СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ РАСТВОРОВ СТРЕПТОЛИАЗЫ Российский патент 1996 года по МПК A61K38/46 A61K38/43 

Изобретение относится к области энзимологии, конкретно, к способу стабилизации растворов стрептолиазы препарата, содержащего фермент стрептокиназу, выделяемый из культуры гемолитического стрептококка группы С, и используемого в медицине для лизиса тромбов артериальных и венозных тромбозах, тромбоэмболии легких, тромбофлебитах, инфаркте миокарда и т.п.

Известно, что стрептокиназа в водных растворах теряет свою активность в течение нескольких часов.

Известен способ стабилизации растворов этого фермента, основанный на добавлении к ним рассчитанных количеств лимонной кислоты и N-(2-меркаптопропионил)-глицина. Однако длительность хранения таких растворов не превышает 72 ч при 20^oС.

Наиболее близким к заявленному, принятым за прототип, является способ стабилизации растворов стрептолиазы, заключающийся в растворении фермента в водной среде в присутствии окислителей, с последующим добавлением полимерных полисахаридов (декстран или хондроитин сульфат) и основных аминокислот, перемешивании смеси и стерилизующей фильтрацией раствора.

Недостаток известного способа заключается в кратковременном хранении растворов стрептолиазы при 20-25^oC не более 96 ч.

Изобретение решает задачу повышения устойчивости растворов стрептолиазы при хранении.

Указанный результат достигается тем, что в способе стабилизации растворов стрептолиазы, включающем растворение стрептолиазы, добавление к раствору полимерного полисахарида, перемешивание смеси и стерилизующую фильтрацию, в качестве растворителя используют 2-6%-ные водные растворы глюкозы, а в качестве полимерного полисахарида гиалуроновую кислоту, которую берут в количестве 1-2 мг на 100000 ЕД стрептолиазы, при этом в раствор вводят аскорбиновую кислоту в количестве 20-30 мг на 100 мл раствора.

Получаемый препарат стрептолиазы не теряет активности в течение 6 месяцев при 20-25^oC и в течение более 1 года при 4-6^oС.

Предлагаемые стадии процесса стабилизации растворов стрептолиазы являются логически обоснованными. Использование в качестве растворителя 2-6%-ных водных растворов глюкозы позволяет повысить энергетическую ценность раствора стрептолиазы и процессы обмена веществ, усилить сократительную деятельность сердечной мышцы и увеличить диурез, а добавление аскорбиновой кислоты играет важную роль в регулировании окислительно-восстановительных процессов и в нормализации проницаемости капилляров. Кроме того, являясь антиоксидантом, аскорбиновая кислота препятствует развитию свободно-радикальных процессов и образованию перекисей липидов.

Особое значение имеет введение в раствор фермента в качестве полимерного полисахарида гиалуроновой кислоты, поскольку она, в отличие от применяемых в известном способе декстрина или хондроитин сульфата, обладает более выраженной реакционной способностью и более эффективно защищает молекулу фермента от разрушающего действия факторов внешней среды. Однако для обеспечения эффекта стабилизации растворов стрептолиазы необходимо строгое соблюдение количественных соотношений фермента и других перечисленных ингредиентов, поскольку в противном случае стабилизации препарата в полной мере не достигается.

Изобретение поясняется следующими примерами его осуществления.

П р и м е р 1.

250 000 ЕД порошка стрептолиазы (использовали отечественный препарат стрептолиазы с активностью 250 000 ЕД в ампуле) растворяют в 50 мл 2%-ного раствора глюкозы, добавляют 2,5 мг гиалуроновой кислоты (использовали отечественный препарат гиалуроновой кислоты, получаемый из петушиных гребней по ТУ 9185-003-17204830-93) (1 мг на 100 000 ЕД фермента) и 10 мг аскорбиновой кислоты (20 мг на 100 мл раствора), перемешивают до растворения ингредиентов, раствор стерилизуют фильтрованием через мембраны с диаметром пор 0,22 мкм и ампулируют. Полученный раствор не теряет своей активности при 20^oС в течение 6 месяцев, а при 6^oС в течение 1 года.

П р и м е р 2.

250 000 ЕД порошка стрептолиазы растворяют в 50 мл 4%-ного раствора глюкозы, добавляют 3,75 мг гиалуроновой кислоты (1,5 мг на 100 000 ЕД) и 12,5 мг аскорбиновой кислоты (25 мг на 100 мл раствора), перемешивают до растворения ингредиентов, раствор стерилизуют фильтрованием через мембраны с диаметром пор 0,22 мкм и ампулируют. Полученный раствор не теряет своей активности при 20^oC в течении 6 месяцев, а при 6^o в течение 1 года.

П р и м е р 3.

250 000 ЕД порошка стрептолиазы растворяют в 50 мл 6%-ного раствора глюкозы, добавляют 5 мг гиалуроновой кислоты ( 2 мг на 100000 ЕД) и 15 мг аскорбиновой кислоты (3О мг на 100 мл раствора) и далее поступают как в примере 1. Полученный раствор не теряет своей активности при 20^oС в течение 6 месяцев, а при 6^oС- в течение 1 года;
Сопоставительный анализ технико-экономических показателей заявляемого объекта и известного способа представлен в таблице.

Т.о. растворы стрептолиазы, полученные по заявленному способу, сохраняют свою активность в течение 6 месяцев при комнатной температуре и более 1 года
при 4-6^oС, в то время как растворы этого препарата, получаемые по известному способу, могут храниться лишь в течение 48-96 ч и 7-10 суток соответственно при 20-25^oС и 4-6^oС. ТТТ1

Использование: энзимология, конкретно, для стабилизации растворов стрептолиазы - препарата, содержащего фермент стрептокиназу, выделенный из культуры гемолитического стрептококка группы С и используемого в медицине для лизиса тромбов при артериальных и венозных тромбозах, тромбоэмболии легких, тромбофлебитах, инфаркте миокарда и т.п. Сущность изобретения: с целью повышения устойчивости растворов стрептолиазы при хранении растворяют стрептолиазу, в 2-6%-ном водном растворе глюкозы и добавляют полимерный полисахарид - гиалуроновую кислоту, которую берут в количестве 1-2 мг на 100 000 ЕД стрептолиазы, при этом в раствор вводят аскорбиновую кислоту в количестве 20-30 мг на 100 мл раствора. 1 табл.

Способ стабилизации растворов стрептолиазы, включающий растворение стрептолиазы, добавление к раствору полимерного полисахарида, перемешивание смеси и стерилизующую фильтрацию, отличающийся тем, что в качестве растворителя используют 2-6%-ный водный раствор глюкозы, а в качестве полимерного полисахарида гиалуроновую кислоту, которую берут в количестве 1-2 мг на 100000 ЕД стрептолиазы, при этом в раствор вводят аскорбиновую кислоту в количестве 20-30 мг на 100 мл раствора.