Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к средствам специфической профилактики чумы, инфекционного гепатита, аденовироза и парвовирусного энтерита собак.
Для профилактики инфекционных заболеваний собак используют моновакцины и ассоциированные вакцины.
Для профилактики чумы плотоядных, в том числе собак, используют культуральную вакцину из штамма (ЭПМ" [1].
Для профилактики инфекционного гепатита и аденовироза используют моновакцину на основе штамма Adenovirus canis-2 "Ада" [2].
Для профилактики парвовирусных инфекций плотоядных, в том числе и собак, используют моновакцину на основе штамма вируса панлейкопении кошек "Ганибалл" (Virus panleucopenia felline) [3].
Недостаток моновакцин заключается в необходимости проведения профилактических обработок против каждой инфекции в отдельности, что сказывается на затратах труда, растягивает сроки формирования иммунитета у животных, способствует возникновению стрессовых явлений и осложнений.
Для профилактики инфекционного гепатита, аденовироза и парвовирусного энтерита собак используют ассоциированную вакцину на основе штамма Маmmaliadenovirus Adenovirus canis-2 "Ада" и штамма Раrvovirus canis ВГНКИ-18. Вакцину вводят щенкам собак в возрасте 2-2,5 месяцев внутримышечно двукратно в интервале 10-14 дней в дозе 1-2 см3 [4].
Недостатком этой ассоциированной вакцины является то, что она не создает иммунитета против чумы, а это требует дополнительного применения моновакцин, приводящих к дополнительным затратам труда и растяжению сроков иммунизации животных, и возникновению осложнений при наслоении вторичной инфекции.
Целью изобретения является ассоциированная вакцина для профилактики чумы, инфекционного гепатита, аденовироза и парвовирусного энтерита собак, обладающая высокой иммуногенной активностью, безвредностью и повышенным защитным эффектом.
Это достигается получением вакцины, содержащей инактивированную культуральную вирусную суспензию штамма Маmmaliadenovirus Adenovirus canis-2 "Ада" с титром инфекционной активности 104,5-105,0 ТЦД50/см3, инактивированную культуральную вирусную суспензию штамма Virus panleucopenia felline "Ганнибал" с титром инфекционной активности 104,0-105,0 ИД50/см3 и активностью в РГА 1:64-1:256 ГАЕ/см3, культуральную вирусную суспензию штамма Distemper canise "ЭПМ" с титром инфекционной активность 103,0-104,0 ТЦД50/см3, желатозу, сорбит и раствор Хенкса при следующем соотношении компонентов, мас. /об.%: Инактивированная вирусная суспензия штамма Маmmaliadenovirus Adenovirus canis-2 "Ада" с титром инфекционной активности 104,5-105,0 ТЦД50/см3 13,3-16,7 Инактивированная вирусная суспензия штамма Virus panleucopenia felline "Ганнибал" с титром инфекционной активности 104,0-105,0 ИД50/см3 и с активностью В РГА 1:64-1:256 ГАЕ/см3 26,7-33,3 Вирусная суспензия штамма Distemper canise "ЭПМ" с титром инфекционной активности 103,0-104,0 ТЦД50/0,5 см3 16,7-20,8 Гидроокись алюминия 5,3-6,7 25%-ный раствор желатозы 6,4-12,5 50%-ный раствор сорбита 3,1-4,2 Вода дистиллированная 1,3-2,0 Раствор Хенкса Остальное
Ассоциированную вакцину против чумы, инфекционного гепатита, аденовироза и парвовирусного энтерита вводят подкожно или внутримышечно собакам в возрасте более 1 года однократно, а щенкам собак двукратно с интервалом 7-10 дней в дозе 1-2 см3.
П р и м е р 1. Получают инактивированную культуральную вирусную суспензию штамма Маmmaliadenovirus Adenovirus canis-2 "Ада". Для выращивания культуры клеток используют первично-трипсинизированную культуру клеток почек собак 1-3-месячного возраста.
