3-[ (5-МЕТИЛ-2 -ФУРАНИЛ)МЕТИЛ] -N-(4- ПИПЕРИДИНИЛ) -3Н-ИМИДАЗО (4,5-B)ПИРИДИН- 2-АМИН-2- ГИДРОКСИ-1,2,3 -ПРОПАНТРИКАРБОКСИЛАТ, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОАЛЛЕРГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И АНТИАЛЛЕРГИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 1995 года по МПК C07D405/06 A61K31/34 A61K31/44 A61K31/395 C07D405/06 C07D211/00 C07D213/00 C07D307/00 

3-[(5-Метил-2-фуранил)метил] -N-(4-пиперидинил)-3Н-имидазо [4,5-b] пиридин-2-амин в качестве промежуточного продукта, используемого для приготовления противоаллергических соединений /1/. Известны также фармакологические свойства, в частности, противоаллергическая активность упомянутого промежуточного соединения, а также его состав и применение. Новизна настоящего соединения состоит в улучшенной физико-химической стабильности соединения, имеющего форму соли по сравнению с предыдущими соединениями, имеющими форму соли или основания.

Настоящее изобретение касается новой соли, а именно, 3-[(5-метил-2-фуранил)-метил] -N-(4-пиперидинил)-3Н-имидазо [4,5-b] пиридин-2-амин 2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоксилата (1:1), которая представлена двумя формулами:
HN- - (1)
Свободное основание, соответствующее соли формулы I известно как ноберастин и согласно новой соли формулы I в дальнейшем будет называться цитрат ноберастина.

Упомянутое свободное основание, а также динитрат, дигидрохлорид полугидрат и (Z)-2-этендикарбонат (1:2) соли описаны в патенте США N 4 835 161 [2] К сожелению все эти известные ранее соли и основания имеют недостаток они имеют недостаточную физико-химическую стабильность. При хранении упомянутые соли и основания подвергаются прогрессивному разложению и часто увеличивается содержание и число загрязнений. В дальнейшем эта проблема усугубляется требованиями окружающих условий свет, тепло, влажность, кислотность, основность, кислород.

Свободное основание ноберастина светочувствительно и при освещении значительно умменьшает молекулярную цепь. При хранении этого соединения, имеющего желтый цвет при относительной влажности 60 или 90% цвет меняется до темно-желтого и происходит поглощение воды. Вследствие этого соединение частично разжижается и образуется вязкая твердая масса. Динитро соль и дигидрохлорид полугидратная соль имеют недостаток, т.к. они значительно разлагаются в водной среде, и следовательно, они не подлежат выражению стандартной формулой, особенно в составах жидкостей. Дигидрохлорид полугидратной соли-гигроскопичное соединение и меняет цвет от светло-желтого до темно-желтого, и в конце концов, до коричневого цвета.

(Z)-2-этендикарбонат (1: 2) или кислая соль малеиновой кислоты разлагается даже при комнатной температуре, а уменьшение молекулярной цепи значительно увеличивается при освещении или повышении температуры. Длительные наблюдения показывают, что невозможно хранить для будущего использования пробы этой соли в качестве эталона, так как образуются, по меньшей мере, две посторонние примеси.

Из указанного следует, что ни соли, ни основание, известные ранее, не подходят в достаточной мере ни для традиционного выражения формулой, ни для фармацевтического использования.

Неожиданно было обнаружено, что упомянутые проблемы можно обойти или свести к минимуму использованием цитратной соли ноберастина. Эта новая соль не является светочувствительной, гораздо стабильнее известных ранее солей и оснований по отношению к комнатной температуре, высокой относительной влажности и устойчива в водных условиях.

Обычно цитрат ноберастина можно приготовить растворением ноберастина в подходящем растворителе, нагреванием раствора, добавлением достаточного количества лимонной кислоты, охлаждением реакционной смеси и отделением прозрачного целевого продукта. Полученный таким образом цитрат ноберастина в дальнейшем подвергается повторной кристаллизации для очистки.

Свободное основание ноберастина, упомянутое выше, и используемое в качестве исходного материала для приготовления соли лимонной кислоты, можно приготовить трацидионным способом, описанным в патенте США N 4888426 /1/.

Термин "подходящий растворитель", который используется для приготовления цитрата ноберастина, определяет любой низший спирт или кетон, в которых растворяется ноберастин, в состав такого растворителя включены первичные, вторичные и третичные спирты и соответствующие кетоны, имеющие от 1 до 6 атомов углерода. А именно, метанол, этанол, 1-пропанол, 2-пропанол, 1-бутанол, 2-бутанол, 2-метил-1-пропанол, 1,1-диметил-этанол, циклогексанол и подобные им соединения. Подходящие кетоновые растворители-ацетон, бутанон, 4-метил-2-пентанон, циклогексанон и подобные им. Смеси двух или более вышеупомянутых растворителей можно также эффективно использовать для приготовления цитрата ноберастина, а также растворов упомянутых растворителей или их смесей с водой. В частности, содержание воды в растворе может достигать 25-35% (по объему). Предпочтение отдается использованию в качестве растворителей низших спиртов, в частности, метанола или этанола. Метанол наиболее предпочтителен.

