СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУММЫ ОКСИКОРИЧНЫХ КИСЛОТ, ОБЛАДАЮЩЕЙ ЖЕЛЧЕГОННЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 1998 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к области фармации и касается способа получения сухой субстанции очищенной суммы оксикоричных кислот из травы валерианы лекарственной, обладающей определенной желчегонной активностью.

Известны способы получения из растительных источников средств, обладающих желчегонной активностью.

Так, по способу (Зубицкий Д.Н., Филиппов Ю.А. Способ получения средства, обладающего желчегонной активностью. Патент РФ N 1816216, кл. A 61 K 35/78. -БИ N 18, 1993) получают комбинированное средство, содержащее смесь извлечений из ряда растений, в том числе и корня валерианы 50%-ным спиртом, с добавлением различных солей.

В способе (Глызин В.И., Смирнова Л.П., Объедкова Е.Ф. и др. Способ получения средства, обладающего желчегонной активностью. А.с. N 1361760, кл. A 61 K 35/78. - БИ N 19, 1994), средство получают, экстрагируя цветы двух видов пижмы при нагревании до 80^oC трижды этанолом при соотношении сырье : экстрагент (1 : 7). Экстракты упаривают, остаток обрабатывают горячей дистиллированной водой, затем очищают дихлорэтаном. Целевой продукт извлекают бутанолом, упаривают, остаток растворяют в этаноле и высушивают при 65 - 100^oC с выходом суммы 3,7 - 4,3% от сырья.

В способе (Гелла Э. В. , Вавилова Н.К., Гримова Т.А. Способ получения флавоноидов, иридоидов и оксикоричных кислот. - А.с. СССР N 904710, кл. A 61 K 35/78. - БИ N 6, 1982) сумму флавоноидов, иридоидов и оксикоричных кислот получают из травы зопника клубненосного, экстрагируя сырье 70%-ным спиртом в соотношении 1 : 30, упаривают экстракт до воды, охлаждают, осадок отделяют и растворяют четырежды в 70%-ном этаноле, отделяют спирт, растворяют остаток в горячей дистиллированной воде, объединяют с водным фильтратом, охлаждают, наносят на колонку с полиамидом. Колонку промывают водой, затем элюируют 70%-ным этанолом. Водные и спиртовые элюаты объединяют, упаривают и сушат распылением. Выход очищенной суммы флавоноидов, иридоидов и оксикоричных кислот - 8,1% от сырья.

В способе (Матсумото Т., Куеси Т. Флавоноидный гликозид. Патент США N 4753929, кл. A 61 K 31/70. - РЖ "Химия",N 10, 1989, 0232 П.) из листьев гинго получают кумароилглюкозилрамнозид кверцетина, экстрагируя сырье низшим спиртом с последующим обезжириванием экстракта четыреххлористым углеродом и обработкой осадка этилацетатом, бутанолом с последующей очисткой на колонке силикагеля.

По сравнению с заявляемым в этих способах применяются различные растворители, процессы идут при нагревании с большим расходом растворителей, длительные очистки с использованием различных сорбентов.

Прототипом к предложенному способу является способ получения оксикоричных кислот (Гелла Э.В., Жуков И.М., Гримова Т.А. и др. Способ получения оксикоричных кислот. - А.с. СССР N 1165405, кл. A 61 K 35/78. БИ N 15, 1985), в соответствии с которым траву белокудренника экстрагируют при нагревании на водяной бане по 3 ч трижды 96%-ным этанолом при соотношении сырье : экстрагент 1 : 10 (общий объем экстрагента 30 л). Полученные спиртовые извлечения фильтруют и упаривают, остаток разбавляют горячей водой и охлаждают. Раствор фильтруют и наносят на колонку окиси алюминия. Продукт элюируют дистиллированной водой, элюаты упаривают, осадок охлаждают, подкисляют серной кислотой до pH 2. Целевой продукт (сумма оксикоричных кислот) в делительной воронке извлекают из водной фазы смесью диэтиловый эфир-н.бутанол в соотношении 1 : 17. Упаривают органический растворитель, остаток обрабатывают 70%-ным этанолом и получают порошок целевого продукта 1,8% (от массы растительного сырья).

Новизна предлагаемого решения заключается в том, что предложенная совокупность технических приемов позволила использовать новый вид сырья - траву (Технические условия 64-4-044-83. Трава валерианы лекарственной. - М., 1983. - 109 с.), обеспечить высокий выход целевого продукта и упростить технологию, получить очищенную сумму оксикоричных кислот, обладающую определенной желчегонной активностью.