В качестве ростовой среды применяют среду, содержащую 35-40% 0,5%-ного гидролизата лактальбумина на растворе Хенкса, по 25% среды 199 и Игла, 10% сыворотки крови крупного рогатого скота и антибиотики (пенициллин 100 ЕД/см3 и стpептомицин 10 мг на 1 см3 среды). В качестве поддерживающей используют среду, содержащую 30% 0,5%-ного ГЛАЭ и 70% среды 199.
При получении вируса культуру клеток в матрасах со сформировавшимся монослоем заражают штаммом "Ада" в дозе 0,1-0,01 ТЦД50/см3, затем осуществляют его адсорбцию в течение 1 ч при температуре 37оС. После добавления поддерживающей среды вирус инкубируют в термостате (37оС) до накопления титра инфекционной активности 104,5-105,0 ТЦД50/см3. После трехкратного замораживания при (-20)-(-40)оС и оттаивания при 37оС полученную вирусосодержащую культуральную суспензию сливают в одну емкость, добавляют 0,5% формалина для инактивации вируса.
Получают инактивированную культуральную вирусную суспензию штамма Virus panleucopenia felline "Ганнибал".
Первично-трипсинизированную культуру клеток почки котенка заражают при посеве в матрасы нативным ультрафильтратом вируса штамма "Ганнибал" с титром в РГА не ниже 1:16 384 ГАЕ/см3 и инфекционной активностью для культуры клеток почки котенка 104,0-105,0 ИД50/мл. Вирус разводят раствором Хенкса 1:50-1:100 и в каждый матрас вносят по 5-7 мл.
Инкубацию инфицированной культуры клеток проводят при 37оС в питательной среде, содержащей 26% среды Игла, 34% ГЛА на растворе Хенкса, 32% среды 199 на растворе Хенкса и 8% сыворотки крупного рогатого скота. На 9-10 сут. матрасы с культурой клеток замораживают при (-20)-(-40)оС. После оттаивания при комнатной температуре проводят сбор вирусосодержащей жидкости. Сливы вирусосодержащей жидкости объединяют и определяют гемаггютинирующую активность в РГА, которая должна быть не ниже 1:64-256 ГАЕ/см3. Для инактивации вируса к общему объему вирусных сборов добавляют 0,2% формалина.
Получают культуральную вирусную суспензию штамма Distemper canine "ЭПМ".
Вирус чумы плотоядных выращивают в первично-трипсинизированной культуре клеток эмбрионов японских перепелов в ростовой среде, состоящей из 0,5%-ного ГЛА на растворе Хенкса, 25-30% среды 199 и 8-10% сыворотки крупного рогатого скота с добавлением антибиотиков. Вирус вносят в суспензию клеток и выращивают ролерным способом при 37оС. Через 4-6 сут. ростовую среду сливают, а культивирование продолжают в поддерживающей среде, включающей 60-70% среды 199 и 30-40% 0,5%-ного ГЛА на растворе Эрла с добавлением антибиотиков. После полного развития ЦПД вируссодержащую культуральную жидкость сливают, замораживают при температуре (-10)-(-20)оС, оттаивают при комнатной температуре и объединяют с первым сливом (инфекционная активность полученного вируса чумы плотоядных для культуры клеток эмбрионов японских перепелов должна быть 103,0-104,0 ТЦД50/0,5 см3.
К 60-75 л инактивированного парвовирусного компонента добавляют 6-8 л 3%-ного раствора гидрата окиси алюминия. Смесь выдерживают в течение 2 сут. при комнатной температуре, после чего удаляют 20-25 л надосадочной жидкости и добавляют столько же инактивированного аденовирусного компонента и 2 л 3% -ного раствора гидрата окиси алюминия. Полученную смесь тщательно перемешивают и после оттаивания определяют количество остаточного формальдегида, для нейтрализации которого в нее добавляют 2-3% от общего объема растворенного на дистиллированной воде метабисульфита натрия. Общий объем смеси доводят раствором Хенкса до 100 л. В объединенную смесь сборов суспензии вируса чумы плотоядных добавляют стабилизатор для лиофилизации - на 10 л вирусной суспензии 4,5-7,5 л 25%-ного раствора желатозы и 1,5-2,5 л 50%-ного раствора сорбита при тщательном перемешивании на шуттель-аппарате и антибиотики - "Гентамицин", "Мономицин" или "Канамицин" из расчета 20 мг на 1 см3. Смесь охлаждают до 5-10оС в течение 5-7 ч, расфасовывают в стерильные стеклянные флаконы и лиофилизируют.
