3-О-2-ДЕЗОКСИ-α-D-ГАЛАКТО- ИЛИ α-L-РАМНОПИРАНОЗИД МЕТИЛОВОГО ЭФИРА ГЛИЦИРРЕТОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ПРОТИВОЯЗВЕННУЮ АКТИВНОСТЬ И СТИМУЛИРУЮЩИЙ РЕПАРАТИВНУЮ РЕГЕНЕРАЦИЮ КОЖИ Российский патент 2000 года по МПК C07J63/00 A61K31/56 

Изобретение относится к новым биологически активным химическим соединениям, конкретно к 3-O-2-дезокси-α- гликозидам метилового эфира глицирретовой кислоты общей формулы

3-O-[2-дезокси-α -D-галактопиранозил] -11-оксо-20β- метоксикарбонил-30 -норолеан-12-ен-3β-ол (1) и 3-O-[2-дезокси-α -L-рамнопиранозил] -11-оксо-20β-метоксикарбонил -30-норолеан-12-ен-3β-ол (2), проявляющим противоязвенную активность и стимулирующим репаративную регенерацию кожи.

Соединения (1), (2) и их свойства в литературе не описаны.

Номера Государственных регистраций соединений (1) и (2) соответственно 10616395 и 10616295.

Наиболее близким аналогом по строению и свойству противоязвенной (ПЯ) активности для соединений (1) и (2) является глицирризиновая кислота (ГК) (3) [1]. В связи с тем что известно более эффективное соединение в части ПЯ активности, сопоставление соединений (1, 2) проведено с карбеноксолоном (4) - динатриевой солью сукцината глицирретовой кислоты, выпускаемым рядом зарубежных фирм. Основным недостатком карбеноксолона является его токсичность. Так LD₅₀ (4) составляет 101 мг/кг (внутрибрюшинно) [2].

Сопоставление по стимулированию репаративной регенерации кожи (РРК) для (1, 2) проведено с метилурацилом - известным стимулятором РРК [3]. В процессе исследования авторами данной заявки было обнаружено, что ГК наряду с известным свойством ПЯ активности обладает и свойством стимулировать РРК, поэтому ее также использовали в качестве референс-препарата.

Поэтому поиск новых менее токсичных соединений в ряду производных глицирретовой кислоты, обладающих более высокой ПЯ активностью в сравнении с ГК и карбеноксолоном, сочетающейся с другими видами физиологической активности, является актуальным.

В заявленном техническом решении синтезированы новые малотоксичные соединения - производные глицирретовой кислоты, а именно 3-O-[2-дезокси-α -D-галактопиранозил] -11-оксо-20β -метоксикарбонил- 30-норолеан-12-ен-3β-ол (1) и 3-O-[2-дезокси-α -L-рамнопиранозил] -11-оксо-20β- метоксикарбонил -30-норолеан-12-ен-3β-ол (2), сочетающие высокий ПЯ эффект со стимулирующим действием на РРК.

Острая токсичность соединений определялась на белых беспородных мышах массой 15-20 г при введении в желудок. Параметры токсичности вычислялись по Литчфильду и Уилкоксону. LD₅₀ соединения (2) составила 5500 мг/кг.

Соединение (1) при введении мышам до 2000 мг/кг токсичных явлений не вызывало. На основании Постановления Госкомитета стандартов СМ СССР от 10 марта 1976 г. N 579 данные вещества относятся к IV классу малоопасных веществ.

Противоязвенное действие предлагаемых соединений изучалось на крысах на 2-х моделях экспериментальных язв желудка, вызванных индометацином и аспирином, в сравнении с карбеноксолоном и ГК. Исследуемые вещества вводились животным через зонд в желудок в дозе 100 мг/кг. Результаты экспериментов представлены в табл. 1 и 2.