Растворы ноберастина в упомянутых растворителях имеют высокую концентрацию, наиболее типично соотношение по объему ноберастина к растворителю 0,3 моль/л: 1,2 моль/л, предпочтительнее 0,5 моль/л: 1 моль/л. Эти растворы готовят традиционным способом путем смешивания всех компонентов при температуре окружающей среды. Уместна обработка раствора активированным углем 5% от массы ноберастина. Оба типа раствора, в состав которых входит или не входит активированный уголь, должны перемешиваться в течение часа, предпочтительнее в течение получаса, затем фильтруются через инфузорную землю, которая предварительно увлажняется растворителем. Иногда фильтрация протекает с некоторыми затруднениями, чтобы ускорить этот процесс добавляется дополнительное количество инфузорной земли в раствор. Осадок промывается небольшим количеством растворителя, в основном используется до 25% от исходного объема растворителя. Комбинированные фильтраты нагреваются при температуре, достигающей температуры флегмы раствора, предпочтительнее при 45-65^оС в частности при 50-60^оС. Лимонная кислота добавляется порциями к нагретому концентрированному раствору либо твердыми кристаллами, либо в растворенном виде в небольшом количестве воды. Кислота добавляется с такой скоростью, что температура раствора легко удерживается на постоянном уровне. В равной степени можно использовать лимонную кислоту безводную или моногидрат. Молярное соотношение лимонной кислоты к ноберастину может составлять 0,9:2, предпочтительнее 0,95: 1,5, а в частности 1,0:1,1. Перемешивание раствора происходит непрерывно при 55-65^оС в течение около часа, предпочтительнее в течение получаса. Затем раствор медленно охлаждается при температуре окружающей среды. Такое медленное охлаждение можно эффективно выполнять, если выключить источник нагревания и его удалением, что будет способствовать теплообмену с окружающей средой. В случае, если объем очень велик по отношению к площади поверхности реакционного сосуда, то процесс охлаждения сильно замедлится, в этом случае можно использовать любые известные способы охлаждения. После охлаждения реакционной смеси осажденные кристаллы нужно дегидрировать до фильтрации. Выпаривание кристаллов цитрата ноберастина можно осуществить путем непрерывного перемешивания смеси после достижения комнатной температуры. Процесс выпаривания может продолжаться в течение всего дня, предпочтительныее 0-4 ч. Осажденный цитрат ноберастина фильтруется, промывается дополнительным растворителем небольшим количеством холодного растворителя. Полученный продукт затем просушивается традиционными средствами, например, вакуумом или повышением температуры, в частности до 40-60^оС, предпочтительнее 50^оС. Выход полученного цитрата ноберастина составляет 80-95% с высоким содержанием метанола, сходимость результатов (воспроизводимость) около 93-94% Качество цитрата не зависит от выбора растворителя.

Полученный таким способом цитрат ноберастина можно в дальнейшем очистить вторичной кристаллизацией в подходящем растворителе. Термин "подходящий растворитель", используемый в процессе повторной кристаллизации цитрата ноберастина, определяет растворитель из низшего спирта, а также смесь низших спиртов с водой. В частности, применяется смесь, где содержание воды составляет до 30% раствора (по объему). Для процесса повторной кристаллизации используется метанол, этанол, 1-пропанол, 2-пропанол и аналогичные соединения. Растворы цитрата ноберастина, используемые для процесса повторной кристаллизации, имеют высокую концентрацию около точки насыщения растворенного вещества в растворителе и приготовляются традиционно из пересыщенных растворов соли в упомянутых растворителях из низших спиртов. Предпочтительнее использование в качестве растворителя низших спиртов, таких как метанол или этанол и использование достаточного количества добавляемой воды, например, на более поздних этапах процесса. При использовании метанола соотношение массы к объему цитрата ноберастина к метанолу может достигать 0,3 г/мл:0,7 г/мл, в частности, 0,4 г/мл:0,6 г/мл, предпочтительнее 0,45 г/мл:0,55 г/мл. Упомянутый раствор в растворителе из низших спиртов перемешивается и подогревается до температуры обратного потока. Чтобы полностью растворить цитрат, к нагретой гетерогенной смеси добавляется вода по каплям. Предпочтительнее добавить воду при такой скорости, чтобы температура реагентной смеси удерживалась на уровне температуры флегмы. Удержание постоянной температуры нагретого раствора цитрата ноберастина можно облегчить, если добавлять предварительно подогретую воду, имеющую температуру обратного потока раствора соли. После полного добавления воды получившийся раствор перемешивают и подогревают при температуре обратного потока в течение часа, предпочтительнее около получаса. Реактивная смесь охлаждается спонтанно при комнатной температуре, процесс кристаллизации начинается при температуре около 45^оС. Кристаллы выпариваются при комнатной температуре в течение дня, предпочтительнее 0-10 ч. Осадок отфильтровывается и промывается небольшим количеством растворителя из низших спиртов, обычно около 1 мл/г. Кристаллы просушиваются традиционными способами в условиях вакуума и при повышенной температуре около 40-60^оС.