Ассоциированную вакцину получают путем разведения сухого компонента, содержащего культуральную вирусную суспензию штамма Distemper canine "ЭПМ" с титром инфекционной активности 103,0-10,4,0 ТЦД50/0,5 см3 в жидком на основе инактивированных культуральных вирусных суспензий из штаммов Mammaliadenovirus Adenovirus canis-2 "Ада" и Virus panleucopenia felline "Ганнибал". Получают 3 серии вакцины.
Ассоциированная вакцина против чумы, инфекционного гепатита, аденовирусных инфекций и парвовирусного энтерита собак серии I имеет следующий компонентный состав, мас./об%: Инактивированная вирусная суспензия штамма Маmmaliadenovirus Adenovirus canis-2 "Ада" с титром инфекционной активности 105,0 ТЦД50/см3 13,3 Инактивированная вирусная суспензия штамма Virus panleucopenia felline "Ганнибал" с титром инфекционной активности 105,0 ИД50/см3 и с активностью в РГА 1:256 ГАЕ/см3 26,7 Культуральная вирусная суспензия штамма Distemper canine "ЭПМ" с титром инфекционной активности 104,0 ТЦД50/0,5 см3 16,7 Гидроокись алюминия 5,3 25%-ный раствор желатозы 12,5 50% -ный раствор сорбита 4,2 Вода дистиллированная 0,9 Раствор Хенкса Остальное
Вакцина против чумы, инфекционного гепатита, аденовирусных инфекций и парвовирусного энтерита собак серии 2 имеет следующий компонентный состав, мас. /об. % Инактивированная вирусная суспензия штамма Маmmaliadenovirus Adenovirus canis-2 "Ада" с титром инфекционной активности 104,75 ТЦД50/см3 15,00 Инактивированная вирусная суспензия штамма Virus panleucopenia felline "Ганнибал" с титром инфекционной активности 104,5 ИД50/см3 и с активностью в РГА 1:126 ГАЕ/см3 30,00 Культуральная вирусная суспензия штамма Distemper canine "ЭПМ" с титром инфекционной активности 103,5 ТЦД50/0,5 см3 18,75 Гидроокись алюминия 6,00 25%-ный раствор желатозы 10,95 50%-ный раствор сорбита 3,65 Вода дистиллированная 1,40 Раствор Хенкса Остальное
Вакцина против чумы, инфекционного гепатита, аденовирусных инфекций и парвовирусного энтерита собак серии 3 имеет следующий компонентный состав, мас. /об. %: Инактивированная вирусная суспензия штамма Маmmaliadenovirus Adenovirus canis-2 "Ада" с титром инфекционной активности 104,5 ТЦД50/см3 16,7 Инактивированная вирусная суспензия штамма Virus panleucopenia felline "Ганнибал" с титром инфекционной активности 104,0 ИД50/см3 и с активностью в РГА 1:64 ГАЕ/см3 33,3 Культуральная вирусная суспензия штамма Distemper canine "ЭПМ" с титром инфекционной активности 103,0 ТЦД50/0,5 см3 20,8 Гидроокись алюминия 6,7 25%-ный раствор желатозы 9,4 50%-ный раствор сорбита 3,1 Вода дистиллированная 1,9 Раствор Хенкса Остальное
П р и м е р 2. Изучают безвредность вакцины против чумы, инфекционного гепатита, аденовироза и парвовирусного энтерита собак серии 1 на белых мышах массой 14-16 г, щенках собак в возрасте 2 мес., хорьках 3 мес., норках 4 мес., при введении различных дох вакцины.
