СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВИРОВАННОГО ФАКТОРА VII В ПЛАЗМЕ КРОВИ Российский патент 1995 года по МПК G01N33/49 G01N33/86 

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и может быть использовано для экспресс-диагностики коагуляционных нарушений, способствующих развитию тромбозов и инфарктов.

Известен способ определения активированного фактора VII в плазме крови путем суточной экспозиции при 4^оС исследуемых образцов плазмы.

Недостатком этого способа является невозможность его использования для экспресс-диагностики гиперкоагуляционных состояний.

Прототипом является способ, в котором используют различную чувствительность фактора VII к бычьему и человеческому тромбопластину, а тестирование проводится на дефицитной по фактору VII плазме.

Недостатками способа является его трудоемкость, необходимость использования дорогостоящего оборудования, специальной биохимической и лабораторной техники.

Цель изобретения упрощение способа определения активированного фактора VII в плазме крови.

Для этого протромбиновое время определяют дважды в пробе плазмы с бычьим тромбопластином до и после фильтрации плазмы через фильтр с диаметром пор от 0,2 до 0,4 мкм, при этом в качестве контроля используют величину протромбинового времени в плазме после его фильтрации.

Способ осуществляют следующим образом.

Силиконированной иглой из вены набирают кровь (1:9) в силиконированную пробирку, содержащую 3,8-й раствор цитрата натрия. Кровь смешивают с цитратом натрия и центрифугируют при 1500 об./мин в течение 5 мин. Полученную таким образом богатую тромбоцитами плазму переносят в другую силиконированную пробирку и повторно центрифугируют при 4000 об./мин в течение 20 мин. Полученную бедную тромбоцитами плазму делят на две равные части, одну из которых пропускают через фильтр, для чего в фильтрующее устройство вносят 1,0 мл бедной тромбоцитами плазмы и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,2 0,4 мкм под давлением 0,9 кг/см². Берут 0,1 мл профильтрованной бедной тромбоцитами плазмы и смешивают в пробирке с 0,1 мл раствора бычьего тромбопластина. После инкубации на водяной бане в течение 30 с при 37^оС в смесь добавляют 0,1 мл раствора хлористого кальция (0,277%) и включают секундомер, определяя время образования сгустка (протромбиновое время с бычьим тромбопластином после фильтрации) Т₁. Аналогичное исследование проводят с 0,1 мл нефильтрованной бедной тромбоцитами плазмы Т₂. В норме протромбиновое время плазмы до и после фильтрации практически не отличается. При наличии активированного фактора VII у больных происходит удлинение протромбинового времени в бедной тромбоцитами фильтрованной плазме по сравнению с протромбиновым временем бедной тромбоцитами нефильтрованной плазмы. Активированный фактор VII (в процентах) рассчитывают по формуле
VIIa · 100.

П р и м е р. Больной М.К. 47 лет. Диагноз: тромбоз глубоких вен правой голени. Силиконированной иглой из вены больного в силиконированную пробирку, содержащую 3,8% -й раствор цитрата натрия (1:9), забрали кровь. Пробирку с кровью центрифугировали при 1500 об./мин в течение 5 мин. Полученную богатую тромбоцитами плазму центрифугировали при 4000 об./мин в течение 20 мин. Полученную бедную тромбоцитами плазму разделили на две равные части, одну из которых пропустили через фильтрующее устройство. Для чего внесли 1,0 мл бедной тромбоцитами плазмы в устройство для фильтрации и профильтровали через фильтр с диаметром пор 0,2 мкм под давлением 0,8 кг/см². В пробирку внесли 0,1 мл профильтрованной плазмы, затем добавили 0,1 мл раствора бычьего тромбопластина, после этого в нее добавили 0,1 мл раствора хлористого кальция и включили секундомер. Определили время образования сгустка (протромбиновое время с бычьим тромбопластином после фильтрации) Т₁. Аналогичное исследование провели с 0,1 мл нефильтрованной бедной тромбоцитами плазмы Т₂.

Т₁ составило 57 с, Т₂ 62 с.

Активированный фактор VII, · 100 8,8%
Предлагаемый способ позволяет определить активированный фактор VII и диагностировать тромбогенный риск и внутрисосудистое свертывание крови. Способ прост в исполнении, пригоден для применения при изучении системы гемостаза в научных исследованиях и лабораториях практического здравоохранения.

Использование: в медицине, а именно в гематологии, для экспресс-диагностики коагуляционных нарушений. Сущность изобретения: инкубируют пробу плазмы, бедную тромбоцитами, с бычьим тромбопластином, определяют протромбиновое время дважды: до и после фильтрации пробы плазмы через фильтр с диаметром пор 0,2 - 0,4 мкм - с последующим сравнением полученного показателя до фильтрации с показателем после фильтрации. Способ позволяет упростить анализ.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВИРОВАННОГО ФАКТОРА VII В ПЛАЗМЕ КРОВИ, включающий инкубацию пробы плазмы, бедной тромбоцитами, с бычьим тромбопластином с последующей регистрацией протромбинового времени и сравнением полученного показателя с контролем, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, протромбиновое время определяют дважды в пробе плазмы с бычьим тромбопластином до и после фильтрации плазмы через фильтр с диаметром пор 0,2-0,4 мкм, при этом в качестве контроля используют величину протромбинового времени в плазме после ее фильтации.