ГЛИКОПЕПТИД β-ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С ДИБУТИЛОВЫМ ЭФИРОМ L-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНУЮ И ПРОТИВОЯЗВЕННУЮ АКТИВНОСТЬ Российский патент 1994 года по МПК C07J63/00 A61K31/705 

Изобретение относится к новому химическому соединению, конкретно к гликопептиду β -глицирризиновой кислоты с дибутиловым эфиром L-глутаминовой кислоты: 3-0-[2-0[(N- β -D-глюкопиранозилураноил-L-глутаминовой кислоты дибутиловый эфир)-N- β -D-глюкопиранозилураноил-L-глутаминовой кислоты бидутиловый эфир-(3 β, 20 β)-11,30-диоксо-30-(N-D-глутаминовой кислоты дибутиловый эфир)-30-норолеан-12-ен общей формулы I,

где R L-Glu(OBu)₂ проявляющему противовоспалительную и противоязвенную активность.

Указанное соединение, его свойства и способ получения в литературе не описаны.

Основным недостатком широко применяемых в медицине антифлогистиков стероидного и нестероидного типа (ортофен-вольтарен, индометицин, преднизолон, бутадион, бруфен и др.) является ульцерогенное действие на желудочно-кишечный тракт. Поэтому поиск новых противовоспалительных средств лишенных этого нежелательного свойства, является актуальным.

β -Глицирризиновая кислота (β -ГК) и ее производные известны как противовоспалительные и противоязвенные вещества (1-5), обладающие низкой токсичностью.

Целью изобретения является поиск нового химического соединения в ряду производных β -глицирризиновой кислоты, обладающего высокой противовоспалительной активностью, сочетающейся с противоязвенным действием. Поставленная цель достигается гликопептидом β -глицирризиновой кислоты формулы (I), проявляющим противовоспалительную и противоязвенную активности.

Фармакологические свойства соединения I были изучены в лаборатории изыскания новых лекарственных средств ИХ БНЦ УрО АН СССР. Острая токсичность соединения I определялась на белых беспородных мышах массой 15-20 г при внутрибрюшинном способе введения и введении в желудок. Параметры токсичности вычислялись по Литчфильду и Уилкоксону ЛД₅₀ = =650(500-845) мг/кг (внутрибрюшинно) и 7000 мг/кг (внутрижелудочно).

Данное соединение относится к 8 классу малоопасных веществ.

Противовоспалительное действие гликопептида I изучали на двух моделях воспаления, вызванных каррагенином и формалином. В качестве препаратов сравнения использовали очищенную β -глицирризинову кислоту (ЛД₅₀ 5000 мг/кг) широко применяемый в медицине высокоактивный антифлогистик - ортофен (ЛД₅₀ ортофена = 380 мг/кг внутрь) и гликопептид глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром L-фенилаланина (гликопептид II) ЛД₅₀ = =135 мг/кг внутрибрюшинно.

Изучаемое соединение вводили в желудок в дозах 100, 50 и 25 мг/кг за 1 ч до воспроизведения воспаления и через 1 и 2 ч после. На модели воспаления, вызванного каррагенином, соединение I в указанных дозах задерживает развитие воспаления аналогично ортофену. Противовоспалительная активность гликопептида превосходит эффект противовоспаления глицирризиновой кислоты во всех изученных дозах (табл. 1). При воспалении, вызванном формалином, предлагаемое соединение оказывает противовоспалительное действие, аналогичное ортофену и самому гликозиду (табл. 2).

В отличие от известных нестероидных противовоспалительных средств соединение I предупреждает развитие деструкций слизистой оболочки желудка. Противоязвенное действие гликопептида (I) изучено на модели экспериментальных язв желудка у крыс, вызванных аспирином, в сравнении с противоязвенным эффектом известного противоязвенного средства - карбеноксолона - динатриевой соли кислого сукцината β -глицирретовой кислоты [6]. Соединение I вводили в желудок за 1 ч до введения ульцерогенного агента в дозе 100 мг/кг.

На модели аспириновых язв гликопептид (I) статистически значимо снижает степень поражения слизистой оболочки желудка (р ≅ 0,001) по сравнению с контролем в 2,5 раза. Противоязвенное действие соединения аналогично карбоноксолону и глицирризиновой кислоте при введении в равных дозах. В отличие от карбеноксолона (ЛД₅₀ = 101 мг/кг внутрибрюшинно) [6], гликопептид (I) в 6,5 раз менее токсичен. Таким образом, предлагаемое соединение I является малоопасным веществом, обладающим выраженной противовоспалительной активностью, сочетающейся с противоязвенным эффектом, что выгодно отличает его от известных противовоспалительных средство (аспирин, ортофен, индометацин и до.).

Синтез гликопептида (I) проводили методом активированных (N-гидроксисукцинимидных) эфиров без предварительной защиты гидроксильных групп углеводной цепи молекулы гликозида.

При обработке глицирризиновой кислоты N-гидроксисукцинимом (HOSu) в присутствии N, N'-дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК) в среде сухого диоксана был получен трис-оксисукцимидный эфир глицирризиновой кислоты, который без выделения подвергали взаимодействию с гидрохлоридом дибутилового эфира L-глутаминовой кислоты в присутствии избытка триэтиламина (ТЭА). Выход гликопептида (I) 80% . Аналитически чистый продукт получали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюции смесью растворителей хлороформ-метанол = 50 : 1 и 25 : 1 (v/v).

