ПОДЛОЖКА ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭПИДЕРМИСА Российский патент 1995 года по МПК A61L15/14 

Изобретение относится к области биологии и медицины, а именно к трансплантологии, и может быть использовано для трансплантации эпидермиса в процессе пластики кожных дефектов.

В экспериментальной медицине известна трансплантация кусочков эпидермиса, выращенных вне организма, с помощью подложки. Известная подложка представляет собой фильтровальную бумагу, смоченную культуральной средой. Кусочки эпидермиса размещают на указанной подложке и переносят на рецептивное ложе, приводя первые в тесный контакт с грануляционной тканью.

Однако при использовании известной подложки невозможно снять эпидермис с донорского участка кожи, отделенный от дермы с помощью неполного вакуума.

В экспериментальной и клинической медицине известно также использование специальной газопроницаемой мембраны для трансплантации эпидермиса. Последний выращивают в виде монослоя на этой же мембране в культуре ткани и затем переносят на поверхность кожного дефекта.

Недостатком известной подложки является невозможность ее использования для снятия и трансплантации эпидермиса в виде крыш кожно-вакуумных пузырей, полученных с помощью отрицательного давления на донорском участке кожи.

В экспериментальной и клинической медицине известна подложка, состоящая из слоя влагопроницаемого материала - марли и нанесенного на нее слоя вазелина. Известную подложку используют для трансплантации эпидермиса, выращенного в культуре ткани. При этом подложку вазелиновым слоем прикладывают к роговому слою эпидермиса. Последний удерживается вазелином на подложке и вместе с ней может быть перенесен на раневую поверхность, где его укладывают ростковым слоем вниз. Подложку удаляют с раневой поверхности лишь через 6-10 cуток после трансплантации.

Недостатком известной подложки является невозможность ее использования для снятия и трансплантации крыш кожно-вакуумных пузырей с донорского участка кожи, а также невозможность ее быстрого удаления с поверхности раны после выполнения трансплантации.

Наиболее близким по совокупности признаков и получению требуемого технического результата (прототипом) к заявляемому изобретению является известная в экспериментальной и клинической медицине подложка, состоящая из целлофановой пленки (влагопроницаемый носитель) толщиной 35-40 мкм, покрытой на одной поверхности двумя высушенными слоями глицерин-желатинового раствора. Причем первый внутренний слой прилежащий к целлофану имеет толщину 15-25 мкм и содержит желатину и глицерин в соотношении 1:3, тогда как второй, наружный слой имеет толщину 10-20 мкм и имеет соотношение желатины и глицерина 4: 1. Наружный глицерин-желатиновый слой покрыт в свою очередь слоем медицинского клея для дерматома толщиной 5-8 мкм. В процессе использования подложки ее накладывают поверхностью, покрытой клеем, на донорский участок кожи (на котором предварительно кожно-вакуумные пузыри вскрывают и из них удаляют жидкость) и придавливают. Затем подложку берут пинцетом за край со стороны подрезанных сторон пузырей, срывают ее вместе с отслоенным эпидермисом (поскольку последний оказывается прочно фиксированным к подложке с помощью клеевого слоя) и переносят на рецептивное ложе, где эпидермис вместе с подложкой укладывают ростковым слоем вниз. Сверху кладут марлевый тампон. Последний прижимают к подложке за счет фиксации его бинтованием. Тампон и повязку обильно смачивают раствором Хэнкса. Между тампоном и турами бинта помещают термометр. Тампон подогревают сверху с помощью лампы "Солюкс" или грелки до 35-37^oC. Такую температуру поддерживают в течение 10-15 мин. После этого удаляют бинт, тампон и целлофановую пленку подложки вместе с частью расплавленных глицерин-желатиновых слоев.

