СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЮТЕОЛИНА Российский патент 1995 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к фармации и медицинской промышленности, а именно к способу получения биологически активного природного соединения из растительного сырья.

Известны способы получения лютеолина.

Известен способ, в котором растительное сырье-траву термопсиса экстрагируют метанолом, выделяемые гликозиды, в том числе и лютеолиновые, гидролизуют соляной кислотой, экстрагируют агликоны органическим растворителем, выделяют целевой продукт методом хроматографии на бумаге.

Известен также способ (прототип), в котором воздушно-сухие цветки осота полевого или ястребки волосистой, предварительно обработанные хлороформом, трехкратно экстрагируют при нагревании на водяной бане в течение 3 ч 50%-ным этанолом, спирт удаляют путем упаривания. Затем добавляют ферментный препарат пектоваморин и выдерживают при 37 40^оС в течение 48 ч. После ферментации выпавший осадок, содержащий основное количество флавоноидных агликонов, отделяют. Фильтруют и трехкратно обрабатывают смесью бутанол-хлороформ (1:4), полученные фракции объединяют, упаривают досуха и присоединяют к основному осадку. Осадок растворяют в минимальном количестве 96%-ного этанола и фильтруют. Фильтрат смешивают с порошком силикагеля и хроматографируют на колонке силикагеля. Лютеолин элюируют с колонки смесью хлороформа и этанола с увеличением этанола в смеси с 2,0 до 10,0% Фракции, содержащие лютеолин, объединяют, упаривают и лютеолин перекристаллизовывают из водного этанола. Выход лютеолина из цветков осота полевого 0,24% из цветков ястребки волосистой 0,75% от воздушно-сухого сырья.

Недостатками известного способа являются:
экстрагирование 50% -ным этанолом при нагревании приводит к большим потерям растворителя и не дает полноты извлечения целевого продукта из растительного сырья цветков одуванчика;
использование ферментативного препарата пектоваморина для повышения выхода целевого продукта;
использование в качестве сорбента силикагеля не позволяет полностью отделить примеси, а использование в качестве элюента смеси хлороформа со спиртом не позволяет полностью выделить целевой продукт и тем самым увеличивает его потери.

Целью изобретения является упрощение технологии.

Заявляемая указанная цель достигается тем, что в качестве сырья используют цветки одуванчика обыкновенного, обрабатывают его смесью петролейного эфира с ацетоном (9:1) при соотношении сырья и смеси 1:(2,5 3,5), экстракцию ведут 70% -ным водным ацетоном при соотношении сырья и экстрагента 1:(3,0 4,0), хроматографируют на полиамидном сорбенте 20%-ной уксусной кислотой и очищают, хроматографируя смесью хлороформа с этанолом (8:2). Выход целевого продукта составил 0,40% от массы сырья.

В научно-технической и патентной литературе не описаны способы получения лютеолина из цветков одуванчика обыкновенного, что позволяет сделать вывод о соответствии технического решения в заявляемом способе критерию "новизна".

Заявляемый способ осуществляется следующим образом. 20,0 кг высушенных и тонко измельченных цветков одуванчика обыкновенного помещают в экстрактор фильтрационного типа и обезжиривают 60 л смеси петролейного эфира с ацетоном (9: 1). Обезжиривание и последующую за ней экстракцию осуществляют методом фронтальной фильтрации экстрагента через слой сырья с помощью вакуума со средней скоростью 20 л/ч.

Обезжиренное сырье отжимают и экстрагируют 70 л 70%-ного водного ацетона. Водно-ацетоновые извлечения упаривают в вакуум-выпарном аппарате при температуре 80 90^оС, остаточном давлении 0,2 0,3 кГс/см² до полного удаления ацетона и получения водного концентрата объемом 5 л. Охлажденный до комнатной температуры концентрат наносят на колонку с нейтральным порошком полиамидного сорбента (диаметр колонки 20 см, высота слоя сорбента 150 см, масса сорбента 4,5 кг).

Очистку от фенолокислот и гликозидов осуществляют 20%-ным раствором уксусной кислоты, со скоростью 5 л/ч с прохождением около 30 л элюата (контроль за степенью очистки хроматографический).

