АССОЦИИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА И КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 1994 года по МПК A61K39/116 

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой ассоциированную вакцину против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота.

Лептоспироз и кампилобактериоз крупного рогатого скота являются после бруцеллеза наиболее значимыми болезными, вызывающими нарушения функции воспроизводства вследствие абортов во второй половине стельности, метриты, вагиниты, нарушения полового цикла. Лептоспироз и кампилобактериоз часто протекают в виде смешанной инфекции.

Химиотерапия лептоспироза и кампилобактериоза недостаточно эффективна, трудоемка и дорогостояща. Поэтому основным и практически единственным эффективным методом борьбы с лептоспирозом и кампилобактериозом является вакцинация, которая профилактирует как аборты, так и другие клинические проявления болезни, а также носительство возбудителя.

Вакцинацию крупного рогатого скота против лептоспироза проводят поливалентной вакциной ВГНКИ против лептоспироза животных или вакциной против лептоспироза животных, содержащих в основе антигены из штаммов лептоспир серогрупп Pomona (ВГНКИ-6), Tarassovi (ВГНКИ-4), Grippotyphosa (ВГНКИ-1), Icterohaemorrhagiae (ВГНКИ-2), Canicola (ВГНКИ-3), Hebdomadis (ВГНКИ-5), Sejroe (Hardjo), адьювант, консервант и воду [1].

Использование указанных вакцин профилактирует лептоспироз крупного рогатого скота и естественно не создает иммунитета против кампилобактериоза. Дополнительное использование для иммунизации животных вакцины против кампилобактериоза крупного рогатого скота, содержащей смесь антигенов из штаммов Campylobacter fetus subspecies intes - tinalis ВГНКИ NП-10/16 и subspecies fetus ВГНКИ N 43/3 и адьювант [2], способствует повышению выхода телят, но не обеспечивает профилактику кампилобактериоза, вызываемого Сampylobacter jejuni у новорожденных телят. Кроме того, проведение двух вакцинаций вдвое увеличивает затраты труда и растягивает сроки вакцинации, что значительно снижает ее эффективность при смешанной инфекции.

Известна также ассоциированная вакцина против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота, включающая антигены лептоспир серогрупп Pomona, Sejroe (Hardjo), Canicola, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae и антиген кампилобактерий Vibrio fetus, инактиватор и гидроокись алюминия [3] .

Недостатком данной вакцины является неспособность вызывать формирование иммунитета к лептоспирам серогруппы Tarassovi и к Сampylobacter jejuni ввиду отсутствия их в вакцине.

Целью изобретения является повышение иммуногенной активности целевого продукта.

Это достигается тем, что вакцина в качестве антигенов лептоспир серогруппы Pomona содержит штамм ВГНКИ-6, в качестве антигенов лептоcпир серогруппы Grippotyphosa - штамм ВГНКИ-1, дополнительно антигены лептоспир серогруппы Tarassovi - штамм ВГНКИ-4, взятые в смеси в равном соотношении при концентрации 750 млн. микробных клеток в 1 см³ фосфатного буфера, а в качестве антигенов кампилобактерий - смесь антигенов из штаммов Campylobacter fetus subsp. venerialis ВГНКИ N 43/3 и Campylobacter jejuni ВГНКИ N 169/17, взятых в равном соотношении в концентрации 150 млрд. микробных клеток в 1 см³ физиологического раствора, в качестве интактиватора формалин и дополнительно в качестве адьюванта белок сыворотки крови овец и альбумин при следующем соотношении компонентов. об.%:
Смесь антигенов из
штаммов лептоспир
серогрупп: Pomona
ВГНКИ-6, Tarassovi
ВГНКИ-4, Grippotyphosa
ВГНКИ-1, Sejroe "Hardjo",
взятых в равном соотношении
при концентрации 750 млн.

микробных клеток
в 1 см³ фосфатного буфера 49,12-50,23
Смесь антигенов из
штаммов Gampylobacter
fetus subsp. venerialis
ВГНКИ N 43/3 и
Campylobacter jejuni
ВГНКИ N 169/17, взятых
в равном соотношении при
концентрации 150 млрд.

