АМИД β -ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С ФЕНИЛБОРОНОВОЙ КИСЛОТОЙ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНУЮ И ПРОТИВОЯЗВЕННУЮ АКТИВНОСТЬ Российский патент 1995 года по МПК C07J53/00 C07J63/00 A61K31/585 

Изобретение относится к новому химическому соединению, конкретно к амиду β-глицирризиновой кислоты с фенилборо- новой кислотой 1-0-[(3 β, 20 β)-11,30-диоксо-30-N-(мета-аминофенилбороновая кислота)-олеан-12-ен-3-ил]-2-0-[ β-D-6-оксо-6-дезо- кси-6-N-(мета- аминофенилбороновая кислота)-глюкопиранозил] -β-D-6-оксо- 6-дезокси-6-N-(мета-аминофенилбороновая кислота)-глюкопиранозид формулы I
где где R проявляющему противовоспалительную и противоязвенную активность.

Указанное соединение, его свойства и способ получения в литературе не описаны.

Основным недостатком широко применяемых в медицине антифлогистиков стероидного и нестероидного типа (ортофен, вольтарен, индометацин, преднизолон, бутадион, бруфен и др.) является ульцерогенное действие на желудочно-кишечный тракт. Поэтому поиск новых противовоспалительных средств, лишенных этого нежелательного свойства, является актуальным.

β -Глицирризиновая кислота (β-ГК) и ее производные известны как противовоспалительные и противоязвенные вещества, обладающие низкой токсичностью.

Вследствие этого в качестве структурного аналога при изучении биологической активности предлагаемого соединения I выбрали β-ГК.

Целью изобретения является поиск нового химического соединения в ряду производных β-глицирризиновой кислоты, обладающего высокой противовоспалительной активностью, сочетающейся с противоязвенным действием.

Поставленная цель достигается амидом β-глицирризиновой (ГК) кислоты формулы I, проявляющим противовоспалительную и противоязвенную активности.

Фармакологические свойства соединения I.

Острая токсичность соединения I определялась на белых беспородных мышах массой 15-20 г при введении в желудок.

Параметры токсичности вычислялись по Литчфильду и Уилкоксону. Данное соединение относится к IV классу малоопасных веществ (LD₅₀ > 7000 мг/кг).

Противовоспалительное действие амида (I) изучали на 2-х моделях воспаления, вызванных каррагенином и формалином. В качестве препаратов сравнения использовали очищенную β-глицирризиновую кислоту (LD₅₀ ≈ 5000 мг/кг), широко применяемый в медицине высокоактивный антифлогистик вольтарен (LD₅₀ вольтарена 380 мг/кг внутрь) и гликопептид ГК с метиловым эфиром L-фенилаланина (Гликопептид II).

Изучаемое соединение вводили в желудок в дозах 100, 50 и 25 мг/кг за 1 ч до воспроизведения воспаления и через 1 и 2 ч после. На модели воспаления, вызванного каррагенином, соединение I в указанных дозах задерживает развитие воспаления по сравнению с контролем (см.табл.1).

Противовоспалительная активность амида превосходит эффект противовоспаления глицирризиновой кислоты в дозах 100 и 25 мг/кг. При воспалении, вызванном формалином, предлагаемое соединение оказывает противовоспалительное действие, аналогичное вольтарену и самому гликозиду в дозе 50 мг/кг, а в дозе 100 мг/кг превосходило по активности препараты сравнения.

В отличие от известных нестероидных противовоспалительных средств соединение I предупреждает развитие деструкций слизистой оболочки желудка. Противоязвенное действие амида (I) изучено на модели экспериментальных язв желудка у крыс, вызванных индометацином и цинкофеном, в сравнении с противоязвенным эффектом известного противоязвенного средства карбеноксолона динатриевой соли кислого сукцината β-глицирретовой кислоты. Соединение I вводили в желудок за 1 ч до введения ульцерогенного агента в дозе 100 мг/кг.

На модели индометациновых язв амид (I) снижает степень поражения слизистой оболочки желудка по сравнению с контролем в ≈ 1,6 раза. На модели цинкофеновых язв амид (I) снижал степень поражения слизистой оболочки желудка по сравнению с контролем ≈ в 2 раза эффективнее. Противоязвенное действие соединения было аналогично эффекту глицирризиновой кислоты и карбоноксолона при введении в равных дозах на данной экспериментальной модели язв желудка. В отличие от карбоноксолона (LD₅₀ 101 мг/кг внутрибрюшинно) амид (I) менее токсичен. Таким образом, соединение I является малоопасным веществом, обладающим выраженной противовоспалительной активностью, сочетающейся с противоязвенным эффектом, что выгодно отличает его от известных противовоспалительных средств (аспирин, вольтарен, индометацин и др.).