Новизна предлагаемого способа свидетельствует о творческом характере решения, т. е. говорит о соответствии предлагаемого решения требованию "неочевидности".

К причинам, препятствующим в прототипе достижению требуемого технического результата, можно отнести следующее: 96%-ный этанол в данном случае как экстрагент не обеспечивает полноты извлечения целевого продукта из сырья, подкисление субстрата приводит к частичному гидролизу нативных эфиров оксикоричных кислот, что приводит к потере части биологически активных комплексов, снижению качества и выхода целевого продукта.

Технический результат, получаемый при решении задачи, выражается в использовании нового вида сырья (травы), упрощении технологии, использовании нового элюента (10 - 2 % раствора натрия хлорида), достижении высокого выхода и в получении желчегонного действия целевого продукта.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения, состоят в следующем: тонкоизмельченная (вальцованная) трава валерианы лекарственной (Аммосов А. С. , Попова Т.П., Литвиненко В.И. Вальцевание - перспективный способ измельчения лекарственного растительного сырья //Тез. докл. науч.-практ. конф. , посвящ. 25-летию фарм. фак. Курск. мед. ин-та. - Курск. - 1991. - С. 170 - 171) экстрагируется 60 - 70%-ным этиловым спиртом при соотношении сырье : экстрагент (1 : 5 - 7) фильтрационным методом (Фильтрационная экстракция и ее аппаратурное оформление /Т.П.Попова, А.С. Аммосов, В. И. Литвиненко, В. М. Мишев // Фармаком, N 2-3 (19-20 1994). - Харьков. - С. 43 - 49). Процесс экстрагирования проводят при температуре 20 - 25^oC. Спиртовое извлечение упаривают в вакууме до удаления спирта и получения около 1/3 первоначального объема. Полученный концентрат выдерживают при температуре не выше 10^oC в течение 5 ч. После отстаивания отделяют осадок липофильных веществ. Фильтрат разбавляют пополам (1/2) 10%-ным водным раствором натрия хлорида. Полученный раствор вносят в колонку, заполненную полиамидным сорбентом влажным способом (Максютина Н.П., Литвиненко В.И. Методы выделения и исследования флавоноидных соединений //Фенольные соединения и их физиологические функции. - М., 1968. - С. 7-26). Элюирование целевого продукта производят сначала 10%-ным раствором натрия хлорида, с уменьшением концентрационного градиента по натрию хлориду с 10 до 2%. Полученные элюаты, содержащие целевой продукт, упаривают до 1/5 первоначального объема, охлаждают и повторно наносят на небольшую колонку с полиамидом, промывая дистиллированной водой до отрицательной реакции на хлориды. Очищенную сумму целевого продукта элюируют 20%-ным водным этанолом, упаривают и сушат. Выход целевого продукта 2,5 - 3,0% от массы растительного сырья.

Пример 1. Исходное сырье, высушенную траву валерианы лекарственной, измельчают методом вальцевания в порошок с величиной частиц не более 1 мм. 30,0 кг измельченного сырья загружают в экстрактор фильтрационного типа равномерным плотным слоем. Сырье в экстракторе обрабатывают экстрагентом - 60%-ным водным этанолом. Процесс экстрагирования ведут при температуре 20 - 25^oC фильтрационным методом с отбором экстракта с помощью вакуума со средней скоростью около 20 л/ч и с получением извлечения, на которое расходуют 150 л экстрагента (при соотношении 1 : 5).

Полученный экстракт упаривают в вакуум-выпарительном аппарате при температуре 70 - 80^oC и остаточном давлении 0,1 - 0,2 кг/см² до полного удаления этанола и с получением 30 л водного концентрата.

Концентрат помещают в отстойник, закрывают крышкой и помещают в холодильную камеру, где выдерживают в течение 5 ч при температуре не выше плюс 10^oC. После отстаивания липофильная смолистая часть, содержащая хлорофилл, каротиноиды, смолы, масла, собирается в виде осадка. Водный раствор декантируют и фильтруют на нутч-фильтре.

Водный фильтрат около 30 л разбавляют 30 л 10%-ного водного раствора натрия хлорида.

Полученный раствор со скоростью подачи 5 л/ч наносят на колонку с влажным порошком полиамидного сорбента (высота колонки 150 см, диаметр 25 см, масса сорбента 5 кг). Элюирование оксикоричных кислот производят сначала 10%-ным раствором натрия хлорида и с получением каждых 5 л снижают концентрацию раствора натрия хлорида на 2%, доводя ее до 2% с получением около 25 л элюатов.

