ШТАММ БАКТЕРИЙ YERSINIA PESTIS ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ КАК ТЕСТ - ОБЪЕКТ ДЛЯ УТОЧНЕНИЯ СТРУКТУРЫ И ФУНКЦИИ ПЛАЗМИДЫ КАЛЬЦИЙЗАВИСИМОСТИ У ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ Российский патент 1995 года по МПК C12N1/20 C12N15/00 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к генетике чумного микроба, а именно к его внехромосомным факторам наследственности.

Аналогов и прототипов изобретения, касающихся природных моноплазмид по кальцийзависимости (рСаd) штаммов чумного микроба, в литературе не имеется.

Цель изобретения найти природный штамм возбудителя чумы, содержащий лишь одну плазмиду кальцийзависимости (рСаd).

В процессе изучения плазмидного профиля 730 штаммов чумного микроба, хранящихся в музее живых культур Среднеазиатского научно-исследовательского противочумного института (САНИПЧИ), обнаружен штамм А-1450, содержащий только одну плазмиду кальцийзависимости (рСаd).

Штамм А-1450 выделен 24.08.1966 г. из крови больной Климановой Кумысай. До начала лечения 19.VIII произведен посев из крови на агаровые пластинки среды и бульон Хоттингера, а также произведено заражение подкожным методом двух белых мышей. Прямой посев в бульон и на агар дал отрицательный результат на чуму. Зараженные кровью белые мыши пали на 4-е и 6-е сутки с последующим выделением от них культуры чумного микроба.

Штамм А-1450 имеет типичные для возбудителя чумы культурально-морфологические и другие свойства. Он растет в R-форме на обычных питательных средах (бульон и агар Хоттингера, среда Мартена, обычный питательный агар, среда Эндо, дрожжевая среда, гидролизаты казеина и желатина). Оптимальная температура роста 27-28^оС, минимальная (еле заметный рост на 3-е сут) 2^оС, максимальная 40^оС. Диаметр колоний при изолированном росте на среде Хоттингера на 2-3 сут 2-3 мм, на пятые 4-8 мм (при 28^оС выращивания). В мазках-грамотрицательные, биполярные палочки. Высокочувствителен к диагностическому чумному и псевдотуберкулезному фагам и фагу Л-413.

Штамм ферментирует с образованием кислоты без газа рамнозу, глюкозу, мальтозу, маннит, арабинозу, маннозу, ксилозу; не ферментирует лактозу, сахарозу, дульцит, эритрит, мелибиозу, целлобинозу. Дает отрицательные реакции денитрификации и нитрификации. Имеет β-галактозидазу; реакция Фогес-Проскауэра положительная; не имеет фермента уреазы, оксидазы, редуктазы, амилазы, декарбоксилазы лизина и дегидролазы аргинина, желатин не разжижает; не расщепляет малоната и тартрата натрия.

На среде Джексона-Бэрроуза растет в виде популяций, состоящих из 100% непигментированных (pgm^- ) колоний. Кальцийзависимый (Са^- ).

Не имеет плазмид pPst и pFra/tox. Наличие у него одной плазмиды pCad является его генетической особенностью.

Растет при 28^оС на среде следующего химического состава, г: глюкоза 3, двузамещенный фосфорнокислый калий 7, однозамещенный фосфорнокислый калий 2, цитрат натрия 0,5, сернокислая магнезия 0,1, сульфит натрия 0,5, цистеин 0,05, фенилаланин 0,05, метионин 0,05, треонин 0,05 (аминокислоты в ДЛ и Л-форме), дистиллированная вода 1 л (в случае приготовления плотных питательных сред добавляется 30 г агар-агара).

Штамм А-1450 вирулентный для морских свинок и белых мышей при подкожном методе их заражения.

П р и м е р. Экспериментальную проверку наличия плазмидного состава у штамма А-1450 проводили в агаровом геле по методу Кадо и Лью (1981). Контрольными штаммами служили три штамма чумного микроба (EV, 671, 1435), имеющие три типичные для возбудителя чумы плазмиды (pPst, pCad, pFra/Tox).

Штамм А-1450 может быть использован в качестве тест-объекта для уточнения строения и функции плазмиды кальцийзависимости у возбудителя чумы.

Использование: микробиология. Сущность изобретения: моноплазмидный авирулентный штамм чумного микроба У. pestis А = 1450 КМ = 938 предназначен для уточнения строения и функции плазмиды кальцийзависимости ( pCad ) у возбудителя чумы. Особенность штамма - кальцийзависимый. Не продуцирует фракции 1. На среде Джексона-Бэрроуза растет в виде популяций, состоящих из 100% непигментированных pgm^- колоний. Высокочувствителен к стрептомицину, рамфипицину, гентамицину, пенициллину, мономицину, тетрациклину, хлорамфениколу, хлортетрациклину. Авирулентен для морских свинок и белых мышей при подкожном методе их заражения.

Штамм бактерий Jersinia pestis А-1450 КМ-938, используемый как тест-объект для уточнения структуры и функции плазмиды кальцийзависимости у возбудителя чумы.