В некоторых случаях можно использовать дополнительную ступень очистки, применяя активированный уголь при повторной кристаллизации. Например, после полного добавления воды при проведении повторной кристаллизации добавляется активированный уголь 5% от массы цитрата, в дальнейшем смесь перемешивается и нагревается в течение часа, лучше в течение получаса. Полученный нагретый раствор фильтруется через инфузорную землю, которая предварительно увлажняется подогретой смесью растворителей. Осадок промывается аналогичной подогретой смесью растворителей, комбинированные фильтраты спонтанно охлаждаются до комнатной температуры. Полученные кристаллы собираются и высушиваются, как описано выше.

Соединение цитрат ноберастина является антигистаминным и антисеротонинным соединением, применяемым в качестве противоаллергического средства. Указанная новая соль обладает, кроме того, физико-химической устойчивостью, в дальнейшем объединяется в количествах с хорошей растворимостью и биоэквивалентна соли (Z)-2-этендикарбоната (1: 2). Как и ранее известные соли и свободные основания цитрат имеет благоприятную фармакокинетическую направленность при объединении быстродействующего начала и подходящей длительности действия.

Цитрат ноберастина предназначается для применения в подходящих фармацевтических соединениях, например, твердые препараты для орального применения пилюли, таблетки, порошки, капсулы и т.п. жидкие формы для орального применения растворы, суспензии, сиропы, эликсиры и т.п. Известные ранее аналогичные соединения и упомянутые соединения можно получить при однородном смешивании активного компонента цитрата ноберастина с одним или более подходящим носителем и/или с присадками и превращением полученной смеси в ту форму, которая назначена для применения.

Для упрощения применения и унифицирования дозировки необходимо упомянутые фрамацевтические соединения выражать в единицах дозировки. Примерами таких единиц дозировки могут быть таблетки, капсулы, пилюли, порошки, облатки, растворы для инъекций, суспензии, полная чайная ложка, полная столовая ложка и т.п. а также многие другие.

Целесообразная ежедневная дозировка цитрата ноберастина составляет предположительность 0,01-10 мг/кг масса тела, в частности, 0,05 и 5 мг/кг массы тела, предпочтительнее 0,1 и 2 мг/кг массы тела.

Другая особенность изобретения использование цитрата ноберастина для изготовления медицинских препаратов для лечения больных, страдающих аллергическими заболеваниями или такими растройствами как аллергические риниты, аллергические конъюнктивиты, хроническая крапивница, аллергическая астма и т.п.

Однако другая особенность изобретения относится к способу лечения больных, страдающих от аллергических заболеваний или расстройств, путем назначения эффективного количества антиаллергического цитрата ноберастина этим больным.

Представленные ниже примеры предназначены для иллюстрации, а не для ограничения использования настоящего изобретения. Если не оговорено особо, все части представлены по массе.

Экспериментальная часть
П р и м е р 1. К смеси из 60,73 ч 3-[(5-метил-2-фуранил)метил]-N-(4-пиперидинил)-3Н-имидазо [4,5-b]-пиридин-2-амина(ноберастина) в 195 мл метанола добавляли 3,3 ч активированного древесного угля (Norit A Supra R) и 9,1 ч инфузорной земли. Реагентная смесь перемешивалась в течение получаса при 20^оС и фильтровалась через инфузорную землю, которая затем промывалась 40 мл метанола. Комбинированные фильтраты подогревались до 50^оС и добавляли 41 ч моногидрата лимонной кислоты. Смесь перемешивали в течение получаса при 60-65^оС, затем спонтанно охлаждалась до комнатной температуры. Смесь перемешивалась срезу же (всю ночь) и отфильтровывалась. Осадок промывался 80 мл метанола и просушивался в условиях вакуума при 50^оС, выход продукта составлял 91,2 ч (92,9%) 3 [(5-метил-2-фиранил)метил]-N-(4-пиперидинил)-3Н-имидаза [4,5-b] пиридин-2-амин 2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоксилат (1:1) (цитрат ноберастина) т.р. 192,0^оС.

П р и м е р 2. Перемешанная смесь из 40 ч цитрата ноберастина (как было приготовлено в примере 1) в 80 мл метанола нагревалась до температуры обратного потока. Добавляли около 25 мл воды и непрерывно перемешивали в течение получаса при температуре обратного потока. Раствор спонтанно охлаждали до комнатной температуры 20^оС, а в дальнейшем сразу же (всю ночь) перемешивали. Кристаллический осадок отфильтровывался метанолом и высушивался в вакууме при 50^оС, выход цитрата ноберастина составлял 37,4 ч (94%).

П р и м е р 3. Перемешанная смесь из 40 ч цитрата ноберастина (как было приготовлено в примере ) в 80 мл метанола подогревали при температуре обратного потока. Добавляли около 25 мл воды и 2 ч активированного древесного угля, перемешивали непрерывно в течение получаса при температуре обратного потока. Раствор фильтровали через инфузорную землю, которая промывалась предварительно нагретой смесью из 16 мл метанола и 5 мл воды. Комбинированные фильтраты спонтанно охлаждались до комнатной температуры, а затем перемешивались сразу же (всю ночь). Кристаллический продукт собирался, промывался метанолом и высушивался в условиях вакуума при температуре 50^оС, выход цитрата ноберастина составлял 34,7 ч (87%); т.р. 191,8^оС.