Полученный раствор элюатов, содержащих в том числе оксикоричные кислоты, упаривают в вакууме до 5 л концентрата. На полиамиде остаются липофильные и фенольные (флавоноидные) компоненты.

Концентрат повторно наносят на колонку с порошком полиамида (высота 50 см, диаметр 15 см, масса 2 кг). Сорбент промывают дистиллированной водой со скоростью 5 л/ч до отрицательной реакции в последних порциях элюатов на хлориды. Оксикоричные кислоты элюируют 20%-ным водным этанолом до отрицательной реакции на оксикоричные кислоты (хроматографический метод) с получением около 25 л элюатов. Элюаты упаривают в вакууме с получением около 1,5 кг густой массы, которую помещают на противни небольшим слоем и сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре не выше 80^oC в течение 2,5-3 ч и остаточной влажности не более 5%. Продукт снимают, измельчают в шаровой мельнице, просеивают с получением 0,75 кг целевого продукта, т.е. 2,55% от массы сырья.

Пример 2. 30,0 кг тонкоизмельченного сырья загружают в экстрактор фильтрационного типа равномерным слоем. Сырье в экстракторе обрабатывают экстрагентом - 70%-ным этанолом. Процесс экстрагирования ведут при комнатной температуре со средней скоростью около 20 л/ч с получением извлечения, на которое расходуют 210 л экстрагента (при соотношении 1 : 7).

Полученный экстракт упаривают в вакуум-выпарном аппарате при температуре 70 - 80^oC и остаточном давлении 0,1 - 0,2 кгс/см² до полного удаления этанола и с получением 30 л водного концентрата.

Концентрат в отстойнике выдерживают в течение 5 ч при температуре не выше плюс 10^oC. После отстаивания липофильная часть отделяется декантацией на нутч-фильтре.

Водный фильтрат около 30 л разбавляют 30 л 10%-го водного раствора натрия хлорида.

Полученный раствор со скоростью подачи (истечения) около 5 л/ч наносят на колонку с влажным порошком полиамидного сорбента (высота колонки 150 см, диаметр 25 см, масса сорбента 5 кг). Элюирование суммы оксикоричных кислот производят сначала 10%-ным водным раствором натрия хлорида и с получением каждых 5 л снижают концентрацию раствора натрия хлорида на 2%, доводя ее до 2%, с получением около 25 л общих элюатов.

Полученный раствор элюатов, содержащих сумму оксикоричных кислот в солевом растворе, упаривают в вакууме до 5 л концентрата.

Концентрат при комнатной температуре повторно наносят на колонку с влажным порошком полиамида (высота колонки 50 см, диаметр 15 см, масса сорбента 2 кг). Сорбент промывают дистиллированной водой со скоростью 5 л/ч до отрицательной реакции на хлориды в последних порциях промывных вод. Оксикоричные кислоты элюируют 20%-ным раствором до отрицательной реакции на оксикоричные кислоты (хроматографический метод) и с получением около 1,5 кг густой массы, которую помещают на противни небольшим слоем и сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре не выше 80^oC в течение 2,5 - 3 ч и отрицательной влажности в продукте не более 5%. Продукт снимают с противней, измельчают в шаровой мельнице, просеивают с получением 0,875 кг целевого продукта, т.е. 2,75% от массы сырья.

Пример 3. 30,0 кг тонкоизмельченного сырья - травы валерианы лекарственной - загружают в экстрактор фильтрационного типа равномерным слоем. Экстрагирование ведут при температуре 20 - 25^oC 65%-ным водным этиловым спиртом со средней скоростью около 20 л/ч и с получением извлечения, на которое расходуют 180 л экстрагента (при соотношении 1 : 6).

Полученный экстракт упаривают в вакуум-выпарном аппарате при температуре 70 - 80^oC и остаточном давлении 0,1 - 0,2 кгс/см² до полного удаления этанола и с получением 30 л водного концентрата.

Концентрат помещают в отстойник, закрывают крышкой и помещают в холодильную камеру, где выдерживают в течение 5 ч при температуре не выше плюс 10^oC. После отстаивания липофильной смолистой части, содержащей хлорофилл, каротиноиды, смолы, масла, водный раствор декантируют и фильтруют на нутч-фильтре.

