Поливалентная вакцина ВГНКИ против лептоспироза животных и способ ее получения и использования Советский патент 1983 года по МПК A61K39/02 C12N5/00 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к способам получения вакцин, применяеь лх для профилактики лептоспироза животных..

Известна поливалентная феноловая вакцина для профилактики лептоспироза сельскохозяйственных животных и пушных зверей и способ ее изготовле имя. Способ включает выращивание лептоспир шести серогрупп на сывороточной или альбуминовой среде в баллонах, смешивание выращенных культур в определенных сочетаниях с последующим консервированием фенолом, расфасовкой, проверкой стерильности, безвредности, активности t|1.

.Известное предложение 13 не позволяет получить в вакцине достаточную концентрацию специфических антигенов, что вынуждает вводить ее животным двукратно в больших дозах: крупному рогатому,скоту - до 25 мл, свиньям - до 17 мл.

У вакцинированных животных создается непродолжительный иммунитет у поросят и ягнят до трех месяцев, у телят и взрослых свиней - до шести месяцев.

Известна вакцина и способ ее изготовления, включающая, выращивание шести штаммов лептоспир, ВГНКИ-1, ВГНКИВГНКИ-3, ВГНКИ-ii, ВГНКИ-5, ВГНКИ-6, осаждение лептоспир трихлоруксусной кислотой в количестве отстаивание, декантирование надосадочной жидкости, дополнительное сгущение осадка центрифугированием, нейтрализацию кислоты в осадке 10%-ным водным раствором аммиака. К нейтрализованному центрифугату добавляют дистиллированную воду из расчета, чтобы осадок был сгущен в 25-30 раз по сравнению с исходной культурой. К полученной массе добавляют гидроксал до 3335%-ной концентрации. Вакцина вызывает образование иммунитета продолжительностью до шести месяцев у молодняка и двенадцати -месяцев у взрослы животных при однократном введении в дозе 0,3-2,0 МП 2. Известная вакцина 2 не нашла п менения из-за сложной технологии пр готовления и трудности введения ее животным вследствие большой плотнос ти. Цель изобретения - повышение имм ногенности вакцины. Для дости жения цели вакцина соде жит антигены указанных серотипов пр следующем соотношении, %: ВГНКИ-210- 0 ВГНКИ-3lO-ilO 8ГНКИ-4 lO-ilO ВГНКИ-6 ,lO-tO или антигенов указанных серотипов при следующем соотношении их, %: ВГНКИ-110-i(0 erHKM-if10-ifO ВГНКИ-510-itO ВГНКИ-610-{О при следующем соотношении компонентов на 1 л вакцины: Антигены лепто100-120 мг спир Гидроокись алю25,7-28,9 г миния Сывороточ 1ый 3,5-7,0 г белок 0,1-0,2 г Консервант До 1 л Вода: Для достижения поставленной цели обрабатывают трихлоруксусной кислотой половинный объем ольтуры лепто спир после осаждения белка и выдерживания надосадочную жидкость декан тируют в количестве 50-70% от обработанной кислотой культуры, а остав шуюся масть после ее нейтрализации смешивают с отделенной второй половиной культуры о Вакцину вводят в следующих дозах крупному рогатому скоту в возрасте 1-12 мес. - 4,0-4,1 мл, а в возраст от 12 месяцев и старше 8-10 мл, сви ньям мл, поросятам в возрасте 1-3 мес. вакцинируют двукратно в до зе 2,0-2,1 мл, мелкому рогатому ско ту вакцину вводят в дозе 2-5 мл, а плотоядным - 1-3 мл. Пример 1. Для приготовлени депонированной поливалентной вакцин ВГНКИ против лептоспироза животных берут шесть штаммов лептоспир ВГНКИ-1, ВГНКИ-2, ВГНКИ-3, ВГНКЙ-4, ВГНКИ-51 ВГНКИ-6, отобранных по широте иммуногенного спектра, обеспечивающих изготовление препарата, профилактирующего заболевание сельскохозяйственных и промысловых животных от лептоспироза в любой точке Советского Союза и в большинстве регионов мира. Выращивают их на сывороточной питательной среде, консервируют тиомерсалом в концентрации 1:10000, далее к половинному объему культуры до-, бавляют трихлоруксусную кислоту до , концентрации для осаждения белка среды и лептоспир. Полученную смесь выдерживают 2-3 ч для выпадения осадка, надосадочную жидкость декантируют в количестве 5560 от общего объема смеси, оставшийся осадок нейтрализуют аммиаком иЧюсле нейтрализации .смешивают со второй половиной исходной культуры, затем добавляют 6,0-6,1%-ный раствор гидроокиси алюминия в количестве 29-30. Полученную таким образом вакцину расфасовывают и контролируют на активность, безвредность и стерильность. ; Пример 2. Берут штаммы лептоспир, выделенные от сельскохозяйственных животных и селекционированные по признаку максимальной иммуногенной и антигенной активности и относящиеся к шести серологическим группам: ВГНКИ-1, ВГНКИ-2, ВГНКИ-3, ВГНКИ-4, ВГНКИ-5, ВГНКИ-6. Для изготовления вакцины штаммы выращивают на сывороточной среде в реакторах или баллонах, смешивают в двух вариантах: 1-й вариант: ВГНКИ-2, ВГНКИ-3, ВГНКИ-4 И: ВГНКИ-6. 27Й вариант: ВГНКИ-1, ВГНКИ-4, ВГНКИ-5 и ВГНКИ-6. Смесь культур лептоспир консервируют мертиолятом 1:10000. Консервированную культуру выдерживают при комнатной температуре не менее 10-12 ч. Половину объема консервированной и подготовленной для изготовления серии вакцины культуру осаждают трихлоруксусной кислотой, добавляя к 1 л культуры 30 мл насыщенного раствора трихлоруксусной кислоты. Белок среды под действием кислоты переходит в со(-тояние геля и выпадает вместе с лептоспирами в осадок. Через 2 ч после добавления кислоты сифогом декантируют надосадочную жидкость в объеме 60 от общего количества обработанной лсислотой культуры. Осадок нейтрализуют насыщенным раствором аммиака до рН 7,. При этом наблюдается растворение осадка. Нейтрализованную массу вносят в реактор с оставшейся культурой лептоспир и добавляют 30 гидроокиси алюминия 6%-ной концентрации, т.е. на 700 мл культуру - 300 мл гидроокиси алюминия. Смесь энергично перемешивают и проводят расфасовку вакцины во флаконы при постоянной работе механической мешалки.. Вакцину, изготовленную этим способом, контролируют на стерильность и безвредность общепринятыми методаТаблицаСостав вакцины