Установлено, что исследованные соединения предохраняют слизистую оболочку желудка от изъязвления. Противоязвенное действие соединения (1) более выражено, чем у карбеноксолона и ГК на модели индометациновых язв, а соединение (2) предохраняет слизистую оболочку желудка крыс от изъявления эффективнее фармакологического и структурного аналогов на модели индометациновых и аспириновых язв (табл. 2).

В связи с тем что соединения (1) и (2) оказывают также стимулирующее действие на репаративную регенерацию кожи крыс, в качестве препарата сравнения использовали метилурацил и ГК. Исследования проводили на трех моделях кожных ран - послойных лоскутных ранах (табл. 3, 4), на модели химического (табл. 5) и термического (табл. 6) ожогов в виде 5%-ных мазей на вазелине.

В группах животных, которых лечили соединениями (1) и (2), заживление кожных ран проходило активнее, чем в группах сравнения с метилурацилом и ГК (табл. 3, 4).

На модели химического ожога, который вызывали у крыс концентрированной соляной кислотой, соединение (1) стимулировало регенерацию кожи эффективнее метилурацила и ГК на 7-й день лечения.

На 15-й день после воспроизведения ожога во всех группах животных регенерация кожи была значительнее, чем у животных, которых лечили метилурацилом и ГК (табл. 5).

На модели термического ожога кожи крыс на 15-й день лечения заживление кожных ран было более эффективным, чем у животных, которых лечили ГК и метилурацилом (табл. 6).

Таким образом, соединения (1) и (2) обладают более высокой противоязвенной активностью, чем ГК и карбеноксолон. Высокая ПЯ активность предлагаемых соединений сочетается со стимулирующим действием на репаративную регенерацию кожи, которая превосходит активность ГК и метилурацила. По сравнению с карбеноксолоном соединения (1) и (2) менее токсичны.

Синтез соединений (1) и (2) проводили в условиях известного способа [4] путем электрофильного гликозилирования метилового эфира глицирретовой кислоты (7) с помощью ацетатов Д-галакталя (5) и L-рамналя (6) в среде хлористого метилена в присутствии молекулярных сит 4 и (сим-коллидин)₂йодоний перхлората (8) (схема 1). Защищенные 2-дезокси-2-йод-производные (9, 10) после очистки колоночной хроматографией дейодировали путем гидрогенолиза в присутствии 10% Pd/C и триэтиламина и деблокировали 5%-ным раствором КОН в метаноле. Общий выход 2-дезокси-гликозидов (1) и (2) составил 67,9 и 74% соответственно.

Сущность технического решения иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение 3-O-[2-дезокси-α -D-галактопиранозил] -11-оксо-20β- метоксикарбонил-30- норолеан-12-ен-3β-ола (1).

2 ммоль (0,55 г) три-O-ацетил-Д-галакталя (5), 2 ммоль (0,97 г) метилового эфира глицирретовой кислоты (7) растворяют в 50 мл абсолютного CH₂Cl₂ в присутствии прокаленных молекулярных сит 4 , перемешивают в течение 30 минут, затем добавляют 1,1 г (сим-коллидин)₂IClO₄ (8). Смесь перемешивают в течение 4-5 часов (контроль по ТСХ, хлористый метилен:метанол = 10:1), фильтруют, промывают 10%-ным раствором Na₂S₂O₃ (2x20 мл), сушат Na₂SO₄, упаривают. Выделяют с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат: пентан - 1:7, 1:5, 1:3, 1:2, 1:1). Системой растворителей 1:3 ---> 1:2 вымывают 1,39 г гликозида (9) (79%), который растворяют в 50 мл этилацетата, добавляют несколько капель Et₃N, в присутствии 1,4 г 10% Pd/C гидрируют в течение 7 дней. Катализатор отфильтровывают, растворитель упаривают, остаток растворяют в 130 мл метанола, приливают 20 мл 5%-ного раствора КОН в метаноле, через 2 часа нейтрализуют ионообменной смолой КУ-2-8

(H⁺-форма), растворитель упаривают, соединение (1) выделяют из хлористого метилена - пентана. Выход 0,86 г (86%), белый порошок. Т.пл. = 226 - 228^oC.