Фильтрат около 30 л разбавляют 30 л 10%-го раствора натрия хлорида. Полученный раствор со скоростью выхода элюата около 5 л/ч наносят на колонку с влажным порошком полиамидного сорбента (высота колонки 150 см, диаметр 25 см, масса сорбента 5 кг).

Элюирование суммы оксикоричных кислот проводят сначала 10%-ным водным раствором натрия хлорида и с получением каждых 5 л элюата снижают концентрацию натрия хлорида в элюенте на 2%, доводят ее до 2% в последних порциях с получением около 25 л элюатов.

Полученный раствор элюатов, содержащий сумму оксикоричных кислот в солевом растворе, упаривают в вакууме до 5 л концентрата.

Концентрат при комнатной температуре повторно наносят на колонку с влажным порошком полиамида (высота колонки 50 см, диаметр 15 см, масса сорбента 2 кг). Сорбент промывают дистиллированной водой со скоростью 5 л/ч до отрицательной реакции на хлориды в последних порциях промывных вод. Оксикоричные кислоты элюируют 20%-ным водным этанолом до отрицательной реакции в последних порциях элюата на оксикоричные кислоты (хроматографический метод) и с получением около 25 л элюатов. Элюаты упаривают в вакууме с получением около 1,5 кг густой массы, которую помещают на противни небольшим слоем и сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре не выше 80^oC в течение 2,5 - 3 ч до остаточной влажности в продукте не более 5%.

Сухой продукт снимают с противней, измельчают в шаровой мельнице, просеивают через сито с получением 0,900 кг целевого продукта, т.е. 3,00% выхода от массы растительного сырья.

Получаемый целевой продукт - очищенная сумма оксикоричных кислот стандартизуется спектрофотометрически по содержанию оксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту и другим качественным показателям (Оксикоричные кислоты валерианы лекарственной/Талашова С.В., Цуркан Ан.А., Фурса Н.С. и др. //Комплексное использование медико-биологических проблем здоровья населения Тюменской области: Сб. науч. труд., посвящ. 30-летию Тюменского госуд. мед. ин-та. Ч. 3. - Тюмень, 1993. - С. 32-33).

Проверку биологической активности проводили в сравнении 1%-ных водных растворов, полученных из целевого продукта и спиртовой настойки травы валерианы, по тест-показателям их желчегонной активности. Сравнительные материалы приведены в табл. 4.

В результате реализации предлагаемого способа используют новый вид растительного сырья - траву валерианы лекарственной, измельченную методом вальцевания, которую экстрагируют 60 - 70 %-ным водным этанолом фильтрационным методом, очистку проводят на полиамиде, впервые используя в качестве элюента 10 - 2%-ный раствор хлорида натрия с получением целевого продукта, обладающего желчегонной активностью. Сравнительные данные по заявляемому способу представлены в табл. 1 - 3.

Использование: изобретение относится к фармации и позволяет получить сухую очищенную сумму оксикоричных кислот из травы валерианы лекарственной, с высоким выходом и ранее не использованную в официальной медицине. В основу изобретения поставлена технологическая задача получения суммы оксикоричных кислот из травы валерианы лекарственной, выполнение которой позволяет обеспечить высокий выход целевого продукта и упростить технологию его получения. Сущность изобретения заключается в использовании измельченной вальцеванием травы валерианы лекарственной, экстрагируемой 60 - 70%-ным водным этанолом при соотношении сырье : экстрагент (1 : 5 - 7) фильтрационным методом, упаривании извлечения до удаления спирта, разбавлении натрия хлорида от 10 до 2% содержания соли в элюенте, упаривании очищенного целевого продукта, упаривании элюатов и сушки. В качестве элюента раствор натрия хлорида предлагается впервые, с его использованием достигается максимальное отделение оксикоричных кислот от сопутствующих веществ. Выход целевого продукта около 3,0% от массы растительного сырья. Технический результат заключается в упрощении способа получения целевого продукта. 4 табл.

Способ получения суммы оксикоричных кислот, обладающей желчегонным действием, путем обработки растительного сырья органическим растворителем, упаривания, отделения липофильного осадка, очистки на сорбенте, упаривания и сушки, отличающийся тем, что измельченную вальцеванием траву валерианы лекарственной экстрагируют 60 - 70%-ным водным этанолом фильтрационным методом при соотношении сырье : экстрагент (1 : 5 - 7), очистку проводят на полиамиде, сначала элюируют 10 - 2%-ным раствором хлорида натрия, а затем повторно сорбированный продукт элюируют 20%-ным этанолом с получением целевого продукта.