ШТАММ БАКТЕРИЙ YERSINIA PESTIS, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТРОЕНИЯ И ФУНКЦИИ НОВОЙ ДОПОЛНИТЕЛЬНОЙ ПЛАЗМИДЫ МОЛ.М. 19 МД У ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ ИЗ ТАЛАССКОГО ОЧАГА Российский патент 1995 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к генетике чумного микроба, а именно к его внехромосомным факторам наследственности.

Аналогов и прототипов изобретения, касающихся данной плазмиды чумного микроба, в литературе не имеется.

Целью изобретения является нахождение штамма возбудителя чумы с дополнительной плазмидой молекулярной массой 19 МД.

В процессе изучения плазмидного профиля у штаммов чумного микроба, выделенных в 1980 в Таласском очаге, обнаружена группа штаммов с дополнительной плазмидой молекулярной массой 19 МД. Представителем данной группы и является предлагаемый в качестве изобретения выделенный от блох серебристой полевки Ceratophyllus caspius штамма А-1817.

Этот штамм имеет типичные для возбудителя чумы культурально-морфологические и другие свойства. Он растет в R-форме на обычных питательных средах (бульон и агар Хоттингера, среда Мартена, обычный питательный агар, среда Эндо, дрожжевая среда, гидролизаты казеина и желатина). Оптимальная температура роста 27-28^оС, минимальная (еле заметный рост на 3-е сутки) +2^оС, максимальная +40^оС. Диаметр колоний при изолированном росте на среде Хоттингера на 2-3 сутки 2-3 мм, на пятые 4-8 мм (при 28^оС выращивания). В мазках грамотрицательные, биполярные палочки. Высокочувствителен к диагностическому чумному и псевдотуберкулезному фагам и фагу Л-413. Штамм ферментируется с образованием кислоты без газа рамнозу, глюкозу, мальтозу, маннит, арабинозу, маннозу, ксилозу; не ферментирует лактозу, сахарозу, дульцит, эритрит, мелибиозу, целлобинозу. Дает отрицательные реакции денитрификации и нитрификации. Имеет отрицательные реакции денитрификации и нитрификации. Имеет β-галактозидазу; реакций Фоген-Проскауэра положительная, не имеет фермента уреазы, оксидазы, редуктазы, амилазы, декарбоксилазы лизина и дегидролазы аргинина. Желатин не разжижает; не расщепляет малоната и тартрата натрия.

На среде Джексона-Бэрроуза растет в виде популяций, состоящих из 100% пигментированных (pgm⁺) колоний. Кальцийзависимый (Ca^-).

Имеет типичные для возбудителя чумы три плазмиды (pCad(pVir) pst, pFra/Tox) и дополнительную плазмиду молекулярной массой 19 МД, что является его генетической особенностью.

Растет при 28^оС на среде следующего химического состава, г: глюкоза 3, двузамещенный фосфорнокислый калий 7, однозамещенный фосфорнокислый калий 2, цитрат натрия 0,5, сернокислая магнезия 0,1; сульфит натрия 0,5, цистеин 0,05, фенилаланин 0,05, метионин 0,05, треонин 0,05, лейцин 0,05, аргинин 0,05 (аминокислоты в ДЛ- и Л-форме), дистиллированная вода 1 л (в случае приготовления плотных питательных сред добавляется 30 г агар-агара).

Штамм А-1817 проявляет высокую вирулентность для морских свинок (DCL 1000) и белых мышей (DCL 100) микробных клеток при подкожном методе заражения. Кальцийнезависимые клетки непатогенны для этих животных.

Экспериментальную проверку наличия дополнительной плазмиды у штамма А-1817 проводили в агаровом геле по методу Кадо и Лью (1981). Одновременно с целью определения величины данной дополнительной плазмиды параллельно в агарозном геле брали соответствующие штаммы (контрольные) кишечной палочки, имеющие плазмиды известного молекулярного веса (E.coli C 600/pCR1 17,5 МД; E. coli ДНI/pRK 290 13 МД; E.coli E 53/p S-a 23 МД), а также штамма чумного микроба EV, имеющий три типичные для возбудителя чумы плазмиды (pPst, pCad(pVir), pFra/Tox).

Штамм А-1817 может быть использован в качестве тест-объекта для определения строения и функции новой дополнительной плазмиды молекулярным весом 19 МД у возбудителя чумы из Таласского очага. Обнаружение подобных плазмиду природных штаммов чумного микроба может быть применено также для дифференциальной диагностики штаммов из различных природных очагов.

Использование: микробиология, штамм бактерий, плазмида, чума. Сущность изобретения: новый штамм чумного микроба jersinia pestis А-1817 (КМ - 940) содержит дополнительную плазмиду мол.м. 19 МД. Штамм может быть использован в качестве тест-объекта для определения строения и функции новой дополнительной плазмиды мол.м. 19 МД у возбудителя чумы из Талласского очага.

Штамм бактерий Yersinia pestis А-1817 (КМ-940), предназначенный для определения строения и функции новой дополнительной плазмиды мол. м. 19 МД у возбудителя чумы из Таласского очага.