C₃₇H₅₈O₈ (630,9), R_f = 0,37 (CH₂Cl₂ : MeOH = 10:1).

Найдено, %: C 70,4; H 9,3.

Вычислено, %: C 70,4; H 9,3.

[α]20D

УФ-спектр (MeOH), λ_max/нм: 246,4 (lg ε 3,89).

ИК-спектр (ν, см^-1, вазелиновое масло): 1650 (C₁₁=O), 1730-1720 (COOMe), 3600-3200 (OH).

Спектр ЯМР ¹³C (CDCl₃, δ, м.д): 21,7 (C2), 81,8 (C3), 200,3 (C11), 128,6 (C12), 169,4 (C13), 177,0 (C30), 51,8 (C31), 93,6 (C1'), 33,3 (C2'), 69,9 (C3'), 65,8 (C4'), 69,9 (C5'), 63,9 (C6').

Пример 2. Получение 3-O-[2-дезокси-α -l-рамнопиранозил] -11-оксо-20β -метоксикарбонил-30 -норолеан-12-ен-3β-ола (2).

2 ммоль (0,4 г) ди-O-ацетил-L-рамналя (6), 2 ммоль (0,97 г) метилового эфира глицирретовой кислоты (7) растворяют в 50 мл абсолютного CH₂Cl₂, в присутствии прокаленных молекулярных сит 4 перемешивают в течение 30 минут, затем добавляют 1,1 г (сим-коллидин)₂IClO₄ (8). Смесь перемешивают в течение 3-4 часов (контроль по ТСХ), фильтруют, промывают 10%-ным раствором Na₂S₂O₃ (2х15 мл), сушат Na₂SO₄, упаривают. Выделяют с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (CH₂Cl₂ - MeOH, 200:1, 150:1, 100:1, 50:1). Смесью растворителей 150:1 ---> 100:1 вымывают 1,38 г гликозида (10) (84%), который растворяют в 60 мл этилацетата, добавляют несколько капель Et₃N, в присутствии 1,4 г 10% Pd/C гидрируют в течение 8 дней. Катализатор отфильтровывают, растворитель упаривают, остаток растворяют в 130 мл метанола, приливают 20 мл 5%-ного раствора КОН в метаноле, через 1,5 часа нейтрализуют ионообменной смолой КУ-2-8 (H⁺-форма), растворитель упаривают, гликозид (2) выделяют из хлористого метилена - пентана. Выход 1,11 г (89%) белый порошок. Т.пл. = 186-188^oC.

C₃₇H₅₈O₇ (614,9), R_f = 0,48 (CH₂Cl₂ : MeOH = 10:1).

Найдено, %: C 72,3; H 9,4.

Вычислено, %: C 72,3; H 9,5.

[α]20D

УФ-спектр (MeOH), λ_max/нм: 247,0 (lg ε 4,32).

ИК-спектр (ν, см^-1, вазелиновое масло): 1650 (C₁₁ = O), 1730-1720 (COOMe), 3600-3200 (OH).

Спектр ЯМР ¹³C (CDCl₃,δ, м.д.): 20,8 (C2), 88,6 (C3), 200,4 (C11), 128,6 (C12), 169,3 (C13), 174,0 (C30), 51,9 (C31), 100,2 (C1'), 39,3 (C2'), 69,5 (C3'), 78,5 (C4'), 67,7 (C5'), 17,5 (C6').

Пример 3. Изучение противоязвенной активности.

