Изобретение относится к новому биологически активному соединению, конкретно, к амиду β -глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом: 3-0-[2-0-(β -D-гликопиранозилураноил)- β -D-глюкопиранозилураноил] -(3 β, 20 β)-11,30-диоксо-30-(11-6-аминоурацил)-30-норолеан-12-ен формулы (I)
проявляющему анти-СПИД активность.
Указанное соединение и его свойства в литературе не описаны.
В настоящее время во всем мире интенсивно ведутся исследования по поиску средств лечения СПИДа. Известно уже более 50 препаратов, подавляющих репродукцию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) in vitro [1]. В 1987-88 гг работами группы японских исследователей было показано, что глицирризиновая кислота (ГК) - активное начало экстракта солодки, эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ в культуре клеток [2, 3].
Основным недостатком ГК является ее малоэффективность как ингибитора репродукции ВИЧ на хронически инфицированных клетках.
Целью изобретения является поиск новых соединений в ряду производных β -глицирризиновой кислоты (β -ГК), обладающих анти-СПИД активностью.
Поставленная цель достигается амидом β-ГК формулы (I), проявляющим анти-СПИД активность.
Фармакологические свойства описываемого соединения.
Противовирусная активность соединения I была изучена на модели первично инфицированных ВИЧ-1 лимфоидных клеток МТ-4. Раствор препарата в диметилсульфоксиде (ДМСО) (20 мг/мл - 50 мг/мл) вносили в суспензию инфицированных ВИЧ-1 клеток до конечной концентрации препарата 500-1000 мкг/мл, ДМСО до конечной концентрации 0,5-2,0%. В предварительных экспериментах было установлено, что ДМСО в концентрациях 0,5-2,0% не блокирует репродукцию ВИЧ-1. Об ингибировании репродукции ВИЧ-1 в клетках судили по снижению активности обратной транскриптазы и снижению накопления вирусного антигена (методом иммуноферментного анализа) в культуральной жидкости на 4-е сутки культивирования по сравнению с контролем (без добавления препарата).
Для сравнения использовали один из наиболее эффективных для лечения СПИДа препаратов - азидотимидин (АЗТ), механизм действия которого связан с блокированием вирусной обратной транскриптазы и терминированием синтеза вирусной ДНК [4], и β - глицирризиновую кислоту ( β -ГК) (92-95% чистоты), эффективно ингибирующую репродукцию ВИЧ-1 в клетках in vitro.
Основным недостатком АЗТ является его высокая токсичность [5].
Установлено, что исследованное соединение (I) эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4 в концентрациях от 0,5 мг/мл до 1,0 мг/мл (на 98,2-99,3%). По уровню выявленной противовирусной активности производное β -глицирризиновой кислоты (I) не уступает АЗТ и сравнимо с β -глицирризиновой кислотой.
В отличие от АЗТ амид (I) не оказывает на культуру клеток токсического действия. Более того, количество живых клеток значительно выше, чем в контроле инфицированных клеток без добавления препаратов (табл. 1) и ≈ в 10 раз больше, чем в случае клеток, обработанных АЗТ и β -ГК.
Соединение (I) менее токсично, чем АЗТ по ЛД50. Так ЛД50 амида (I) > 7000 мг/кг.
На основании Постановления Госкомитета стандартов СМ СССР от 10 марта 1976 г. N 579 данное соединение относится к III классу малоопасных веществ.
Синтез амида (I) проводили путем обработки β -глицирризиновой кислоты и 6-аминоурацила в смеси ДМФА - пиридина N,N'-дициклогексилкарбодиимидом. Продукт кристаллизовали из смеси ДМФА - диоксана - воды. Выход 69,9%.
Таким образом, предложено новое малоопасное производное β -глицирризиновой кислоты - амид с 6-аминоурацилом (I), эффективно ингибирующий репродукцию ВИЧ-1 in vitro (в культуре клеток МТ-4), менее токсичный, чем азидотимидин.
Сущность изобретения демонстрируется следующими примерами:
П р и м е р 1. Изучение анти-СПИД активности.
Противовирусная активность представленного соединения (I) изучалась на модели первично инфицированных ВИЧ-1 лимфоидных клеток МТ-4. Раствор препарата в ДМСО (20 мг/кг - 50 мг/мл) вносили в суспензию инфицированных ВИЧ-1 клеток до конечной концентрации 0,5-2,0%. В предварительных экспериментах было установлено, что ДМСО в концентрациях 0,5-2,0% не блокирует репродукцию ВИЧ-1.