микробных клеток в
1 см³ физиологического раствора 33,43-34,23 Гидроокись алюминия 14,00-16,00 Формалин 0,29-0,31 Белок сыворотки крови 1,11-1,13 Альбумин 0,05-0,10
Используемый для изготовления ассоциированной вакцины штамм Campylobacter ferus subsp. jejuni ВГНКИ N 169/17 ранее использовался как производственный для изготовления диагностикума и специфической противокампилобактериозной сыворотки [4].

В соответствии с Bergey's "Sistematic Bacteriology" USA, 1984, v.1, p. 114-115 [5] , наименования штаммов кампилобактерий, используемых для изготовления ассоциированной вакцины следующие:
вместо Campylobacter fetus subsp. fetus ВГНКИ N 43/3 - Campylobacter fetus subsp. venerialis ВГНКИ N 43/3;
вместо Campilobacter fetus subsp. jejuni ВГНКИ N 169/17 - Campylobacter jejuni ВГНКИ N 169/17.

П р и м е р 1. Производственные штаммы лептоспир серогрупп Pomona ВГНКИ-6, Tarassovi ВГНКИ-4, Grippotyphosa ВГНКИ-1, Sejroe "Hardjo" выращивают раздельно в баллонах или реакторах в среде на основе фосфатного буфера, обогащенной белком сыворотки крови овец и альбумином в течение 5-10 дней до накопления не менее 75 млн/см³ лептоспир, культуры лептоспир смешивают в равном соотношении, добавляют формалин до концентрации 0,1-0,15%, выдерживают 1-2 ч, концентрируют путем ультрафильтрации на установке УПВ-6 до содержания 750 млн. микробных клеток в 1 см³ фосфатного буфера, добавляют формалин до конечной концентрации в среде 0,23-0,27%.

Производственные штаммы кампилобактерий Campylobacter fetus subsp. venerialis ВГНКИ N 43/3 и Campylobacter jejuni ВГНКИ N 169/17 выращивают раздельно на мясопептонном агаре в течение 1-3 сут. Смывают культуры формалинизированным физиологическим раствором с концентрацией формалина 0,5% и инактивируют их в течение 3 дней при температуре 37^оС, устанавливают концентрацию 150 млрд./см³ микробных клеток с последующим их смешиванием в равном соотношении.

Антигены из штаммов лептоспир смешивают с антигенами из штаммов кампилобактерий в соотношении 1,5:1, добавляют 6%-ный гель гидроокиси алюминия.

Полученную ассоциированную вакцину против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота расфасовывают во флаконы и контролируют на внешний вид, наличие посторонних примесей, концентрацию водородных ионов, стерильность, безвредность и активность.

Получают 3 серии ассоциированной вакцины против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота при следующем соотношении компонентов, об.% (табл.1).

Готовая вакцина представляет собой по внешнему виду жидкость желтоватого цвета с рыхлым осадком, легко разбивающимся при встряхивании в гомогенную взвесь.

П р и м е р 2. Активность ассоциированной вакцины против лептоспироза и кампилобактериоза серии 1-3 проверяют на кроликах массой 3-3,5 кг в сравнении с вакциной против лептоспироза крупного рогатого скота и со смесью формалинизированной культуры кампилобактерий, входящих в состав ассоциированной вакцины. Кроликам вводят однократно внутривенно оттитрованные минимальные дозы препаратов, вызывающие у них полный иммунный ответ. Сыворотку крови кроликов исследуют через 23-25 дней в РМА и РА для определения титра антител к лептоспирам и кампилобактериям. Результаты представлены в табл.2.

Из материалов табл. 2 видно, что ассоциированная вакцина индуцирует у животных более активный иммунный ответ, при этом различные антигены не оказывают угнетающего влияния друг на друга, а в отношении кампилобактерий лептоспиры оказывают синергидный эффект.

