мембран и может быть использован для выявления риск-группы заболевания указанного типа при массовых или профилактических обследованиях, а также для уточнения диагноза уже имеющегося заболевания и его дифференцированного лечения.

Известны способы диагностики гипертонической болезни, в основе которых лежат различные клинические методы, такие как динамический контроль величин артериального давления (АД), исследование сосудов глазного дна, признаки гипертрофии левого желудочка.

Известны биохимические способы диагностики и прогнозирования развития гипертонической болезни. Большая часть их относится к двум направлениям исследований в области патогенеза гипертонической болезни (ГБ): выявлению нарушений мембранной проницаемости для различных групп ионов (отечественные работы возглавлены Ю. В. Постновым, С. Н. Орловым, В. А. Люсовым) и выявлению нарушений гормональной регуляции (катехоламиновой и резин-альдостероновой систем).

Известен способ прогнозирования благоприятного или неблагоприятного течения ГБ, основанный на биохимическом методе определения в сыворотке крови активности фермента аминооксидазы (прототип) (М. М. Миррахимов, К. К. Шатемирова, Ж. С. Рафибекова, Т. А. Макарова. - Способ прогнозирования течения гипертонической болезни).

Описанный способ прогнозирования неблагоприятного течения ГБ имеет отношение к диагностированию и прогнозированию гиперадренергической формы ГБ, поскольку недостаточность фермента аминооксидазы может быть одной из причин избыточного содержания катехоламинов в крови.

Недостатками описанного способа является необходимость венопукнции, сложность (многоэтапность) и длительность (6-7 ч рабочего времени лаборанта) процесса определения.

Цель изобретения - упрощение и ускорение способа.

Цель достигается тем, что опытный образец крови помещают в гипотоническую среду с рН 7,0-7,4. добавляют α- или β-адреноблокатор с конечной концентрацией 1,5-4,5˙10^-4 М, инкубируют, негемолизированные эритроциты отделяют центрифугированием с последующим спектрофотометрированием супернатантов при 540 нм и расчетом процента ингибирования гемолиза эритроцитов и при его величине более 16% определяют гиперадренергическую форму гипертонической болезни.

Предлагаемый способ позволяет провести количественную оценку α- и β-адренореактивности мембран эритроцитов (как модели клетки данного организма вообще), отражающей защитные механизмы клеток, развившиеся в ответ на повторяющиеся деструктивные влияния повышенного содержания катехоламинов.

Способ основан на том, что гемолиз эритроцитов в гипоосмотической среде тормозится при добавлении в среду α- или β-адреноблокаторов, оказывающих защитное стабилизирующее действие на мембраны клеток.

Способ осуществляется следующим образом.

Периферическую или венозную кровь разбавляют, смешивая в пробирке с равным объемом физиологического раствора.

В 6 центрифужных пробирок наливают одинаковое количество полуизотонического раствора NaCl в буфере с рН 7,1. В пробирки 1 и 2 приливают по 0,1 мл дистиллированной воды, в пробирки 3 и 4 - по 0,1 мл водного раствора β-адреноблокатора анаприлина, в пробирки 5 и 6 - по 0,1 мл водного раствора α-адреноблокатора пирроксана в действующих концентрациях. Содержимое пробирок перемешивают.

Во все 6 пробирок приливают разбавленную физиологическим раствором кровь, перемешивают и оставляют на 30 мин при комнатной температуре, после чего негемолизированные эритроциты отделяют центрифугированием с последующим спектрофотометрированием при 540 нм и расчетом процента ингибирования гемолиза эритроцитов. Пример обработки полученных результатов представлен в таблице.

Исходя из величин α- и β-адренореактивности мембран ( α-АРМ и -АРМ), приведенных в таблице, и установленного диапазона нормальных величин 2,0-16,0% по поводу двух обследованных лиц можно сделать следующее заключение. У обследуемого Р-ва, величины α-АРМ и β-АРМ которого находятся в середине диапазона нормы, не бывает значительных и/или частых подъемов содержания катехоламинов в крови. У обследуемого Ст-на β-АРМ на 30%, α-АРМ на 125% превышают верхнюю границу нормы, из этого следует, что подъемы содержания катехоламина в крови у Ст-на бывают регулярно, и страдающим звеном является система регуляции сосудистого тонуса, к которой α-АРМ имеет прямое отношение.

