ГЛИКОПЕПТИД β -ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С МЕТИЛОВЫМ ЭФИРОМ L- ФЕНИЛАЛАНИНА, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНУЮ И ПРОТИВОЯЗВЕННУЮ АКТИВНОСТЬ Советский патент 1994 года по МПК C07J63/00 A61K31/705 

Изобретение относится к новым химическим соединениям, а именно к гликопептиду β-глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром L-фенилаланина (1-0-[(3β, 20β )-11,30-диоксо-30-(N-L-фенилаланина метиловый эфир) олеан-12-ен-3-ил]-2-0- [β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-фенилаланина метиловый эфир)глюкопиранозил] -α-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-фенилаланина метиловый эфир)глюкопиранозид) общей формулы I
где R=L-Phe (OMe), R₁=H; R= L-Phe (OMe); R₁=Ac,
проявляющий противовоспалительную и противоязвенную активность.

Указанное соединение, его свойства и способ получения в литературе не описаны.

β-Глицирризиновая кислота и ее производные обладают высокой противовоспалительной и противоязвенной активностью [1-5].

Поэтому в качестве структурного аналога при изучении биологических свойств выбрали β-глицирризиновую кислоту (ГК) и гликопептид пентаацетилглицирризиновой кислоты с метиловым эфиром L-фенилаланина (II). Как известно, широко применяемые в медицинской практике противовоспалительные средства - ортофен, бутадион, индометацин, аспирин и другие, обладают рядом побочных эффектов: вызывают раздражение или изъязвление желудочно-кишечного тракта, часто высоко токсичны и обладают иммуносупрессивным действием [6].

Целью изобретения является поиск нового химического соединения в ряду производных глицирризиновой кислоты, обладающего высокой противовоспалительной активностью, сочетающейся с противоязвенным эффектом, и имеющего преимущества в фармакологическом отношении.

Поставленная цель достигается гликопептидом β-глицирризиновой кислоты указанной формулы, проявляющим противовоспалительную и противоязвенную активности.

Острую токсичность гликопептида I определяли на белых беспородных мышах массой 15-20 г при условии однократного введения в желудок. Параметры токсичности вычисляли по Литчфильду и Уилкоксону. LD₅₀гликопептида I составила 135 мг/кг (100-180 мг/кг) внутрибрюшинно и ≈ 4000 мг/кг внутрижелудочно.

Противовоспалительное действие соединения I исследовали на двух моделях воспаления, вызванных каррагенином и формалином. В качестве препаратов сравнения использовали β-глицирризиновую кислоту, ее гликопептид II и широко применяемый в медицине высокоактивный антифлогистик - ортофен.

Соединение I в дозах 25, 50 и 100 мг/кг вводили в желудок за 1 ч до воспроизведения и через 1 и 2 ч после воспроизведения отека.

На модели воспаления, вызванного каррагенином, изученное соединение I в указанных дозах оказывает выраженное противовоспалительное действие, превосходящее действие глицирризиновой кислоты, в дозе 100 мг/кг аналогичное действию ортофена.

Противовоспалительное действие гликопептида I более выражено, чем у его защищенного аналога II на данной модели воспаления (см. табл. 2).

На модели воспаления, вызванного формалином, гликопептид I оказывает противовоспалительное действие, аналогичное глицирризиновой кислоте при введении в равных дозах и эффекту ортофена в рабочей дозе (8 мг/кг). Эффект противовоспаления соединения I на данной модели также более выражен, чем у структурного аналога II при введении в равных дозах (см. табл. 3).

Противоязвенное действие соединения I изучали на крысах на модели экспериментальных язв желудка, вызванных индометацином (20 мг/кг внутрибрюшинно). В качестве референс-веществ использовали производное глицирретовой кислоты - агликон глицирризиновой кислоты - карбеноксолон (динатриевая соль кислого сукцината глицирретовой кислоты), применяемой за рубежом в качестве эффективного средства для лечения язв желудочно-кишечного тракта [ 7, 8. 9] . В качестве структурного аналога также применяли глицирризиновую кислоту. Установлено, что соединение I оказывает противоязвенное действие, аналогичное карбеноксолону, и в 2 раза превосходит исходный гликозид по противоязвенному эффекту на данной модели экспериментальных язв.

Таким образом, гликопептид I является малотоксичным веществом, обладающим высокой противовоспалительной активностью и отличающийся от известных противовоспалительных средств выраженным противоязвенным действием, аналогичным карбеноксолону.

В отличие от последнего, соединение I менее токсично: LD₅₀карбеноксолона (втурибрюшинно) 101 мг/кг [10].

П р и м е р 1. Получение гликопептида I.