П р и м е р 4 устойчивость к свету.

Порции, состоящие из 150 мг основания ноберастина, димелеинат ноберастина и цитрат ноберастина отвешивали в стеклянные сосуды. Эти сосуды получали световое излучение в течение 7 дней в светлом шкафу с 16 белыми флюоресцентными лампами (Sylvania F 20T 12/D Daylight 6500K). Интенсивность освещения составляла 17000 люкс, средняя температура в шкафу была приблизительно 40^оС. После 3 и 7-дневного освещения порция в 50 мг из каждой пробы растворялась в 10 мл смеси метанола и воды (2:3 по объему) и анализировали в (HpLC) жидкостной хроматографией выского разрешения с обращенными фазами.

Колонна: 12,5 см Суперсфера RP селект-В (4 )
Интенсивность потока: 1,5 мл/мин
Растворители элюции:
A: 0,75% ацетат аммония в воде
B: ацетонитрил
C: тетрагидрофуран
Режим элюции приведен в табл. 1.

Табл. 2 показывает относительное время удержания (RRT; в отношении ноберастина) и концентрацию (%) каждого продукта разложения, определенного при концентрации 0,1% в анализируемых пробах.

Т.к. основание и дималеинат ноберастина подвергаются значительному разложению при действии дневного света, цитрат ноберастина остается стабильным в условиях хранения и у него не наблюдается ни обесцвечивания, ни разложения.

Примеры состава.

Следующие формулировки являются примером типичных фармацевтических составов в единицах дозировки, подходящих для системного и локального назначения для теплокровных животных согласно настоящему изобретению.

Термин "Активный ингредиент" (А.1), который применяется повсюду в примерах, относится к цитрату ноберастина.

П р и м е р 5 (оральное применение капель).

500 г А.1. растворяли в 0,5 л 2-гидроксипропионовой кислоте и 0,5 л полиэтилен гликоля при 60-80^оС. После охлаждения до 30-40^оС добавляли 35 мл полиэтиленгликоля смесь хорошо перемешивали. Затем добавляли раствор 1750 г натриевого производного сахарина в 2,5 л очищенной воды и в процессе перемешивания добавляли 2,5 л аромата какао и полиэтилен гликоля g.s. к объему в 50 л, получая раствор капель для орального применения, где А.1. составляет 10 мг/мм. Получаемый раствор заполнялся в подходящие сосуды.

П р и м е р 6 (растворы для орального применения).

9 г метил-4-гидроксибензоата и 1 г пропил-4-гидроксибензоата растворяли в 4 л кипящей очищенной воды. В 3 л этого раствора растворяли сначала 10 г 2,3-дигидрокси этендикарбоновой кислоты, а затем 20 г А.1. Полученный раствор соединяли с оставшейся частью первого раствора, затем добавляли 12 л 70% 1,2,3-пропантриола и 3 л сорбита, 40 г натриевого производного сахарина растворяли в 0,5 л воды, затем добавляли 2 мл эссенции малины и 2 мл эссенции крыжовника. Полученный раствор соединяли с первым раствором, добавляли воды g. s. до объема 20 л, обеспечивая получение раствора для орального применения с содержанием 5 мг А.1. в полной чайной ложке (5 мл). Полученный раствор разливали в подходящие сосуды.

П р и м е р 7 (капсулы).

20 г А.1. 6 г лаурилсульфата натрия, 56 г крахмала, 56 г лактозы, 0,8 г коллоидной двуокиси кремния и 1,2 г магниевой соли стеариновой кислоты интенсивно перемешивали вместе.

g.s. сколько понадобится
Полученная смесь затем заполнялась в 1000 затвердевших желатиновых капсул, каждая из которых содержала 20 мг A.1.

П р и м е р 8 (таблетки, покрытые пленкой).

Приготовление содержимого таблетки.

Смесь, состоящую из 100 г А.1. 570 г лактозы и 200 г крахмала, хорошо перемешивали, затем увлажняли раствором из 5 г додецилсульфата натрия и 10 г поливинил пирролидона (Kollidou K 90 ^® ) в 200 мл воды. Смесь влажного порошка просеивали, просушивали и снова просеивали, затем добавляли 100 л микрокристаллической целлюлозуы (Avicel ^® ) и 15 г гидрогенизированного растительного масла (Sterotex ^® ). Все это хорошо перемешивали и спрессовывали в таблетки, получалось 10000 таблеток, каждая из которых содержала 10 мг активного ингридиента.

Покрытие.

К раствору из 10 г метил целлюлозы (Methocel 60HG ^® ) в 75 мл денатурированного этанола добавляли раствор из 5 г этилцеллюлозы (Ethocel 22 cps ^® ) в 150 мл дихлорометана. Затем добавляли 75 мл дихлоромметана и 2,5 мл 1,2,3-пропантриола. 10 г полиэтилен гликоля расплавляли и растворяли в 75 мл дилохрметана. Полученный раствор добавлялся к первому раствору, затем добавляли 2,5 г магниевой соли октодекановой кислоты, 5 г поливинилпирролидона и 30 мл концентрированной цветной суспензии (Opaspray K-1-2109 ^® ) и всю смесь гомогенизировали. Содержимое таблетки покрывали полученной смесью в специальном аппарате.