Антигены лептоспир100 мг120 мг

Адьювант состо- 29,2 г35,9 г

ящий из: а)Один литр готовой вакцины содержит: 100 мг антигенов лептоспир серогрупп Icterokaemorrkagiae, Саnicola, Ponraka, Tarassovf (по 25 мг на каждую серогруппу) 23,2 г адьюванта, 0,1 г консервайта - соли тиомерсала (мертиолат) 970,6 мл. воды. б)1 ,л готовой вакцины 2-го вариа та содержит в своем составе: 120 мг антигенов лептоспир серогрупп Grippo typhosa, Pomona, Tarassovi, Hebdomad is (ло 30 мг на кащую серогруп82

100 л 5л

100 л

ЮОО 2500

10000 9 пу) 35,9 г адьюванта, 0,2 г тиомерсала, 9бЗ,8 мл вод1. Антигенные свойства вакцины контролируют на пяти кроликах весом 2,02,5 кг, которым вводят вакцину внутрибрюшинно однократно в дозе 3,0 мл. Через 25-27.дней после введения вакцины у кроликов берут кровь и определяют титр в каждой пробе сыворотки в РИА с лептоспирами всех серологических групп, входящих в состав вакчины. Вакцину считают активной, если не менее, чем у четырех из пяти вакционированных кроликов титр сыворотки будет не ниже 1 к лептоспирам: grippo-typhosa, pomona, tarassov, hebdomad is и не ниже 1:100 к лептоспирам; icterohaemorrhagfe, canlcola. Сравнительные данные по феноловой, концентрированной и депонированной вакцине представлены в табл. 2. Т а 6 лица 2 Сравнительная характеристика вакцины Вакцина, изготовленная предложенным способом, имеет значительные преимущества перед применяемой феноловой и концентрированной вакциной. Поливалентную вакцину ВГНКИ вводят однократно в дозе: крупному рогато «у СКОТУ до 12 мей. k мл., от 1 до 2 лет - 8 мл, взрослым животным 10 мл, свиньям - до 3 мес. - 2 мл, от 3 до 10 мес. - 6 мл, хрякам и свиноматкам - 10 мл, мелкому рогатому скоту до 6 мес - 2 мл, от 6 до 12 мес. - 2-5 мл, баранам и овцематкам - 5 мл.