Способ получения поливалентной вакцины против лептоспироза животных Советский патент 1983 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам получения вакцин, применяемых для профилактики лептоспироза животных.

Известен способ изготовления поливалентной феноловой вакцины для профилактики лептоспироза сельскохозяйственных животных и пушных зверей, включающий выращивание лептоспир 6 серотипов на вывороточной среде в баллонах, смешивание выращенных культур, консервирование фенолом, расфасовку, проверку стерильности, безвредности, активности.

Известный способ, однако, не позволяет получить в вакцине достатоную концентрацию специфических антитгенов, что вынуждает,.вводить животным большие дозы вакцины: крупному рогатому скоту - до 25 мл, свиньям до 17 мл. Продолжительность создаваемого иммунитета у крупного рогатого скота незначительна и составляет 1-2 мес. при однократном и 3-8 мес. при двухкратном введении вакцины.

. Цель изобретения - получение вакцины, вызывающей длительный иммунитет -высокой напряженности.

Это достигается тем, что в качестве исходных штаммов берут штаммы

лептоспир: ВГНКИ-1, ВГНКИ-2, ВГНКИ-3, ВГНКИ-4, ВГНКИ-5, ВГНКИ-б, а осаждение и инактивацию лептоспир проводят одновременно добавлением в питательную среду после выращивания лептоспир трихлоруксусной кислоты в количестве 3,0-3,3% с последуквдей нейтрализацией этой кислоты в образовавшемся осадке из лептоспироз0ных антигенов и сывороточного бедка питательной среды и добавлением к нему адьюванта, например, гидроокиси алюминия в количестве 32-35%.

В процессе изготовления вакци5ны не происходит снижения иммуногенной и антигенной активности лептоспир благодаря использованию трихлоруксусной кислоты, взятой в оптимальных для воздействия на леп0тоспиры и лептоспирозные антигены количествах - 3,0-3,3%.

Исследованиями установлено, что применение трихлоруксусной кислоты в других концентрациях приводила к

5 ;снижению иммуногенной активности .

Не менее важным фактором для получения вакцины, вызывающей у животных длительный иммунитет высокой