Сравнительные физико-химические данные.

Гигроскопичность продукта исследовали следующим образом:
500 мг продукта хранили при температуре окружающей среды в дессикаторе над насыщенным раствором NaBr, относительная влажность (RH) составляла 60% Другие 500 мг продукта выдерживали при температуре окружающей среды над насыщенным раствором Li₂SO₄, относительная влажность составляла 85% Периодически определяли изменение веса и внешнего вида образцов. Через 5,5 дней образцы выдерживали в течение 2 дней при 25^оС и 45% RH. Затем определяли содержание влаги в образцах с помощью методики кулонометрического титрования.

После хранения при 60% RH и температуре окружающей среды в течение 4,5 дня цвет свободного основания изменился от желтого до темно-желтого.

Хранение при 85% RH и температуре окружающей среды в течение 0,66 дня привело к изменению цвета от желтого к коричневому. Далее соединение частично разжижалось и образовывало липкую, твердую массу.

Процентное изменение массы свободного основания ноберастина в процессе хранения при 60 и 85% RH при температуре окружающей среды приведено в табл. 3 в функции от времени
(1) Приращение массы в процентах после хранения в течение 5,5 дней при 60% RH или 85% RH и последующей выдержки в течение 2 дней при 25^оС / 45% RH.

Начальное содержание воды свободного основания ноберастина составляло 0,12 мас. как определено с помощью кулонометрического титрования. После хранения в течение 5,5 дней при 60% RH и последующей выдержки в течение 2 дней при 45% RH, содержание воды достигло 2,58 мас. После хранения в течение 5,5 дней при 85% RH и после этого в течение 2 дней при 45% RH, определенное содержание воды в образце составляло 10,78 мас.

Далее испытания свободного основания ноберастина на светостойкость проводили в соответствии со следующей процедурой:
Порцию основания ноберастина массой 150 кг взвешивали в стеклянном контейнере. Контейнер облучали в течение 7 дней в световом шкафу, освещенном 16 трубчатыми лампами холодного белого дневного света (Sylvania F20T 12/D Daylight 6500 K). Интенсивность освещения составляла 17000 люкс, а средняя температура в шкафу приблизительно 40^оС. Через 3 и 7 дней освещения 50 мг образца растворяли в 10 мл раствора метанол-вода (2:3 об/об) и анализировали с помощью высоко эффективной жидкостной хроматографии (HPLC).

HPLC является аналитической технологией, с помощью которой растворенные вещества разделяют в результате динамического дифференцированного процесса миграции в системе, состоящей из стационарной фазы столба и подвижной мобильной фазы, известной как "элюент". Технология столба основана на применении столбов, имеющих небольшие отверстия [внутренним диаметром (1Д) 2-5 мм] и малых частиц (3-10 мкм) наполнителей, которые позволяют обеспечить быстрое равновесие между подвижной и стационарной фазами. Разделение различных составляющих образца получается распределением соединения между стационарной и жидкой фазой, указанное распределение является специфическим для каждого соединения. В этом случае соединение более или менее "тормозится" в своем течение через систему в результате взаимодействия с материалом столба, так что соединение выходит отделенным от других растворенных веществ извлеченных раньше или позже.

После отделения различных компонентов образца проводится измерение УФ-спектральной поглощательной способности выделенного раствора за определенный период времени.

Составляющие смеси могут быть индентифицированы по их относительному времени удержания (RRT), которое измеряется временем прохождения через столб отнесенным к времени удержания эталонного соединения. RRT определяют из формулы
RRT где t_i время, измеренное от момента впрыска до пика максимума соединения i в хроматограмме;
t_ref время, измеренное от момента впрыска до пика максимума эталонного соединения (здесь ноберастина), определенное с помощью того же столба и при той же температуре.

Время, за которое соединение отделяется из столба зависит, помимо других факторов, от типа и концентрации используемого элюента. В случае сложных смесей компромисс между удовлетворительным разделением составляющих и разумным временем анализа достигается с помощью использования "градиента отделения". Это означает, что композиция элюента изменяется в функции от времени. В этом случае использовали линейный градиент, что означает, что композиция элюента определяется в различные моменты времени и между этими моментами изменение композиции элюента носит линейный характер.

Количественное определение соединений, представленных в образце выполняется с помощью внешнего калибрования. Анализируют выделенный из образца раствор, так же эталонный раствор, содержащий известные количества исследуемых соединений.

Относительная концентрация в мас/мас (свободное основание) каждого расчитывается с помощью следующей формулы:
C_i100 где
a_is область пика соединения i в образце раствора
a_ir область пика соединения i в эталонном растворе
C_ir концентрация (в мг/мл) соединения i в эталонном растворе
C_as концентрация (в мг/мл) аналита ноберастина в образце раствора
f_i (принимается во внимание только в том случае, если соединение i является солью) отношению молекулярной массы (MW) соли к молекулярной массе основания

Условия эксперимента
Система 1.