ПЯ активность соединений (1) и (2) изучали на крысах на двух моделях экспериментальных деструкций слизистой оболочки желудка крыс, вызванных индометацином и аспирином. Язвенные деструкции желудка у половозрелых крыс массой 200-250 г вызывались введением индометацина и аспирина (внутрибрюшинно 20 мг/кг). Изучаемые соединения вводили животным за 1 ч до воспроизведения язв желудка в дозе 100 мг/кг. Через сутки после воспроизведения деструкций животных забивали под эфирным наркозом, извлекали желудки и визуально учитывали все поражения слизистой оболочки. В качестве референс-препаратов использовали глицирризиновую кислоту (3) и карбеноксолон (4) в равных дозах 100 мг/кг. Результаты опытов приведены в табл. 1 и 2. Как видно из таблиц, соединения (1) и (2) снимают степень изъязвления слизистой оболочки желудка (p < 0,001) по сравнению с контролем.

Пример 4. Изучение влияния соединений (1) и (2) на репаративную регенерацию кожи.

Влияние соединений (1) и (2) на РРК изучали на крысах на трех моделях кожных травм. В качестве препаратов сравнения использовали глицирризиновую кислоту (3) и метилурацил. Послойные лоскутные раны воспроизводили на боковой поверхности тела крыс после удаления шерстяного покрова. На следующий день определяли среднюю площадь ран, делили животных на группы и начинали лечение 5%-ными мазями препаратов на вазелине (ежедневная обработка). Результаты опытов приведены в табл. 3 и 4. На 7-й день лечения во всех группах животных, которых лечили соединениями (1) и (2), средняя площадь ран уменьшалась статистически значимо, причем при использовании мазей соединений (1) и (2) регенерация кожи проходила активнее, чем при лечении метилурацилом. На 15-й день лечения в группах, которых лечили соединениями (1) и (2), заживление кожных ран было более выражено, чем в группах, леченных ГК и метилурацилом.

В следующей серии опытов использовали модель химического ожога, который вызывали на боковой поверхности крыс 1-2 каплями концентрированной соляной кислоты. Через сутки определяли исходную площадь после ожога и начинали лечение 5%-ной мазью соединения (1) на вазелине. Результаты опытов приведены в табл. 5. На 7-й день лечения в группе животных, которых лечили соединением (1), заживление ран было более выражено, чем в группах, леченных ГК и метилурацилом. На 15-й день после воспроизведения ожога в группе животных, леченных соединением (1), регенерация кожи была значительнее, чем в группах сравнения.

В другой серии опытов на боковой поверхности тела крыс воспроизводили термический ожог и изучали влияние соединения (2) на регенерацию кожи. На 7-й день лечения эффект соединения (2) был аналогичен препаратам сравнения (ГК и метилурацил). На 15-й день лечения в группе животных, которых лечили соединением (2), заживление ран проходило более эффективно, чем в группах сравнения (табл. 6).

Выводы:
- таким образом, противоязвенное действие соединений (1) и (2) превосходит эффект глицирризиновой кислоты и карбеноксолона на модели индометациновых и аспириновых язв;
- соединения (1) и (2) в виде 5%-ных мазей являются эффективными стимуляторами репаративной регенерации кожных ран и превосходят по активности препараты сравнения - ГК и метилурацил.

Изобретение относится к органической химии, к новым химическим соединениям, а именно к 3-O-2-дезокси-α-D-галакто- и α-L-рамнопиранозидам метилового эфира глицирретовой кислоты общей формулы

проявляющим противоязвенную активность и стимулирующим репаративную регенерацию кожи. Предлагаемые соединения являются малотоксичными веществами, обладающими высокой противоязвенной активностью, превосходящей эффект карбеноксолона и глицирризиновой кислоты, в сочетании с выраженным стимулирующим действием на репаративную регенерацию кожи. 6 табл.

3-O-2-Дезокси-α-D-галакто- или α-L-рамнопиранозид метилового эфира глицирретовой кислоты общей формулы


где R = R₁ = R₂,

проявляющий противоязвенную активность и стимулирующий репаративную регенерацию кожи.