После четкого разделения веществ по зонам слоя столба сорбента (контроль под УФ-светом и хроматографический), элюирование прекращают и зону (часть слоя сорбента), содержащую целевой продукт извлекают из колонки. 2 кг сорбента помещают на воронку Бюхнера и вещество с сорбента вымывают нагретым 96% -ным этанолом частями, с получением около 5 л элюата (контроль полноты смыва вещества хроматографический).

Полученное спиртовое извлечение упаривают под вакуумом с получением концентрата.

Концентрат смешивают с 0,5 кг порошка полиамидного сорбента, полученную суспензию подсушивают на воздухе, наносят на верхнюю часть подготовленной к работе колонки с порошком сорбента (диаметр слоя 10 см, высота слоя 100 см, масса сорбента 2 кг).

Элюирование целевого продукта проводят 15 л смеси хлороформа с этанолом (8:2). Элюаты упаривают под вакуумом до полного удаления хлороформа, а затем досуха.

Остаток растворяют в 1,5 л 96%-ного этанола, переносят в кристаллизатор и оставляют на 24 ч при температуре не выше 5^оС.

Выпавшие кристаллы целевого продукта отфильтровывают под вакуумом и затем высушивают в шкафу. Выход целевого продукта 0,40% (80,0 г) от массы сырья.

П р и м е р 1 (получение целевого продукта в условиях минимальных параметров).

Около 20,0 кг цветков одуванчика обыкновенного высушенных измельчают вальцеванием с получением тонко измельченного однородного порошка с величиной частиц не более 1 мм.

20 кг подготовленного сырья помещают в экстрактор фильтрационного типа и предварительно освобождают от липофильных веществ смесью петролейного эфира с ацетоном в объемных соотношениях 9:1 в соотношении сырья и растворителя 1: 2,5, т.е. 50 л смеси.

Хорошо отжатое под вакуумом от экстрагента сырье для получения целевого продукта в том же экстракторе обрабатывают 70%-ным водным ацетоном при соотношении сырья и экстрагента 1:3,0, т.е. 60 л с той же скоростью получения извлечения (около 20 л/ч).

60 л водно-ацетонового извлечения упаривают в вакуум-выпарном аппарате (температура упарки 80 90^оС, остаточное давление 0,2 0,3 кГс/см²) до полного удаления ацетона с получением водного концентрата 5 л.

Полученный концентрат после охлаждения до комнатной температуры наносят на колонку с нейтральным порошком полиамидного сорбента (масса сорбента 4,5 кг, диаметр колонки 20 см, высота слоя сорбента 150 см).

Очистку от фенолокислот и гликозидов осуществляют элюированием 20%-ной уксусной кислотой со скоростью до 5 л/ч с прохождением около 30 л элюата. После четкого разделения зон по слою столба сорбента, содержащую целевой продукт часть сорбента извлекают из колонны. Сорбент (около 2 кг) помещают на воронку Бюхнера и промывают нагретым до 50 60^оС 96%-ным этанолом (около 5 л). Контроль полноты смыва флавоноидов хроматографический. Полученное спиртовое извлечение упаривают в вакуум-выпарном аппарате до густого остатка.

Полученный остаток количественно смешивают с 0,5 кг порошка полиамидного сорбента и подсушивают на воздухе полученную массу. Полученную суспензию наносят на верхнюю часть сорбента в подготовленной к работе колонны (масса полиамидного порошка 2 кг, диаметр слоя 2 см, высота слоя 100 см). Элюирование целевого продукта проводят смесью хлороформ с этанолом (8:2) 15 л. Элюаты упаривают в вакууме до полного удаления хлороформа, т.е. досуха.

Остаток растворяют в 1,5 л 96%-ного этанола и оставляют на кристаллизацию при температуре не выше 5^оС на 24 ч.

Выпавший осадок целевого продукта отфильтровывают под вакуумом и затем высушивают в сушильном шкафу (температура сушки 100 105^оС, время сушки 1,5 ч).

Выход целевого продукта 0,33% (66 г) от массы сырья.

П р и м е р 2 (получение целевого продукта в условиях максимальных параметров).