Несмотря на то, что данная подложка позволяет одновременно переносить с донорского участка все островки эпидермиса, получаемые в результате воздействия на донорский участок неполного вакуума и последующего частичного подрезания по периметру крыш кожно-вакуумных пузырей, у нее имеется несколько недостатков:
- достаточно большая длительность и трудоемкость процедуры удаления подложки с рецептивного ложа, как одного из главных этапов процедуры трансплантации эпидермиса;
- определенная вероятность снижения жизнеспособности трансплантата за счет воздействия повышенной температуры;
- ненадежность процедуры отделения подложки от эпидермиса на рецептивном ложе, особенно возрастающая при недостаточно высокой температуре в помещении, где осуществляется трансплантация, обусловленная возможностью быстрого перехода растворимого слоя подложки в гелеобразное состояние при недостаточно высокой температуре; при этом возникают осложнения в виде удаления части островков эпидермиса вместе с удаляемой частью подложки;
- нанесение избыточного количества медицинского дерматомного клея на раневую поверхность, не покрытую островками перенесенного эпидермиса в промежутках между ними, возможно, ухудшающее условия для развития трансплантированного эпидермиса;
- потеря большого количества перевязочного материала во время трансплантации.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи, заключающейся в повышении надежности одномоментной трансплантации группы частично подрезанных крыш кожно-вакуумных пузырей с донорского участка на рецептивное ложе, снижении трудоемкости данной процедуры, сокращении затрат времени и материалов, повышении жизнеспособности эпидермального трансплантата и улучшении условий его развития.

Указанная задача достигается тем, что в известной подложке, состоящей из целлофана, выполняющего роль влагопроницаемого носителя, и двух растворимых глицерин-желатиновых слоев, покрытых слоем медицинского клея, согласно изобретению в качестве растворимого слоя используют смесь желатиноля с глицерином, находящихся в высушенном состоянии, соотношение между которыми 1: 1-1: 4, толщиной 1-5 мкм; а слой медицинского клея наносят на донорский участок непосредственно перед размещением подложки.

Подложка для трансплантации эпидермиса содержит в качестве влагопроницаемого носителя целлофановую пленку толщиной 28-30 мкм. На поверхности целлофановой пленки размещен один высушенный слой желатиноль-глицеринового раствора толщиной 1-5 мкм. Соотношение желатиноля к глицерину в слое 1:1-1: 4.

Подложку изготовляют в стерильных условиях следующим образом. Берут стеклянную пластину толщиной 1,5 мм и стерилизуют ее (размер стеклянной пластины определяется размером участка подложки, который желают в дальнейшем использовать). На лицевую сторону стерилизованной в 70-градусном спирте стеклянной пластины укладывают стерилизованную в 70-градусном спирте полиэтиленовую прокладку толщиной 120 мкм с ровной поверхностью и такого размера, чтобы края прокладки со всех сторон не доходили до краев стеклянной пластины на 2-3 мм. Целлофановую пленку толщиной 30 мкм кипятят в стерилизаторе, охлаждают и во влажном состоянии накладывают на лицевую сторону стеклянной пластины поверх полиэтиленовой прокладки. Свободные края целлофановой пленки при небольшом натяжении загибают на тыльную поверхность стеклянной пластины, обрезают и, смазав (края) 10%-ной желатиной с добавкой глицерина в качестве пластификатора, склеивают по типу конверта. Стеклянную пластину с закрепленной целлофановой пленкой ставят в термостат и высушивают при температуре 35-45^oC.

Готовят желатиноль-глицериновый раствор. Для чего к 100 мл раствора желатиноля (комерческий препарат, выпускаемый во флаконах емкостью 450 мл, и представляющий собой 8%-ный стерильный раствор частично гидролизованной желатины, используемый в клинике в качестве плазмозаменяющего средства) добавляют 8-32 г стерильного глицерина и перемешивают. Для большей надежности в асептичности приготовленной смеси ее можно после приготовления автоклавировать.