П р и м е р 3. Проводят исследования по определению иммунизирующей дозы ассоциированной вакцины серии 2 против лептоспироза и кампилобактериоза для крупного рогатого скота и напряженности иммунитета у вакцинированных животных. В хозяйстве, благополучном по лептоспирозу и кампилобактериозу, вакцинируют 30 стельных коров данной вакциной. Вакцину вводят животным однократно внутримышечно в дозах 4, 6 и 8 см³, используя по 10 коров на дозу, 10 коров (контроль) прививают вакциной против лептоспироза животных внутримышечно однократно в дозе 2 см³ и 10 коров (контроль) - смесью формалинизированной культуры кампилобактерий, входящих в состав предложенной ассоциированной вакцины внутримышечно однократно в дозе 6 см³.

Результаты представлены в табл.3.

Из данных табл.3 видно, что ассоциированная вакцина против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота вызывает формирование у животных более напряженного иммунитета как к лептоспирозу, так и к кампилобактериям, чем отдельные антигенные препараты.

Ассоциированную вакцину против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота используют в хозяйствах однократно внутримышечно в следующих дозах:
телятам с двухмесячного возраста и старше - 4 см³;
коровам и нетелям - 6 см³;
быкам-производителям - 10 см³.

Коров вакцинируют за месяц до покрытия или в первой трети стельности. Вакцинации не подлежат животные в последний месяц стельности и в течение месяца после отела.

Использование предложенной вакцины в ветеринарной практике позволяет снизить до минимума материальный ущерб, наносимый лептоспирозом и кампилобактериозом крупному рогатому скоту.

Использование: биотехнология, ассоциированная вакцина против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота. Сущность изобретения: вакцина содержит антигены лептоспир серологических групп Pomona, Tarassovi, Gippotyphosa, sejroe и антигены кампилобактерий из штаммов ВГНКИ N 43/3 и ВГНКИ N 169/17, подобранные в оптимальных соотношениях, в качестве инактиватора - формалин, а в качестве адъюванта - гидроокись алюминия, белок сыворотки крови овец и альбумин. Вакцина позволяет создать иммунитет высокой напряженности как к лептоспирозу, так и к кампилобактериозу крупного рогатого скота. Ее использование в ветеринарной практике позволяет снизить до минимума материальный ущерб, наносимый указанными заболеваниями. 3 табл.

АССОЦИИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА И КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, включающая антигены лептоспир серогрупп Pomona, Grippotyphosa и Sejros (Hardjo), антигены кампилобактерий, инактиватор и гидроокись алюминия в качестве адъюванта, отличающаяся тем, что она содержит в качестве антигенов лептоспир серогруппы Pomona штамм ВГНКИ-6, в качестве антигенов лептоспир серогруппы Grippotyphosa штамм ВГНКИ-1 и дополнительно антигены лептоспир серогруппы TaraSSovi штамм ВГНКИ-4, взятые в смеси в равном соотношении при концентрации 750 млн микробных клеток в 1 см³ фосфатного буфера, в качестве антигенов кампилобактерий - смесь антигенов из штаммов Campylobacter fetus Subsp venerialis ВГНКИ N 43/3 и Campylobacter jejuni ВГНКИ N 169/17, взятых в равном соотношении в концентрации 150 млрд микробных клеток в 1 см³ физиологического раствора, в качестве инактиватора формалин и дополнительно в качестве адъюванта белок сыворотки крови овец и альбумин при следующем соотношении компонентов, в об.%:
Смесь антигенов из штаммов летоспир серогрупп Pomona - ВГНКИ-6, TaruSSovi ВГНКИ-4, Grippotyphosa ВГНКИ-1, Sejros(Hardjo), взятых в равном соотношении при концентрации 750 млн микробных клеток в 1 см³ фосфатного буфера 49,12 - 50,23
Смесь антигенов из штаммов campylobacter fetus Subsp. venerialis ВГНКИ N 43/3 и Campylobacter jejuni ВГНКИ N 169/17, взятых в равном соотношении при концентрации 150 млрд микробных клеток в 1 м³ физиологического раствора 33,43 - 34,23
Гидроокись алюминия 14,00 - 16,00
Формалин 0,29 - 0,31
Белок сыворотки крови овец 1,11 - 1,13
Альбумин 0,05 - 0,10