С использованием предложенного метода были проведены обследования трех групп людей:
I. Группа практически здоровых людей.

II. Группа больных с гиперадренергической формой гипертонической болезни II ст.

III. Группа больных гипертонической болезнью II ст., протекающей без нейровегетативных кризов.

Диагноз заболевания ГБ II ст. у всех больных подтвержден данными ЭКГ (гипертрофия левого желудочка), рентгенологическими (увеличение левого желудочка III-IУ степени), изменениями сосудов глазного дна (ангиопатия сетчатки гипертоническая).

У большинства больных 2-й группы клинические проявления гипертонических кризов были идентичными. Из субъективных ощущений и объективных признаков в различных сочетаниях отмечались: чувство жара, сердцебиение, тяжесть и колющие боли в области сердца, полиурия, дрожь в теле, чувство страха, озноб, головные боли, головокружение. Объективно у всех больных во время криза выявлялись гиперемия либо бледность кожных покровов, тахикардия и повышение АЖ. Это состояние длилось от 1 ч до нескольких часов и прекращалось после купирования гипертонического криза.

На чертеже приведено распределение индивидуальных величин α-и β-АРМ у трех групп обследованных: I - практически здоровые люди, II - группа больных ГБ II ст., с гиперадренергическим вариантом течения; III - группа больных ГБ II ст., протекающей без нейровегетативных проявлений.

Следует отметить, что, несмотря на различия в вариантах течения ГБ, величины максимального (во время криза) и привычного АД у больных II и III групп достоверно не различались (148/87 и 137/86 мм рт.ст. соответственно) и, следовательно, не могли иметь критериального значения. Тем более информативными в этом плане являются значимые различия величин α- и β-адренореактивности в этих группах. По сравнению со здоровыми людьми у лиц обеих групп с заболеваниями ГБ II ст. среднегрупповые величины α- и β-АРМ достоверно увеличены в 3,5 раза во II группе и в 1,7 раза в III группе (р < 0,05). Но основной интерес представляют достоверные различия (р < 0,001) между величинами АРМ во II и III группах: по α-АРТ 35,6 и 16,1 ед., по β-АРМ - 26,8 и 13,6 ед. соответственно. На чертеже видна возможность уверенного индивидуального диагностирования клинической формы ГБ (гиперадренергической или без нейровегетативных проявлений) по величинам АРМ. Из приведенного сравнительного анализа можно сделать вывод о высокой информативности предлагаемого способа для дифференцированной диагностики гиперадренер- гического варианта течения ГБ.

Предлагаемый способ имеет следующие достоинства и преимущества: способ прост в исполнении - определение α- и β-АРМ (с параллельными пробами у одного обследуемого как это показано в таблице, выполняется одним лаборантом за 30 мин, серия анализов для 5 обследуемых - за 1,5 ч.

Использование: в медицине для диагностики и прогнозирования гиперадренергической формы гипертонической болезни (ГБ). Сущность изобретения: микроколичество крови с антикоагулянтом помещают в гипотоническую среду (0,42% NaCl в фосфатном буфере с pH 7,0 - 7,4), содержащую в опытной пробе α или b -блокатор в количестве 1,5 - 4,5 × 10^-4 М , выдерживают 10 - 40 мин, отделяют негемолизированные эритроциты центрифугированием, супернатанты контрольной и опытной проб спектрофотометрируют при 540 нм и по процентному отношению экстинкцией опытной пробы и контрольной судят об уровне α -или b -адренорецепции мембран и при его величине более 16% определяют гиперадренергическую форму ГБ. 1 ил., 1 табл.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИПЕРАДРЕНЕРГИЧЕСКОЙ ФОРМЫ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ, включающий определение активности адренергической системы в образце крови в сравнении с контролем, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, образец крови помещают в гипотоническую среду с рН 7,0 - 7,4, добавляют α или b адреноблокатор с конечной концентрацией (1,5 - 4,5) · 10^-4 моль, инкубируют, негемолизированные эритроциты отделяют центрифугированием с последующим спектрофотометрированием супернатантов при 540 нм и расчетом процента ингибирования гемолиза эритроцитов и при его величине более 16% определяют гиперадренергическую форму гипертонической болезни.