Для нанесения желатиноль-глицеринового слоя на целлофановую пленку, стеклянную пластину с закрепленной на ней целлофановой пленкой погружают вертикально в желатиноль-глицериновый раствор, находящийся при комнатной температуре. Сразу после этого пластину извлекают из раствора со скоростью близкой к 0,5 см/с и в горизонтальном положении помещают в термостат при температуре 35-45^oC на 2-24 ч. При этом снизу должна быть та поверхность пластины, на которую был завернут целлофан. Приготовленную таким образом подложку, находящуюся в свою очередь в закрепленном состоянии на стеклянной пластине, хранят в стерильных условиях при комнатной температуре и влажности. Толщина растворимого слоя при этом оказывается равной 1-5 мкм.

Уменьшить толщины нанесенного на целлофан желатиноль-глицеринового слоя можно путем разбавления исходного раствора водой, увеличить - за счет увеличения концентрации веществ в растворе с помощью выпаривания. При наличии специального оборудования нанесение желатиноль-глицеринового раствора можно производить с помощью поливочных машин.

Подложку используют следующим образом.

Непосредственно перед использованием подложки группу островков эпидермиса в виде крыш кожно-вакуумных пузырей, полученных путем воздействия на кожу донорского участка отрицательного давления, достигающего -0,7 кг/см кв., в течение 40-70 мин в вакуумной камере, подрезают у основания на 1/3 - 1/2 периметра. Все пузыри подрезают с одной и той же стороны. С помощью стерильного марлевого тампона из них аккуратно удаляют жидкость. После подсыхания поверхности отделенного эпидермиса на донорский участок равномерным сплошным, но минимально тонким слоем с помощью пульвеpизатора наносят медицинский клей для дерматома, разведенный этиловым эфиром в соотношении 1: 3-1:4. При этом окружающую поверхность кожи экранируют, например, с помощью листа бумаги в центре которого вырезано отверстие, по размерам и форме соответствующее донорскому участку.

После нанесения клея на донорский участок с островками отделенного эпидермиса на него накладывают соответствующий по размерам и форме участок подложки поверхностью, покрытой желатиноль-глицериновым слоем, и придавливают через марлевый тампон. Затем берут пинцетом за край подложки со стороны подрезанных сторон пузырей и срывают ее вместе с отслоенным эпидермисом, прикрепленным клеем к желатиноль-глицериновому слою. Подложку переносят на рецептивное ложе и укладывают эпидермисом вниз. На подложку сверх кладут марлевый тампон, обильно смоченный изотоническим раствором хлорида натрия, который прижимают к подложке и удерживают 1-3 мин. Затем удаляют тампон и целлофановый слой подложки вместе с частью желатиноль-глицеринового слоя. Островки эпидермиса сохраняются на поверхности рецептивного ложа.

На трансплантированный эпидермис сверху накладывают один слой сухой, стерильной марли, поверх которой черепицеобразно кладут несколько сухих тампонов. Все фиксируют бинтом. Первую перевязку делают через двое суток, в ходе которой максимально аккуратно удаляют тампоны (нижний слой марли не трогают), а на их место помещают новые тампоны. Затем перевязки делают через 1-2 дня. В ходе их удаляют тампон, нижний слой марлечки не трогают, ее максимально аккуратно меняют через каждые 4-6 дней.

На донорский участок накладывают стерильную марлевую повязку, которую меняют с интервалом 2-3 cуток до полного его заживления, которое наступает как правило через 5-7 cут после взятия эпидермиса.

При изготовлении и использовании заявляемой подложки для трансплантации эпидермиса на этапе отработки оптимальных ее параметров было установлено, что наилучший эффект от использования предлагаемой подложки регистрировался при соотношении желатиноля к глицерину в растворе 1:1-1:4. При этом подложка была достаточно эластичной, а растворимый слой ее прочно связывался с поверхностью целлофана. Уменьшение концентрации глицерина, когда на одну весовую часть желатиноля приходилось 0,5; 0,25; 0,125; и менее весовых частей глицерина, приводило к тому, что подложка становилась очень хрупкой, могла растрескиваться при подрезании, а край вырезанного участка подложки приобретал многочисленные зазубрины, что ухудшало рабочие свойства подложки в момент срывания крыш кожно-вакуумных пузырей с донорского участка. Снижалась также эластичность подложки, ухудшалась связь ее с отделенным эпидермисом (через клей) на донорском участке.