Амид I получали с помощью активированного (N-гидроксисунцинимидного эфира) β-глицирризиновой кислоты без предварительной защиты гидроксильных групп углеводной цепи гликозида. При обработке β-ГК избытком N-гидроксисукцинимида (HOSu) в присутствии N,N'-дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК) в среде сухого тетрагидрофурана получали трис-оксисукцинимидный эфир β-ГК при 0^оС, который без выделения подвергали взаимодействию с фенилбороновой кислотой (II) в присутствии избытка триэтиламина (ТЭА) при комнатной температуре. Выход амида (I) 69% Для получения аналитически чистого образца продукт перекристаллизовывали из смеси хлороформа, спирта и эфира. Выход 55%
П р и м е р 1. Изучение противовоспалительной активности.

Противовоспалительное действие амида (I) изучалось на белых беспородных мышах на 2-х моделях воспаления, вызванных 1%-ным раствором каррагенина и 3% -ным раствором формалина. Флогогены вводились в апоневроз стопы одной из задних лапок в дозе 0,05 мл. Изучаемое соединение I давали животным через зонд внутрижелудочно в дозах 25, 50 и 100 мг/кг за 1 ч до введения флогогена и через 1 и 2 ч после воспроизведения отека. Результаты опытов приведены в табл.1.

В качестве препаратов сравнения использовали известное противовоспалительное средство вольтарен, β-глицирризи- новую кислоту и гликопептид II.

П р и м е р 2. Изучение противоязвенного действия амида (I).

Противоязвенную активность соединения I изучали на модели экспериментальных деструкций слизистой оболочки желудка крыс, вызванных внутрижелудочным введением индометацина и цинкофена. О противоязвенной активности препарата судили по уменьшению количества деструкций слизистой оболочки желудка крыс. Накануне воспроизведения деструкций крысы голодали двое суток. Изучаемое соединение вводили животным за 1 ч до воспроизведения язв желудка в дозе 100 мг/кг. Через сутки после воспроизведения деструкций животных забивали под хлороформным наркозом, извлекали желудки и визуально учитывали все поражения слизистой оболочки.

В качестве референс-препаратов использовали β-глицирризиновую кислоту и известный противоязвенный препарат карбеноксолан (динатриевую соль кислого сукцината глицирретовой кислоты) в равных дозах (100 мг/кг).

Результаты экспериментов приведены в табл.2.

Противоязвенное действие препарата аналогично эффекту карбеноксолона и глицирризиновой кислоты при введении в равных дозах.

П р и м е р 3. Получение амида (I).

К раствору 1,64 г (2 ммоль) β-глицирризиновой кислоты (92-95%) в 60 мл сухого тетрагидрофурана при 0^о прибавили 1,2 г (10,4 ммоль) N-гидроксисукцинимида (HOSu) и 1,3 г (6 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодимида и перемешивали при этой температуре 2,5-3 ч, затем при комнатной 6-7 ч и оставили смесь на ночь при 4-8^оС. Отфильтровали выпавший осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату, охлажденному в баке со льдом, прибавили 0,96 г фенилбороновой кислоты (7,6 ммоль) и выдерживали при комнатной температуре с периодическим перемешиванием 24 ч. Вылили смесь в 300 мл ледяной воды, подкислили лимонной кислотой до рН ≈ 3, отфильтровали осадок светло-коричневого цвета, промыли его несколько раз водой на фильтре, высушили, получили 1,63 г порошка светло-коричневого цвета (69%), который перекристаллизовывали из смеси хлороформа, спирта и эфира. Выход аналитически чистого амида (I) 1,30 г (55%). Т.разл. > >250^оС. [α_D²⁰ 40^о (С 0,025; спирт диоксан). R_f 0,51 (соотношение хлороформа, метанола и воды 45:10:1).

ИК, ν, см^-1: 3600-3200 (OH,NH); 1705, 1660 (C=O), 1540 (CONH).

УФ, λ_макс^MeOH (lg ε): 211 нм (4,46); 242 нм (4,23).

C₆₀H₈₀N₃O₁₉B₃ ˙3H₂O. Мол.м. (1233,73).

Вычислено, C 58,41; H 7,03; N 3,40.

Найдено, C 57,86; H 6,97; N 2,95.

Растворяют в смеси спирта и метанола 2:1, хлороформа и спирта 5:1, тетрагидрофуране, диоксане, ДМФА, нерастворим в воде, эфире, гексане.

Таким образом, амид (I) является малоопасным веществом, обладающим выраженной противовоспалительной активностью, сочетающейся с противоязвенным эффектом, что выгодно отличает данное соединение от известных противовоспалительных средств. Соединение менее токсично, чем препараты сравнения.

Использование: в качестве противовоспалительного и противоязвенного средства. Сущность: продукт - амид b-глицирризиновой кислоты с фенилбороновой кислотой: 1-о-[ 3β, 20β-11,30-диоксо-30- N -(мета-аминофенилбороновая кислота)-олеан-12-ен-3-ил] -2-о-[ b - D-6-оксо-6-дезокси-6- N-(мета-аминофенилбороновая кислота)-глюкопиранозил] - b - D -6-оксо-6-дезокси-6- N -(мета - аминофенилбороновая кислота) - глюкопиранозид. Выход 69%, т.разл. > 250°С, [α]2D

Амид b -глицирризиновой кислоты с фенилбороновой кислотой формулы

где

проявляющий противовоспалительную и противоязвенную активности.