ШТАММ БАКТЕРИЙ YERSINIA PESTIS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ УТОЧНЕНИЯ СТРОЕНИЯ И ФУНКЦИИ ПЛАЗМИДЫ СИНТЕЗА ФРАКЦИИ I И ТОКСИГЕННОСТИ ЧУМНОГО МИКРОБА Российский патент 1995 года по МПК C12N1/20 C12N15/00 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к генетике чумного микроба, а именно к его внехромосомным факторам наследственности.

Аналогов и прототипов, касающихся природных моноплазмид по плазмиде pFra/Tox штаммов чумного микроба, в литературе не имеется.

Цель изобретения найти природный штамм возбудителя чумы, содержащий лишь одну плазмиду, ответственную за синтез фракции I и токсинообразование (pFra/Tox).

В процессе изучения плазмидного профиля штаммов чумного микроба, хранящихся в музее живых культур Среднеазиатского научно-исследовательского противочумного института (САНИПЧИ), обнаружен штамм А-1108, содержащий только одну плазмиду pFra/Tox.

Штамм А-1108 выделен в 1958 году при плановом обследовании Сарыджазского мезоочага (Тянь-Шань) на чуму. Получен непосредственный посев кусочков печени от серого сурка (при вскрытии видимых патологоанатомических изменений не обнаружено), отловленного на Кокжарском участке упомянутого мезоочага.

Штамм А-1108 имеет не совсем типичные для возбудителя чумы культурально-морфологические и другие свойства, а именно: он растет в сглаженной 0 и OR-форме на обычных питательных средах (бульон и агар Хоттингера, среда мартена, обычный питательный агар, среда Эндо, дрожжевая среда, гидролизаты казеина и желатина). Оптимальная температура роста 27-28^оС, минимальная (еле заметный рост на 3-е сут) 2^оС, максимальная 40^оС. Диаметр колоний при изолированном росте на среде Хоттингера на 2-3 сут 2-3 мм, на пятые 4-3 мм (при 28^оС выращивания). В мазках грамотрицательные, биполярные палочки. Высокочувствителен к диагностическому чумному и псевдотуберкулезному фагам и фагу Л-413.

Штамм ферментирует с образованием кислоты без газа рамнозу, глюкозу, мальтозу, маннит, арабинозу, маннозу, ксилозу; не ферментирует лактозу, сахарозу, дульцит, эритрит, мелиобиозу, целлобинозу. Дает положительную реакцию денирификации и отрицательную реакцию нитрификации. Имеет β-галактозидазу; реакция Фогес-Проскауэра положительная; не имеет фермента уреазы, оксидазы, редуктазы, амилазы, декарбоксилазы лизина и дегидролазы аргинина; желатин не разжижает; не расщепляет малоната и тартрата натрия.

На среде Джексона-Бэрроуза растет в виде популяций, состоящих из 100% непигментированных (pgm^-) колоний. Кальцийнезависимый.

Не имеет плазмид pPst и pCad. Наличие у него одной плазмиды pFra/Tox является его генетической особенностью.

Растет при 28^оС на среде следующего химического состава, глюкоза 3, двузамещенный фосфорнокислый калий 7, однозамещенный фосфорнокислый калий 2, цитрат натрия 0,5, сернокислая магнезия 0,10 сульфит натрия 0,5, цистеин 0,05, фенилаланин 0,05, метионин 0,05, треонин 0,05, лейцин 0,05 (аминокислоты в ДЛ и Л-форме), дистиллированная вода 1 л (в случае приготовления плотных питательных сред добавляется 30 г агар-агара).

Штамм А-1108 авирулентный для морских свинок и белых мышей при подкожном методе их заражения.

П р и м е р. Экспериментальную проверку наличия плазмидного состава у штамма А-1108 проводила в агаровом геле по методу Кадо и Лью (1981). Контрольными штаммами служили три штамма чумного микроба (EV, 671, 1435), имеющие три типичные для возбудителя чумы плазмиды (pPst, pCad, pFra/Tox).

У штамма А-1108 обнаружена лишь одна плазмида pFra/Tox.

Штамм А-1108 может быть использован в качестве тест-объекта для определения строения и функции плазмиды pFra/Tox, а также может служить тест-объектом, доказывающим стабильность и независимость лейцинзависимости от длительности хранения и морфологии роста возбудителя чумы.

Использование: микробиология. Сущность изобретения: природный авирулентный штамм чумного микроба YerSinia pestis А = 1108 КМ = 937 используется как тест-объект для определения строения и уточнения функции плазмиды pFra/tox, а также для решения некоторых вопросов генетики возбудителя чумы. Особенность штамма - не имеет плазмид pPst и pCad. Наличие у него одной плазмиды pFra/Tox является его генетической особенностью. Высокочувствителен к стрептомицину, рамфапицину, гентамицину, пенициллину, мономицину, тетрациклину, хлорамфениколу и хлортетрациклину. Авирулентен для морских свинок и белых мышей при подкожном методе их заражения.

Штамм бактерий Jеrsinia pestis А-1108 (КМ-937), используемый для уточнения строения и функции плазмиды синтеза фракции I и токсигенности чумного микроба.