Столб: 12,5 см Super spher RP Select-B (4 мкм)
Определение: УФ при 220 нм
Скорость потока: 1,5 мл/мин
Объем впрыска: 10 мкл
Температура столба и растворителя: окружающая
Элюенты:
A: 0,75% ацетата аммония в воде
B: ацетонитрил
С: тетрагидрофуран
Вид отделения: линейный градиент. Данные приведены в табл. 4.

Результаты испытаний основания ноберастина, описанные выше кратко изложены в табл. 5, в которой относительная концентрация (%) каждого продукта, которая определялась при концентрации ≥ 0,1% показана в сравнении с соответствующим RRT ноберастина, после 3 и 7 дней освещения образца.

Из результатов приведенных испытаний можно сделать следующщий вывод.

Свободное основание ноберастина гигроскопично, что препятствует образованию стабильной безводной формы. Кроме того, указанное основание светочувствительно и сильно разрушается при освещении.

В виду ограниченной физико-химической стабильности свободного основания ноберастина стала очевидной необходимость другой более стабильной формы соли ноберастина.

В конце 1986 г были синтезированы (Z)-2-бутендиоат (1:2) или дималеатная соль, дигидрохлоридполугидратная соль и динитратная соль ноберастина.

Гигроскопические свойства указанных солей ноберастина исследовали в процессе испытаний как описано выше.

В течение всего эксперимента при 60% RH и температуре окружающей среды цвет трех форм солей ноберастина оставался неизменным.

После выдержки в течение 0,66 дней при 85% RH и температуре окружающей среды цвет дигидрохлоридполугидратной соли изменился от желтого до темножелтого. Цвет других солей остался неизменным.

Процентное изменение массы каждой описанной соли ноберастина в процессе хранения при 60% RH и 85% RH и температуре окружающей среды приведено в табл. 6 в функции от времени.

(1) Приращение массы в процентах после хранения в течение 5,5 дней при 60% RH или 85% RH с последующей дополнительной выдержкой в течение 2 дней при 25^о/45% RH.

Начальное содержание воды указанной формы соли (мас.) и содержание воды (мас.), определенное кулонометрически после хранения в течение 5,5 дней при 60% RH или 85% RH и последующей выдержки в течение 2 дней при 25^о/45% RH, показано в табл. 7.

Из результатов, приведенных выше, очевидно, что дигидрохлоридполугидратная соль гигроскопична. Кроме того было установлено, что указанная соль хорошо растворима (>100 мг/мл) в водных растворах. Высокая растворимость указанной соли в сочетании с сильной тенденцией к поглощению влаги делает эту соль непригодной для использования в виде таблеток, поскольку некоторые лекарства будут растворяться в своей собственной адсорбированной пленке влаги и сильная кислотная среда может увеличить разрушение имеющегося основания. С другой стороны, на динитратную соль вода оказывает не значительное воздействие. Однако указанная соль также не пригодна для использования в качестве фармацевтического продукта, поскольку в суровых кислотных условиях формирования динитратной соли, молекула распадается на N-(4-пиперидинил)-3Н-имидазо [4,5-b] пиридин-2-амин:
H-N- - NNHHNO₃
Быстрое разрушение ноберастина в кислых условиях, как описано выше, показано ниже.

Дималеатная соль гигроскопична только немного и в то время указанная соль оказалась наилучшей при выборе из доступных форм ноберастина.

Однако по мере продолжения испытаний на стабильность наблюдали постепенное разрушение дималеатной соли и попутно увели чение количества и числа разрушенных соединений. Эта проблема дополнительно усугублялась в требуемых условиях окружающей среды, например, световых, тепловых, кислотных и щелочных.

Поскольку дималеатная соль оказалась не практичной, был продолжен поиск формы соли, характеризующейся стабильностью физико-химических свойств в течение длительного срока хранения.

В августе 1989 г было впервые синтезировано соединение 2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоксилат /1:1/ или моноцитратная соль ноберастина и допущена к серийным испытаниям на стабильность. В следующих параграфах приведены результаты сравнительных испытаний дималеатной соли и моноцитратной соли.

Три партии моноцитратной соли анализировали с помощью HPLC непосредственно после синтеза и снова через 4 месяца после хранения в условиях окружающей среды. Относительное количество ноберастина, определенное для каждой партии, приведено в табл. 8.

Подобный HPLC анализ дималеатной соли обнаружил присутствие 2 основных (>0,1%) продуктов распада, которое имело место непосредственно после синтеза соли. С помощью спектроскопического анализа и сравнения относительного времени удержания было установлено, что продукты распада имеют следующую структуру:
(DC 1) H-N- NH_'-
(DC 2) H-N- NH_'-
В табл. 9 приведены относительные количества продуктов распада для двух партий дималеата ноберастина, определенные в различные моменты времени:
В отличие от моноцитратной соли дималеатная соль ноберастина распадается сильно и этот распад увеличивается при хранении.