Из табл. 1 видно, что вакцина "Тетравак" является безвредной для животных. В результате наблюдения в течение 21 дня после их вакционации животные оставались клинически здоровыми.
П р и м е р 3. Оценку иммунологической эффективности вакцины против чумы плотоядных, инфекционного гепатита, аденовироза и парвовирусного энтерита собак "Тетравак" серии 2 проводят на щенках собак в возрасте 2-5 месяцев, находящихся в питомнике, стационарно неблагополучном по острым заболеваниям собак. Животных вакцинируют двукратно, препарат вводят в дозе по 2 мл с интервалом 2 недели.
Эффективность вводимого животным препарата оценивают посредством изучения динамики накопления специфических антител в сыворотках крови собак, определяемых в следующих серологических реакциях: в реакции нейтрализации (РН) в культуре клеток японских перепелов к вирусу чумы плотоядных, в реакции диффузионной преципитации (РДП) в агаровом геле к возбудителям аденовирусов плотоядных, используя для этого серийно изготовляемый диагностический набор, в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) к возбудителю парвовирусного энтерита собак. Результаты опыта представлены в табл. 2.
Из табл. 2 видно, что вакцина "Тетравак" у щенков собак до шестимесячного возраста индуцирует напряженный иммунитет к вирусу чумы плотоядных, к адено- и парвовирусам собак.
П р и м е р 4. Определяют оптимальную дозу вакцины "Тетравак" серии 3 для щенков собак 2-4-месячного возраста. Животных вакцинируют одно- и двукратно с интервалом 7-10 дней.
Результаты представлены в табл. 3.
Уровень изучения специфических антител в сыворотках крови собак, а также степень выраженности поствакциональной реакции (табл. 3) свидетельствует о том, что наиболее оптимальной дозой вводимой вакцина для щенков массой до 5 кг является двукратное введение вакцины в дозах 1 и 2 см3, а для щенков весом свыше 5 кг в дозе по 2 см3.
Иммунизацию собак проводят за 1 месяц до вязки и не ранее чем через 14 дней после иммунизации против других инфекций. Щенят прививают с 8-недельного возраста. Вакцину вводят подкожно в область лопатки или внутримышечно с внутренней поверхности бедра, собакам массой до 5 кг по 1 см3, массой более 5 кг по 2 см3. Щенков собак через 7-10 дней после прививки ревакцинируют в той же дозе. Животных в возрасте 1 год вакцинируют ежегодно, однократно в тех же дозах.
Использование предложенной вакцины в ветеринарной практике позволяет повысить эффективность проводимых мероприятий по профилактике инфекционных заболеваний собак.
Предложенной вакцине для профилактики чумы, инфекционного гепатита, аденовирусных инфекций и парвовирусного энтерита собак присвоено название "Тетравак".
Использование: ветеринарная вирусология. Сущность изобретения: вакцина содержит инактивированную вирусную суспензию штамма аденовируса собак 2 серотипа "Ада" с титром инфекционной активности 104,5-105,0ТЦД50/см3, инактивированную вирусную суспензию штамма панлейкопении кошек "Ганнибал" с титром инфекционной активности 104,0-105,0ИД50/см3, и гемагглютинирующей активностью 1-64-256ГАЕ/см3, вирусный материал штамма ЭПМ с титром инфекционной активности 103,0-104,0ТЦД50/см3 гидроокись алюминия, сорбит - желатозный стабилизатор, дистиллированную воду и раствор Хенкса. Для инактивации вирусов использован формалин, а для его нейтрализации - метабисульфат натрия. Препарат применяют подкожно или внутримышечно собакам однократно, а щенкам собак - двукратно с интервалом 7-10 дней в дозе 1,0-2,0 см3. 2 с.п.ф-лы, 3 табл.
ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЧУМЫ, ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА, АДЕНОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ И ПАРВОВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА У СОБАК И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ЧУМЫ, ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА, АДЕНОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ И ПАРВОВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА У СОБАК.