0 напряженности и продолжительности (до 6 мес. у молодняка и 12 мес. . у взрослых животных), является введение адьюванта, состоящего из 3235% гидроокиси алюминия, и наличия 6-8% осажденного сывороточного белка питательной среды в составе вак цины. Способ изготовления концентрированной поливалентной вакцины против лептоспироза заключается в следующем, Берут штаммы лептоспир, выделенные от сельскохозяйственных животных, селекционированные по признаку максимальной иммуногенной. и антиген ной активности и относящиеся к шеети серологическим группам: 1.Leptospira grippotyphosa ВГНКИ-1 2.L.iсterohaemorrhagiae ВГНКИ3.L. la ВГНКИ-3 4.L.tarassovi ВГНКИ-4 5.L.hebdomad is ВГНКИ-5 6.L.pomona ВГНКИ-6. Штаммы вырс1щивс1ют на сывороточной среде в реакторах или баллонах смешивают, осаждают и инактивируют трихлоруксусной кислотой в количестве 3,0-3,3%, отделяют осадок от надосадочной жидкости, кислоту нейтрализуют водным раствором аммиака добавляют гидроокись алюминия до 35%-ной концентрации, консервируют мертиолятом, расфасовывают, контрол руют на стерильность, безвредность активность,. Штаммы лептоспир выделены от сельскохозяйственных животных и селек ционированы по признаку максимальной иммуногенной и антигенной актив ности. Штаммы являются вакцинными и по широте иммуногенного спектра обе печивают изготовление препарата, профилактирующего заболевание сель скохозяйственных и промлсловых живо ных в любой точке Советского Союза и в большинстве регионов мира. Штаммл депонированы во Всесоюзном государственном научно-контрол ном институте ветпрепаратов МСХ ССС и сохраняются на сывороточной среде при -190°С, При осуществлении способа изгот ления концентрированной поливалент ной вакцины против лептоспироза животных штаммы ВГНКИ-1, ВГНКИ:-2, ВГНКИ-3, ВГНКИ-4, ВГНКИ5, ВГНКИ-6 выращивают в отдельных реакторах (объем 200-250 л) или бутылях (объ ем 20 л ) на сывороточной среде в т чение 5-10 сут. при 27-28°С до мак симального накопления бактериальной массы. Культуры проверяют на чистоту и интенсивность роста, определяют ко личество микробных тел в 1 мл среды путем подсчета под микроскопом при увеличении в 400 раз. Культуры, содержащие 50 млн лептоспир и более в 1 мл среды, смешивают с таким расчетом, чтобы в реакторе-смесителе содержалось по 20% лептоспир серологических групп pomona, tarassovi, grippotiphosa , hebdomadis и no 10% лептоспир canicola, iсterohaemorrhag I ae . К смеси культур приливают при постоянном перемешивании насыщенный раствор трихлоруксусной кислоты до создания ее концентрации в среде 3,03,3%. Обработанную кислотой культуру отстаивают 1 ч, надосадочную жидкость деконтируют, оставшийся осадок центрифигируют на центрифуге с угловым или горизонтальным ротором при 3000 об/мин в течение 5 мин, а на центрифуге сепараторного типа - при скорости вращения ротора 1015 тыс. об/мин (производительность 50 л/ч). Центрифугат, представляющий собой плотную мазеобразную массу, собирают и обрабатывают 10%-ным водным раствором аммиака, нейтрализуюПШМ трихлоруксусную кислоту. Аммиак приливают при постоянном перемешивании до установления рН 7,4-7,6. Добавляют дистиллированную воду из такого расчета, чтобы осгщок был сгущен в 25-30 раз по сравнению с исходной культурой. К полученной массе добавляют гидроксал до 33-35%-ной концентрации и мертиолят 1:10000, смесь тщательно перемешивают и выдерживают 5 сут при 18-22°С. Вакцину расфасовывают в 50- - .i 100-миллитровые флаконы. Вакцину проверяют на стерильность и безвредность общепринятыми метоАнтигенные свойства вакцины контролируют на пяти кроликах весом 2,0-2,5 кг, которым вводят внутримышечно однократно по 0,3 мл вакцины. Через 25 дней у привитых кроликов берут кровь и исследуют по реакции микроагглютинации и лизиса с лептоспирами, входящими в состав вакцины. Вакцину считают активной по антигенным свойствам, если титр антител составляет 1:800 и выше к летоспирам серологических групп pomona, tarassovi, grippotiphosa, hebdomadis и не менее чем 1:200 по отношению к лептоспирам icterohaemoгrhagiае и canicola. Иммуногенные свойства вакцин проверяют на 30 золотистых хомяках 1,5-2-месячного возраста, 15 из которых вводят вакцину однократно

внутримышечно по 0,05 мл. Через 25 дней заражают контрольных и привитых хомяков оттитрованной смертельной дозой лептоспир трех серологических групп.

Вакцину считают активной при выживании не менее 12 опытных и гибели 9 контрольных хомяков.

Вакцину вводят однократно внутриьшшечно в дозе от 0,3 до 2 14л вместо 17-25 мл принятых для существующей вакцины. Она вырабатывает иммунитет- ВЫСОКОЙ напряженности продолжительностью до 6 мес. у молоняка и до 12 мес. у взрослых животных.

Срок годности вакцины 12 мес. со дня изготовления.

Способ получения концейтрированиой поливалентной вакцины сокращает затраты биофабричного производства, а применение вакцины исключает гибель животных от лептоспироза, аборты в неблагополучных стадах, лептоспироносительство и затраты на его лечение, утилизацию продуктов убоя. Формулаизобретения

1. Способ получения поливалентной вакцины против лептоспироза

животных, включающий подбор штаммов лептсспир, выращ1{вание их на жидкой питательной сывороточной среде, осаждение, инактивацию и консервирование их, отличак)щийся тем, что, с целью создания вакцины, вызывающей длительный иммунитет высокой напряженности, в качестве исходных штаммов берут штамки лептоспир ВГНКИ-1, ВГНКИ-2, ВГНКИ-3,

0 ВГНКИ-4, ВГНКИ-5, ВГНКИ-6, а осаждение и инактивацию лептоспир проводят одновременно добавлением в питательную среду после выращивания лептоспир трихлоруксусной кислоты в коS личестве 3,0-3,3% с последующей

нейтрализацией этой кислоты в образовавшемся осадке из лептоспирозных анантигенов и сывороточного белка питательной среды и добавлением к

0 нему адьюванта, например, гидроокиси ёшюминия в количестве 32-35%.

2. Способ по п. 1, отличающий с я тем, что нейтрализацию трихлоруксусной кислоты в осадке

5 из лептоспирозных антигенов и сывороточного белка питательной средл проводят, например, водным раствором аммиака.