Анализ с помощью HPLC, на который имеется ссылка выше, моноцитратной соли и дималеатной соли через 9,6 и 12,7 месцев хранения выполняли в следующих условиях эксперимента:
Система 2.

Столб: 10 см Hypersil ODS (3 мкм)
Определение: УФ при 290 нм
Скорость потока: 2 мл/мин
Объем впрыска: 10 мкл
Температура столба и растворителя: окружающая
Элюенты: A: 0,5% NH₄H₂PO₄ в воде
B: ацетонитрил
С: тетрагидрофуран
Вид отделения: линейный градиент. Данные приведены в табл. 10.

Дималеат ноберастин непосредственно после синтеза (время 0 месяцев) анализировали с помощью HPLC в следующих условиях эксперимента:
Система 3.

Столб: 10 см Hypersil ODS (3 мкм)
Определение: КФ при 300 нм
Скорость потока: 2 мл/мин
Объем впрыска: 10 мкл
Температура столба и растворителя: Окружающая
Элюенты: A: 10% (NH₄)₂ CO₃ в воде
B: ацетонитрил
С: тетрагидрофуран
Вид отделения: линейный градиент. Данные приведены в табл. 11.

Гигроскопичность моноцитратной соли исследовали с помощью процедуры, подобной той, которая описана выше. В дополнении к хранению образца при 60% RH и 85% RH, другой образец моноцитратной соли держали при 95% RH в дессикаторе над насыщенным раствором K₂SO₄. После хранения в течение 13 дней при 60% RH; 85% RH и 95% RH образцы выдерживали в течение одного дня при 22,5^оС и 47% RH.

Приращение массы в процентах в процессе хранения при 60% RH, 85% RH и 95% RH при температуре окружающей среды в зависимости от времени приведено в табл. 12.

(1) Приращение массы в процентах после хранения в течение 13 дней при 60% RH, 85% RH или 95% RH с последующей дополнительной выдержкой в течение одного дня при 22,5^оС/45% RH.

Начальное содержание воды в продукте составляло 0,39% как было определено кулонометрически.

Для моноцитратной соли определенные величины содержания воды после хранения в течение 13 дней после 60% RH, 85% RH и 95% RH с последующей выдержкой в течение одного дня при 22,5^оС/47% RH были следующими:
60% RH 1,41%
85% RH 1,41%
95% RH 1,43%
Как дималеатная соль ноберастина, так и моноцитратная соль ноберастина были допущены к ускоренным испытаниям на стабильность по следующим режимам:
Период хранения до 12 мес при комнатной температуре (RT) и 40-65% RH.

Период хранения до трех месяцев при 40^оС и 80% RH.

Период хранения до трех месяцев при 50^оС и 5-35% RH.

Период хранения до трех месяцев, в течение которого продукт подвергался прямому воздействию дневного света при температуре окружающей среды и RН.

Периодически образцы, содержащиеся в различных условиях хранения, анализировали с помощью HPLC. Для дималеатной соли HPLC выполняли в следующих условиях эксперимента:
Система 4
Столб: 10 см Hypersil ODS (3 мкм)
Определение: УФ при 290 нм
Скорость потока: 2 мл/мин
Объем впрыска: 10 мкл
Температура столба и растворителя: окружающая
Элюенты: A: 0,5% NH₄H₂PO₄ в воде
B: ацетонитрил
С: тетрагидрофуран
Вид отделения: линейный градиент. Данные приведены в табл. 13.

HPLC моноцитратной соли проводили в следующих условиях эксперимента:
Система 5.

Столб: 10 см Hypersil c. 18 BDS (3 мкм)
Определение: УФ при 220 нм
Скорость потока: 1,5 мл/мин
Объем вспрыска:10 мкл
Температура столба и растворителя: окружающая
Элюенты: A; 0,75% ацетата аммония в воде
B: ацетонитрил
С: тетрагидрофуран
Вид отделения: линейный градиент. Данные приведены в табл. 14.

Для моноцитратной соли распада не наблюдалось на всех партиях в течение всего исследуемого периода времени. Однако дималеатная соль показала значительный распад во всех условиях хранения и распад со временем увеличивался. Основными продуктами распада были обнаружены альдегид (DС1) и гидроперекись (DC 2) соединений, описанный выше. В следующей Таблице кратко изложены количества прдуктов распада DC1 и DC2 (в процентах) для различных условий хранения за различные периоды времени. Данные приведены в табл. 15.

Кроме того, стабильность в растворе дималеатной соли и моноцитратной соли ноберастина испытывали с помощью следующей процедуры:
50 мг каждой соли помещали, соответственно, в 5 мл воды, 5 мл 0,1 н. HCl и в 5 мл NaOH. Смеси хранили при температуре 100^оС и анализировали через определенные промежутки времени с помощью HPLC^. HPLC для дималеатной соли выполняли при условиях системы 3, в то время как HPLC для моноцитратной соли при условиях системы 1.

Количества (в процентах) продуктов распада дималеатной соли и моноцитратной соли, определенные при концентрации ≥0,1% для различных условий хранения, описанных выше, кратко показаны ниже в функции от времени. Продукты распада были индентифицированы с помощью масспектрометрии. Данные приведены в табл. 16.