Около 20,0 кг цветков одуванчика обыкновенного измельчают вальцеванием с получением тонко измельченного однородного порошка с величиной частиц не более 1 мм.

20 кг подготовленного сырья помещают в экстрактор фильтрационного типа и предварительно освобождают от липофильных веществ смесью петролейного эфира с ацетоном в объемных соотношениях 9:1 в соотношении сырья и растворителя 1: 3,5, т.е. 70 л смеси.

Хорошо отжатое под вакуумом от экстрагента сырье для получения целевого продукта в том же экстракторе обрабатывают 70%-ным водным ацетоном при соотношении сырья и экстрагента 1:4,0 т.е. 80 л с той же скоростью получения извлечения (около 20 л/ч).

80 л водно-ацетонового извлечения упаривают в вакуум-выпарном аппарате (температура упарки 80-90^оС, остаточное давление 0,2 0,3 кГс/см²) до полного удаления ацетона с получением водного концентрата 5 л.

Полученный концентрат после охлаждения до комнатной температуры наносят на колонку с нейтральным порошком полиамидного сорбента (масса сорбента 4,5 кг, диаметр колонки 20 см, высота слоя сорбента 150 см).

Очистку от фенолокислот и гликозидов осуществляют элюированием 20%-ной уксусной кислотой со скоростью до 5 л/ч с прохождением около 30 л элюата. После четкого разделения зон по слою столба сорбента, содержащую целевой продукт часть сорбента извлекают из колонны. Сорбент (около 2 кг) помещают на воронку Бюхнера и промывают нагретым до 50 60^оС 96%-ным этанолом (около 5 л). Контроль полноты смыва флавоноидов хроматографический. Полученное спиртовое извлечение упаривают в вакуум-выпарном аппарате до густого остатка.

Полученный остаток количественно смешивают с 0,5 кг порошка полиамидного сорбента и подсушивают на воздухе полученную массу. Полученную суспензию наносят на верхнюю часть сорбента в подготовленную к работе колонку (масса полиамидного порошка 2 кг, диаметр слоя 10 см, высота слоя 100 см). Элюирование целевого продукта проводят смесью хлороформ с этанолом (8:2) 15 л. Элюаты упаривают в вакууме до полного удаления хлороформа, то есть досуха.

Остаток растворяют в 1,5 л 96%-ного этанола и оставляют на кристаллизацию при температуре не выше 5^оС на 24 ч.

Выпавший осадок целевого продукта отфильтровывают под вакуумом и затем высушивают в сушильном шкафу под вакуумом (температура сушки 100 105^оС, время сушки 1,5 ч).

Выход целевого продукта 0,38% (76 г) от массы сырья.

П р и м е р 3. Получение целевого продукта в условиях оптимальных параметров.

Около 20,0 кг цветков одуванчика обыкновенного измельчают вальцеванием с получением тонко измельченного однородного порошка с величиной частиц не более 1 мм.

20 кг подготовленного сырья помещают в экстрактор фильтрационного типа и предварительно освобождают от липофильных веществ смесью петролейного эфира с ацетоном в объемных соотношениях (9:1) при соотношении сырья и раствоpителя 1:3,0, т.е. 60 л смеси.

Хорошо отжатое под вакуумом от экстрагента сырье для получения целевого продукта в том же экстракторе обрабатывают 70%-ным водным ацетоном при соотношении сырья и экстрагента 1:3,5, т.е. 70 л с той же скоростью получения извлечения (около 20 л/ч).

70 л водно-ацетонового извлечения упаривают в вакуум-выпарном аппарате (температура упарки 80 90^оС, остаточное давление 0,2 0,3 кГс/см²) до полного удаления ацетона с получением водного концентрата 5 л.

Полученный концентрат после охлаждения до комнатной температуры наносят на колонку с нейтральным порошком (масса сорбента 4,5 кг, диаметр колонки 20 см, высота слоя сорбента 150 см).

Очистку от фенолокислот и гликозидов осуществляют элюированием 20%-ной уксусной кислотой со скоростью до 5 л/ч с прохождением около 30 л элюата. После четкого разделения зон по слою столба сорбента, содержащую целевой продукт часть сорбента извлекают из колонны. Сорбент (около 2 кг) помещают на воронку Бюхнера и промывают нагретым до 50 60^оС 96%-ным этанолом (около 5 л). Контроль полноты смыва флавоноидов хроматографический. Полученное спиртовое извлечение упаривают в вакуум-выпарном аппарате до густого остатка.