Об ингибировании репродукции ВИЧ-1 в клетках судили по снижению активности обратной транскриптазы и снижению накопления вирусного антигена (методом иммуноферментного анализа) в культуральной жидкости на 4-е сутки культивирования по сравнению с контролем (без добавления препарата). В качестве препаратов сравнения использовали один из наиболее эффективных для лечения СПИДа препаратов - азидотимидин (АЗТ), механизм действия которого связан с блокированием вирусной обратной транскриптазы и терминированием синтеза вирусной ДНК, и β -глицирризиновую кислоту (β -ГК), эффективно ингибирующую репродукцию ВИЧ-1 в клетках.
В таблице приведены результаты проведенных экспериментов. Установлено, что исследованное соединение эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток в концентрациях от 0,5 мг/мл до 1,0 мг/мл. По уровню выявленной противовирусной активности соединение (I) не уступает АЗТ и сравнимо с β -ГК. В отличие от АЗТ производное ГК (I) не оказывает на культуру клеток токсического воздействия: количество живых клеток значительно выше, чем в контроле инфицированных клеток без добавления препарата и на порядок выше, чем в случае АЗТ и β -ГК.
Таким образом, установлена способность производного β -глицирризиновой кислоты - амида с 6-аминоурацилом (I) эффективно ингибировать репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток.
П р и м е р 2. Получение 3-0-[2-0( β -Д-глюкопиранозилураноил)- β -Д-глюкопиранозилураноил] -(3 β, 20 β)-11,30-диоксо- 30- -(N-6-аминоурацил)-30-норолеан-12-ена (I).
К раствору 0,82 г (1 ммоль) глицирризиновой кислоты и 20 мл сухого N, N'-диметилформамида (ДМФА) прибавляют 0,45 г (4 ммоль) 6-аминоурацила, 5 мл сухого пиридина и 0,7 г (3,4 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК) и перемешивают при 50-60оС 8 ч, оставляют смесь на ночь при комнатной температуре, отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, фильтрат выливают в 200 мл холодной воды, подкисляют лимонной кислотой до рН ≈ 3,4, отфильтровывают осадок, промывают водой, сушат на воздухе, затем при 100-110оС в сушильном шкафу. Выход 0,92 г (98,9%). После кристаллизации из ДМФА-диоксана-воды и сушки в вакууме при 50-60оС (3 ч) получают 0,65 г (69,9%) целевого продукта (Пг) в виде белого порошка, гомогенного по ТСХ. Т. пл. 261-264оС (с разл); [α]D20 = +30o +35o (с 0,01; метанол-диоксан); Rf = 0,51-0,55 (хлороформ:метанол-вода = 45 : 10 : 1).
ИК( ν, см-1) (вазелиновое масло): 3600-3200 (OH); 3328 (NH); 1720, 1700 (COOH); 1656, 1652 (C = 0); 1624, 1576, 1504 (пиридиновое кольцо), 1532 (CONH, Амид П).
УФ, λmaxMeOH-диоксан (lg ε): 248 нм (4,19).
Найдено, %: C 58,49; H 6,86; N 5,05.
C46H65N3O17. Мол. м. 932.
Вычислено, %: С 59,28; Н 7,03; N 4,51.
Использование: в качестве анти-СПИД средства. Сущность изобретения: продукт - амид b -глицирризиновой кислоты с 6-амидоурацилом; 3-0-[2-0-( b -D-гликопиранозилураноил)- b -D-глюкопиранозилураноил] -(3 b , 20 b) -11,30-диоксо-30-(N-6-аминоурацил)-30-норолеан-12-ен. БФ C46H65N3O17 . Выход 98,9% , т.пл. 261 - 264°С. Реагент 1: β -глицирризиновая кислота. Реагент 2: 6-аминоурацил. Условия реакции: в среде сухого ДМФА, в присутствии N,N′-дициклогексилкарбодиимида при 50 - 60°С. 1 табл.
Амид β - глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом общей формулы
проявляющий анти-СПИД-активность.
| Механическая топочная решетка с наклонными частью подвижными, частью неподвижными колосниковыми элементами | 1917 |
|
SU1988A1 |