Структуры различных соединений распада (DC) являются следующими
H-N- NH_'-
Из табл. приведенных выше, показывающих распад дималеатной соли ноберастина и моноцитратной соли ноберастина в водной среде ясно, что:
Обе соли характеризуются распадом во всех трех средах.

Структура продуктов распада различна для обеих солей.

Распад имеет место почти немедленно для дималеатной соли и моноцитратной соли в 0,1 н. HCl и воде.

Моноцитратная соль значительно более стабильна в 1 н. NaOH, чем дималеатная соль: распад моноцитратной соли начинается через 8 ч, в то время как дималеат разрушается почти сразу.

Стабильность дималеатной соли и моноцитратной соли в окислительных условиях испытывали в соответствии со следующей процедурой:
50 мг каждой соли добавляли в 5 мл воды и 0,25 мл 30%-ного раствора перекиси водорода и хранили при 60^оС. Эталонные образцы готовили подобным образом, без добавления перекиси водорода.

Периодически образцы анализировали с помощью HPLC. Для дималеатной соли HPLC проводили в условиях системы 3. HPLC для моноцитратной соли выполняли в условиях системы 1.

Количества (в процентах) продуктов распада дималеатной соли и моноцитратной соли, определенные при концентрациях 0,1% приведены в табл. 17 в функции от времени.

Структура соединения распада DC 10 была идентифицирована с помощью масспектрометрии как:
H-NNH
Из таблиц, приведенных выше, в которых описаны результаты исследования распада дималеатной соли и моноцитратной соли в окислительных условиях, очевидно, что распад дималеатной соли более интенсивен, он приводит к образованию трех соединений распада через один час хранения. В противоположность этому распад моноцитратной соли менее интенсивен, т.е. только одно соединение распада образуется через 1 ч хранения.

Испытания на стабильность дималеатной соли и моноцитратной соли в условиях искусственного освещения проводили с помощью процедуры, описанной выше. HPLC моноцитратной соли проводили в условиях системы 1, а дималеатной соли в условиях системы 3, УФ детектирование последней осуществляли при длине волны 252 нм.

У моноцитратной соли не было обнаружено распада в течение всего эксперимента.

С другой стороны, дималеат проявил увеличивающийся распад в течение хода эксперимента. Соответствующие количества продуктов распада в процентах, определенные при концентрациях≥ 0,1% приведены в табл. 18.

Из сказанного очевидно, что моноцитратная соль обладает более высокой физико-химической стабильностью по сравнению со свободным основанием, дигидрохлоридполугидратной, динитратной и дималеатной солью ноберастина. Эта новая соль не светочувствительна, стабильна в условиях ускоренных испытаний и не подвержена воздействию влаги. Вследствие улучшенных физико-химических свойств моноцитратная соль обладает преимуществами перед ранее синтезированными солями.

Использование: в химии гетероциклических веществ, в частности в способе получения 3-/ (5-метил-2 -фуранил) метил/-N-(4-пиперидинил)-3Н-имидазо/ 4,5-b/пиридин-2-амин-2- гидрокси-1,2,3- пропантрикарбоксилата, обладающего противоаллергическими свойствами. Сущность изобретения: продукт - 3-/(5-метил-2-фуранил) метил/-N-(4-пиперидинил)-3Н- имидазо/4,5-b/пиридин- 2-амин-2-гидрокси-1,2,3- пропантрикарбоксилат с т. пл. 192°С, активность в дозе 0,01 10 мг/кг массы тела, обладает более высокой стабильностью к свету и влаге, чем дималеатная соль ноберастина. Реагент 1: ноберастин. Реагент 2: лимонная кислота. Условия реакции: нагревание реагентов в среде растворителя с последующим охлаждением реакционной массы, отделением целевого кристаллического продукта и в случае необходимости кристаллизацией его. 3 с. п. ф-лы, 18 табл.

1. 3- [(5-Метил-2-фуранил)метил] -N-(4-пиперидинил)-3н-имидазо(4,5-b) пиридин-2-амин-2-гидрокси-1,2,3 -пропантрикарбоксилат общей формулы

обладающий противоаллергической активностью. 2. Способ получения соединения по п.1, отличающийся тем, что 3-[(5-метил-2-фуранил)метил] -N-(4-пиперидинил) -3Н-имидазо(4,5-b)пиридин-2-амин растворяют в растворителе с последующим нагреванием раствора до температуры флегмы, добавлением достаточного количества лимонной кислоты, охлаждением реакционной смеси и отделением кристаллического целевого продукта и в случае необходимости перекристаллизации его. 3. Антиаллергическая композиция, содержащая соль 3-[(5-метил-2-фуранил) -метил] -N-(4-пиперидинил)-3Н-имидазо-(4,5-b)пиридин-2-амино и инертный носитель, отличающаяся тем, что она содержит 3-[(5-метил-2-фуранил]-N-( 4-пиперидинил)-3Н-имидазо(4,5-b) пиридин-2-амин-2-гидрокси-1,2,3- пропантрикарбоксилат (1:1) в эффективном количестве.