Полученный остаток количественно смешивают с 0,5 кг порошка полиамидного сорбента и подсушивают на воздухе полученную массу. Полученную суспензию наносят на верхнюю часть сорбента в подготовленную к работе колонну (масса полиамидного порошка 2 кг, диаметр слоя 10 см, высота слоя 100 см). Элюирование целевого продукта проводят смесью хлороформа с этанолом (8:2) 15 л. Элюаты упаривают в вакууме до полного удаления хлороформа, то есть досуха.

Остаток растворяют в 1,5 л 96%-ного этанола и оставляют на кристаллизацию при температуре не выше 5^оС на 24 ч.

Выпавший осадок целевого продукта отфильтровывают под вакуумом и затем высушивают в вакуум-сушильном шкафу (температура сушки 100 105^оС, время сушки 1,5 ч).

Выход целевого продукта 0,40% (80 г) от массы сырья.

При хроматографической очистке целевого продукта на полиамидном сорбенте для элюирования на первом этапе выбрана 20%-ная уксусная кислота, а на втором этапе смесь хлороформа с этанолом (8:2) с фиксированными объемами и концентрациями исходных растворителей, что также позволяет не снижая выхода получить целевой продукт отвечающий требованиям нормативно-технической документации (ВФС 42-1709-87).

Таким образом, получаемый по заявляемому способу лютеолин по физико-химическим свойствам, полностью соответствует требованиям на лютеолин-стандарт по ВФС 42-1709-87.

Таким образом, при получении целевого продукта по заявляемому способу из технологии исключены: труднодоступный ферментный препарат "Пектоваморин", сорбент силикагель, бутанол, часть хлороформа и этанола, сорбент заменен более эффективным полиамидом.

Общее сокращение времени ведения технологических процессов составило 45 ч или в 1,9 раза менее, чем по способу-прототипу.

Получаемый целевой продукт лютеолин может быть использован как лекарственный препарат или стандартный образец для аналитических целей. Кроме того, экономический эффект от заявляемого способа получения лютеолина состоит в расширении сырьевой базы, так как для его получения используют цветки одуванчика обыкновенного повсеместно распространенного растения, а также упрощения технологического процесса.

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа получения лютеолина. Сущность изобретения заключается в обезжиривании цветков одуванчика обыкновенного смесью петролейного эфира с ацетоном в соотношении 9:1 при соотношении сырья и смеси 1: (2,5-3,5), экстракции обезжиренного сырья 70%-ным водным ацетоном при соотношении сырья и экстрагента 1: (3-4), промывке сорбента 20%-ной уксусной кислотой, извлечении сорбента, содержащем целевой продукт, элюции его 96%-ным этанолом, упаривании элюата и повторной очистке на полиамиде с использованием в качестве элюента смеси хлороформа с этанолом в соотношении 8:2. Технический результат заключается в упрощении способа за счет сокращения времени выполнения и исключения ряда операций. 5 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЮТЕОЛИНА путем экстракции обезжиренного растительного сырья органическим растворителем, упаривания экстракта, хроматографирования концентрата на сорбенте, элюирования органическим растворителем, упаривания элюата, перекристаллизации из этанола и сушки, отличающийся тем, что в качестве сырья используют цветки одуванчика обыкновенного (Taraxacum officinale L. ), обезжиривание проводят смесью петролейного эфира с ацетоном, взятых в соотношении 9:1 при соотношении сырье:смесь 1:(2,5-3,5), экстракцию обезжиренного сырья ведут 70%-ным водным ацетоном при соотношении сырье:экстрагент 1:(3,0-4,0) и упаренный концентрат хроматографируют на полиамидном сорбенте, промывают сорбент 20% -ной уксусной кислотой, часть сорбента, содержащую целевой продукт, извлекают и элюируют 96%-ным этанолом, упаривают элюат и повторно очищают на полиамиде с использованием в качестве элюента смеси хлороформа с этанолом в соотношении 8:2.