Увеличение концентрации глицерина, когда на одну весовую часть желатиноля приходилось 8, 12, 16 частей его приводило к тому, что растворимый слой подложки становился слишком мягким, не обладающим достаточной прочностью, чтобы обеспечить снятие отслоенного эпидермиса с донорского участка. Последний недостаток возрастал при увеличении толщины растворимого слоя.

Толщина растворимого слоя при применении описанной методики изготовления подложки колеблется от 1 до 5 мкм. После выпаривания, в результате которого концентрация ингредиентов увеличивалась двукратно, и нанесения такого раствора на целлофановый слой подложки толщина растворимого слоя также увеличивалась приблизительно в 2 раза. Подложка сохраняла высокую работоспособность. Однако использование подложки с более толстым, чем в исходном состоянии растворимым слоем, по-видимому, нецелесообразно в связи с нанесением на раневую поверхность избыточного количества желатиноля и глицерина в процессе выполнения трансплантации.

После двукратно разведения исходного раствора дистиллированной водой подложка (с уменьшенной приблизительно в два раза толщиной растворимого слоя) также сохраняла свою работоспособность. Однако при большем разведении исходного раствора (в 4, 8, 16, 32, 64 раза) росла вероятность растрескивания подложки при ее вырезании, ухудшался контакт с клеем, увеличивалась вероятность ее плохого расслоения по растворимому слою при удалении целлофанового слоя.

Чистый слой целлофана и целлофан, покрытый разведенным в воде глицерином, совершенно не способны выполнять специфические функции подложки.

Таким образом, проведенные исследования показали, что для создания раствора для нанесения на целлофановый слой подложки наиболее целесообразно к водному раствору желатиноля, в котором в 100 мл его содержится 8 г желатиноля, добавить от 8 до 32 г глицерина. И после нанесения на целлофановый слой подложки по описанной методике это приведет к образованию растворимого слоя подложки толщиной 1-5 мкм, в котором соотношение желатиноля к глицерину будет 1:1-1:4.

П р и м е р 1. У больного П., 62 лет (история болезни N 2960) с диагнозом: посттромбофлебитический синдром, трофическая язва левой голени после проведения комплексного консервативного лечения, очистки язвы и появления розовых грануляций 26.11.1988 г. была произведена аутотрансплантация эпидермиса. На обработанную спиртом кожу внутренней поверхности правого плеча в области средней трети поместили вакуумную камеру. Откачивая воздух из камеры и понизив давление до -0,65 кг/кв.см дожидались образования сплошного слоя пузырей. Затем камеру удаляли и все пузыри подрезали у основания на 1/3 периметра, все с одной и той же стороны. С помощью стерильного марлевого тампона из них аккуратно удаляли жидкость. В результате на площади около 10 см² оказывался практически сплошной слой отслоившихся от дермы участков эпидермиса. На донорский участок после подсыхания рогового слоя с помощью пульверизатора наносили сплошной минимально тонкий слой разведенного этиловым эфиром дерматомного медицинского клея. Сверху укладывали круглый участок подложки, диаметром 4 см, растворимым слоем на поверхность донорского участка и с помощью сухого тампона тщательно придавливали. Поверхность язвы аккуратно подчищали скальпелем. Взяв пинцетом за край подложки со стороны подрезанных краев участков отделенного эпидермиса, ее срывали вместе с эпидермисом и переносили на поверхность язвы. Сверху клали марлевый тампон, обильно смоченный физиологическим раствором хлорида натрия, аккуратно придавливали и удерживали рукой. Через 2 мин удаляли марлевый тампон и без всякого затруднения снимали целлофановый слой подложки. Сверху на раневую поверхность с островками трансплантированного эпидермиса клали один слой стерильной сухой марли и черепицеобразно несколько сухих тампонов, которые с помощью бинта фиксированы к голени. Первую перевязку делали через два дня, затем ежедневно. При этом тампоны удаляли каждый раз, тогда как нижний слой марли через 4-6 дней. Наблюдали, что через 7 сут после трансплантации у больного полностью прошли болевые ощущения из области язвы. Спустя 11 сут (7.12.88 г. ) более 2/3 поверхности язвы в ее центральной части покрывал приживший эпидермис. Последний непрерывно разрастался и спустя 29 сут после трансплантации практически полностью закрыл раневую поверхность. Через несколько дней больной был выписан домой.