К раствору 1,64 г (2 ммоль) глицирризиновой кислоты в 50 мл диоксана прибавляют при 0-(+5)^оС 1,2 г (10,4 ммоль) N-гидроксисукцинимида и 1,4 г (6,8 ммоль) ДЦГК и перемешивают смесь при этой температуре 3 ч, 6 ч при комнатной температуре, выдерживают в течение ночи в холодильнике, отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, фильтрат охлаждают льдом и прибавляют к нему 1,5 г (7 ммоль) L-Phe (OMe) ^. HCl и по каплям 1,1 мл (10,8м моль) триэтиламина, перемешивают смесь при охлаждении 1 ч, выдерживают 24 ч при комнатной температуре, отфильтровывают осадок гидрохлорида триэтиламина, фильтрат упаривают в вакууме при температуре 50^оС. Остаток растворяют в перегнанном хлористом метилене (200 мл), промывают 5%-ным раствором соляной кислоты, водой, 5% -ным раствором NaHCO₃, снова водой и сушат над MgSO₄. После упаривания растворителя в вакууме получают 1,5 г (61%) гликопептида I, гомогенного по данным ТСХ.

Для получения аналитически чистого образца продукт хроматографируют на колонке с силикагелем, элюируя смесью хлороформ - спирт = 25:1 _→ 1:1. Смесью 10: 1_→5: 1 вымывают 1,0 г аморфного продукта (I), [α]²⁰_D=+30^о (С= 0,18, МеОН), R_f=0,67 (хлороформ-спирт=5:1).

ИК, ν (вазелиновое масло), см^-1: 3600-3200 (ОН, NH), 1740 (СООМе), 1655 (С₁₁=0), 1530 (СОNH, амид II), 1210 (СОNH, амид III), 750, 720, 700 (Ph).

УФ, νМеОНмакс

Найдено, %: С 65,79; Н 7,56; N 3,45.

С₇₂Н₉₅N₃O₁₉
Вычислено, %: С 66,17; Н 7,34; N 3,22.

П р и м е р 2. Изучение противовоспалительной активности.

Противовоспалительное действие гликопептида I изучают на белых беспородных мышах на двух моделях воспаления, вызванных 1%-ным раствором каррагенина и 3% -ным раствором формалина. Флогогены вводят в апоневроз стопы одной из задних лапок в дозе 0,05 мл. Изуачемое соединение вводят животным в дозах 25, 50 и 100 мг/кг за 1 ч до воспроизведения воспаления и через 1 и 2 ч после воспроизведения воспаления. Противовоспалительное действие соединения I сравнивают с активностью глицирризиновой кислоты (100 мг/кг) и ортофена (8 мг/кг). Результаты опытов представлены в табл. 1.

На модели воспаления, вызванного каррагенином, указанное соединение оказывает выраженное противовоспалительное (ПВ) действие, аналогичное действию ортофена в дозах 25 и 50 мг/кг и превосходящее эффект ГК в указанных дозах (см. табл. 1). Противовоспалительное действие гликопептида I также более выражено, чем у структурного аналога II на обеих моделях воспаления (см. табл. 2 и 3) при введении в равных дозах.

В дозе 10 мг/кг ПВ активность гликопептида I аналогична эффекту ГК. На модели формалинового воспаления гликопептид I проявил ПВ активность, аналогичную ГК в равной дозе и эффекту ортофена в рабочей дозе.

П р и м е р 3. Изучение противоязвенной активности гликопептида I.

Противоязвенное (ПЯ) действие гликопептида I изучали на крысах на двух моделях экспериментальных язв желудка, вызванных индометацином, в сравнении с ПЯ-эффектом известного противоязвенного средства - карбеноксолона и самой глицирризиновой кислоты.

Индометациновые язвы вызывали подкожным введением индометацина в дозе 20 мг/кг. Изучаемое соединение I вводили животным внутрь в дозе 100 мг/кг за 1 ч до воспроизведения деструкции желудка. Поражения слизистой оболочки оценивали визуально через сутки после введения ульцерогенного агента. Результаты опытов представлены в табл. 4.

Как видно из данных табл. 4, изучаемое соединение I статистически значимо снижает степень поражения слизистой оболочки желудка. ПЯ-действие гликопептида I на данной модели экспериментальных язв желудка аналогично ПЯ-эффекту карбеноксолона и в 2 раза превосходит действие ГК при введении в равных дозах.

Гликопептид b -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром L-фенилаланина, проявляющий противовоспалительную и противоязвенную активность. Продукт: 1-0-[( 3β, 20β)-11,30-диоксо-30-(N-L-фенилаланина метиловый эфир)-олеан-12-ен-3-ил] 2-0-[ b -D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-фенилаланина метиловый эфир)глюкопиранозил] - a -D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-фенилаланина метиловый эфир)глюкопиранозид. БФ C₁₂H₉₅N₃O₁₉ , выход 61%, [α]2D

Гликопептид β -глицирризиновой кислоты с метиловым эфиром L-фенилаланина формулы

где R = L - Phe (OMe), R₁ = H;
R = L - Phe (OMe), R₁ = Ac,
проявляющий противовоспалительную и противоязвенную активность.