П р и м е р 1. Изучение противовоспалительной активности.

Противовоспалительное действие гликопептида I изучалось на белых беспородных мышах на двух моделях воспаления, вызванных 1%-ным раствором каррагенина и 3%-ным раствором формалина. Флогогены вводились в апоневроз стопы одной из задних лапок в дозе 0,05 мл. Изучаемое соединение I давали животным через зонд внутрижелудочно в дозах 25, 50 и 100 мг/кг за 1 ч до введения флогогена и через 1 и 2 ч после воспроизведения отека. Результаты опытов приведены в табл. 1.

В качестве препаратов сравнения использовали известное противовоспалительное средство - ортофен и глицирризиновую кислоту. Как видно из данных табл. 1, соединение I в исследованных дозах обладает выраженным противовоспалительным действием, аналогичным эффекту ортофена и превосходящим активность глициppизиновой кислоты на модели каррагенинового отека.

П р и м е р 2. Извлечение противоязвенного действия гликопептида (I).

Противоязвенную активность соединения I изучали на модели экспериментальных деструкций слизистой оболочки желудка крыс, вызванных внутрижелудочным введением аспирина (150 мг х 2). О противоязвенной активности препарата судили по уменьшению количества деструкций слизистой оболочки желудка крыс. Накануне воспроизведения деструкций крысы голодали двое суток. Изучаемое соединение вводили животным за 1 ч до воспроизведения язв желудка в дозе 100 мг/кг. Через сутки после воспроизведения деструкций животных забивали под хлороформным наркозом, извлекали желудки и визуально учитывали все поражения слизистой оболочки. В качестве референс-препаратов использовали глицирризиновую кислоту и известный и противоязвенный препарат карбоноксолон (динатриевую соль кислого сукцината глицирретовой кислоты) в равных дозах (100 мг/кг). Результаты экспериментов приведены в табл. 2.

Cоединение I снижает степень поражения слизистой оболочки желудка крыс ≈ в 2,5 раза по сравнению с контролем. Противоязвенное действие препарата аналогично эффекту карбеноксолона и глицирризиновой кислоты при введении в равных дозах.

П р и м е р 3. Получение гликопептида (I).

К раствору 1,6 г (2 ммоль) β -глицирризиновой кислоты (92-95%) в 50 мл сухого диоксана при 0^оС прибавили 42 г (10,4 ммоль) N-гидроксисукцинимида и 1,3 г (6 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодимида и перемешивали при этой температуре 2,5-3 ч, затем при комнатной 6-7 ч и оставили смесь на ночь при 4-8^оС. Отфильтровали выпавший осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату, охлажденному в бане со льдом, прибавили 2,0 г L-Glu(OBu)₂ ˙HCl (6,8 ммоль) и по каплям 1,0 мл (9,8 ммоль) сухого ТЭА и 5 мл сухого диметилформамида выдержали при комнатной температуре с периодическим перемешиванием 24 ч. Растворитель удалили в вакууме, остаток растворили в хлористом метилене (200 мл), промыли последовательно 5%-ным раствором HCl, водой, 5%-ным раствором NaHCO₃, водой и сушили над MgSO₄. Упариванием растворителя в вакууме получили 2,48 г (80%) гликопептида (I), который чистили на колонке из силикагеля L (100/240 μ, ЧССР), элюируя смесью хлороформа - метанола 100 :1, 50 : 1, 25 : 1, 10 : 1 (v/v). Смесью 50 : 1 и 25 : 1 вымывали 1,59 г (64%) аналитически чистого продукта (I) в виде аморфного вещества желтоватого цвета. R_f = 0,5 (хлороформ-метанол-вода = 45 : 10 : 1) (силуфол). [ α]_D²⁰ = +30^o (с = 0,02; метанол).

ИК, ν см^-1: 1740 (СООBu); 1690 (CONH, амид I); 1650 (C₁₁ = 0); 1530 (CO H, амин II).

УФ, λ_max^MeOH (lg ε): 249 нм (4,09).

Найдено, %: C 60,19; H 8,24; N 2,73.

C₈₁H₁₃₁N₃O₂₅.

Вычислено, %: C 60,30; H 8,53; N 2,72.

Растворим в ацетоне, метаноле, тетрагидрофуране, диоксане, спирте, диметилформамиде.

Таким образом, гликопептид (I) является матолоксичным веществом, обладающим выраженной противовоспалительной активностью, сочетающейся с противоязвенным эффектом, что выгодно отличает данное соединение от известных противовоспалительных средств, применяемых в медицине (индометацин, ортофен, аспирин, преднизолон и др.). Соединение I менее токсично, чем препараты сравнения.

Использование: в качестве противовоспалительного и противоязвенного средства. Сущность: продукт - 3-0[2-0-(N- b -D-глюкопиранозилураноил-L-глутаминовой кислоты дибутиловый эфир)-N- b -D-глюкопиранозилураноил-L-глутаминовой кислоты дибутиловый эфир-(3 b , 20 b) -11,30-диоксо-30-(N-L-глутаминовой кислоты дибутиловый эфир)-30-норолеан-12-ен. Выход 80%, [α]2D

Гликопептид β - глицирризиновой кислоты с дибутиловым эфиром L-глутаминовой кислоты формулы

где R - L - glu (OBu)₂,
проявляющий противовоспалительную и противоязвенную активность.