П р и м е р 2. У больного А., 27 лет (история болезни N 3161), с диагнозом: циркулярный ожог III Б cтепени правой голени, 12.12.88 г. была выполнена аутотрансплатнация эпидермиса. С помощью двух вакуумных камер сформировали сплошной слой пузырей на внутренней поверхности левого плеча и передне-левой поверхности живота на площади около 10 см² каждая. Образовавшиеся пузыри подрезали у основания на каждом участке с одной и той же стороны, с помощью марлевого тампона удаляли жидкость и после подсыхания рогового слоя на них наносили медицинский дерматомный клей. Сверху укладывали соответствующие по размеру и форме участки подложки, с помощью которых срывали и переносили на отслоившиеся островки эпидермиса. Последние укладывали на передне-наружную поверхность правой голени - участок, где к этому времени были сформированы грануляции и отсутствовали малейшие надежды на самопроизвольную эпителизацию (см. ил. 2). Сверху клали слой марли и черепицеобразно тампоны. Все фиксировали бинтованием. Через несколько дней в несколько этапов, начиная с задней поверхности голени, на раневую поверхность трансплантировали расщепленные кожные лоскуты, получаемые традиционным способом. На участке ожоговой поверхности с трансплантированным эпидермисом смену тампонов производили через 1-2 дня, смену нижнего слоя марли через 4-6 дней. Явное разрастание трансплантата наблюдали через 12 сут. (см.ил.3). Полное заживление всей раневой поверхности наступило через 28 дней. Спустя сутки больной был выписан домой. На контрольном осмотре через 6 месяцев после трансплантации (20.05.89 г.) была видна хорошо зажившая бывшая раневая поверхность. Территории, покрытые эпидермотрансплантатом, отличались от прилежащих территорий, покрытых участками расщепленного кожного лоскута, единообразием покрытия, отсутствием рельефа.

Таким образом, приведенные примеры показывают, что заявляемая усовершенствованная подложка для одновременной трансплантации группы крыш кожно-вакуумных пузырей в отличие от прототипа обеспечивает повышение надежности процедуры отделения подложки от эпидермиса на рецептивном ложе, снижение трудоемкости и длительности данной манипуляции, сохранение высокой жизнеспособности трансплантата, уменьшение количества дерматомного клея, попадающего на непокрытые островками эпидермиса участки раневой поверхности, ведет к снижению затрат перевязочного материала.

Использование: биология и медицина, а именно трансплантология. Цель: повышение надежности одномоментной трансплантации группы частично подрезанных крыш кожно-вакуумных пузырей с донорского участка на рецептивное ложе, снижение трудоемкости данной процедуры, сокращение затрат времени и материалов, повышение жизнеспособности эпидермального трансплантата и улучшение условий его развития. Сущность изобретения: подложка для трансплантации эпидермиса содержит слой влагопроницаемого материала, представленного целлофаном толщиной 30 мкм, и растворимый слой толщиной 1 - 5 мкм, который состоит из желатиноль-глицериновой смеси при соотношении желатиноля к глицерину (1:1) - (1:4).

ПОДЛОЖКА ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭПИДЕРМИСА, содержащая слой влагопроницаемого материала и растворимый слой, отличающаяся тем, что растворимый слой содержит желатиноль-глицериновую смесь при соотношении желатиноля и глицерина 1:1 - 14 при толщине слоя 1 - 5 мкм.