Способ определения бактерицидной резистентности лейкоцитов при лейкозе Советский патент 1992 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционной иммунологии. Цель - повышение точности определения бактерицидной резистентное™ лейкоцитов при лейкозе.

Способ осуществляют следующим образом. Определяют содержание катионных белков в мазках крови по методике М.Г.Шу- бича. Высушенные свежеприготовленные мазки фиксируют 60 с 5%-ным раствором , сульфосалициловой кислоты, промывают дистиллированной водой, высушивают, окрашивают 2 минО,1%-ным раствором бром- фенолового синего в 0,05 М боратном буфере (рН 8,2), промывают в трех сменах этого же буфера по 2 мин в каждой смене. Мазки тщательно промывают водой, высушивают и микроскопируют. Активность катионных белков выражают в условных единицах (у.е.) на основании вычисления среднего гистохимического коэффициента (СГК) по формуле Астальди, Верга: ЗА+2Б -MB + ОГ

СГК100

где цифры 3,2,1,0 - степень интенсивности окраски (А - гранулы занимают всю цитоплазму клетки, Б - гранулы занимают 3/4 части цитоплазмы, В -единичные гранулы в цитоплазме, 0 - отсутствие гранул).

Способность нейтрофилов восстанавливать нитросиний тетразолий (НСТ) определяют по методике М.Г.Шубича и В.Г.Медниковой. В силиконированные пробирки добавляют по 0,1 мл венозной гепа- ринизированной крови больных и по 0,1 мл 2%-ного раствора НСТ в 0,2 М фосфатном буфере. Пробирки помещают на 30 мин в термостат при 37°С. После 15-минутного охлаждения при комнатной температуре из верхней части делают мазки, высушивают их и фиксируют в абсолютном метаноле. Мазки окрашивают по Романовскому и микроскопируют с масляной иммерсией, определяя число формазанположительных клеток на 100 нейтрофилов. Для оценки интенсивности НСТ-реакции рассчитывают средний гистохимический коэффициент.

со

С

4

ГО Ю Ю

Для расчета бактерицидной активности нейтрофила (БАМ) применили формулу:

Л

JtL:

юо

где Л количество лейкоцитов (10 ) л;

И - количество нейтрофилов в лейкоцитарной формуле, %;

СГК - средний гистохимический коэффициент активности катионных белков;

СГК2 - средний гистохимический коэффициент интенсивности НСТ-реакции.

Пример 1. Больной С-ко, 1954 г. рождения, поступил в гематологическое отделение по поводу хронического миелолей- козз без клинических и лабораторных признаков инфекции.

При обследовании обнаружены следующие лабораторные и цитохимические показатели: количество лейкоцитов 37,0-109 (л) норма 7,4+0,01-109 (л), сегментоядерных нейтрофилов в формуле 11% (норма 64,9+0,2%). Интенсивность (СГК) НСТ реакции 0,06 (у здоровых лиц 0,218+0,01 усл.ед.), для катионных белков 0,84 (норма - 1,825± ± 0,029 усл.ед.), Таким образом, у бопьного отмечены значительный лейкоцитоз, ней- тропения и снижение интенсивности цитохимических реакций. При подсчете интегральной бактерицидной активности получены значения 3,66 у.е., т.е. ниже границы нормальных значений (6,98 ± 0,18, колебания 4,55 - 10,1 у.е.). Следовательно, у больного выявлено значительное (в среднем на 47,5%) снижение бактерицидное™ нейтрофилов по сравнению с данными здоровых лиц, следствием чего явилось присоединение у больного бактериальной пневмонии.

П р и м е р 2. Больная К-к, 19J35 г, рожд., поступила в гематологическое отделение по поводу истинной полицитемии. Получены следующие лабораторные и цитохимические значения: содержание лейкоцитов 10,Ох х 109/л, нейтрофилов 86%, интенсивность НСТ-реакции 0,42/, катионных белков 1,3 усл.ед.

Таким образом, у больной выявлены лейкоцитоз, нейтрофилез, повышение интенсивности НСТ-реакции, тогда как интенсивность реакции на катионные белки оказалась ниже, чем у здоровых лиц, Используя метод-прототип, можно было сделать заключение о снижении бактерицидности нейтрофилов, однако при подсчете интегральной бактерицидности по предложенному нами способу получены значения бактерицидности (14,79 усл.ед.), значительно превышающие нормальные.

П р и м е р 3. Больная Б-ва, 1958 г.рожд.,

поступила в гематологическое отделение по поводу лекарственного агранулоцитоза.

Получены следующие лабораторные и цитохимические данные: содержание лей0 коцитов 13,5 109/л, содержание нейтрофилов-36%, интенсивность НСТ-реакции 0,61 усл.ед., интенсивность реакции на катионные белки 1,72. Таким образом, на фоне лейкоцитоза и нейтропении обнаружено

5 снижение интенсивности НСТ-реакции при нормальных значениях СГК для катионных белков. На основании полученных данных можно было сделать следующие выводы о состоянии бактерицидности нейтрофилов:

0 по данным НСТ-реакции - о значительном снижении ее, по данным реакции на катионные белки - сохранной бактерицидности. При пересчете интегральной бактерицидной активности получены нормальные зна5 чеиия (5,92 усл.ед,).

Способ позволяет более точно определить наличие снижения бактерицидной активности лейкоцитов, что позволяет предотвратить осложнение заболевания.

0

Формула изобретения Способ определения бактерицидной резистентное™ лейкоцитов при лейкозе, путем их исследования, отличающий5 с я тем, что, с целью повышения точности способа, в лейкоцитах-определяют интегральную цитохимическую активность, для чего рассчитывают содержание катионных белков и активность оксидаз по формуле

0

- Л Н ( КБ + АО ) 100

ЦА

где ЦА - интегральная цитохимическая ак- тивность;

Л - общее содержание лейкоцитов, 109/л;

Н - содержание нейтрофилов. %; КБ - средний гистохимический козффи- циент содержания катионных белков;

АО - средний гистохимический коэффициент активности оксидаз;

- 100 - количество просмотренных клеток,

и при интегральной цитохимической активности 4,5 ед и ниже определяют слабую бактериальную резистентность.

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и инфекционной иммунологии. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что в лейкоцитах периферической крови определяют интегральную цитохимическую активность, для чего рассчитывают содержание катионных белков и активность оксидаз. И при интегральной цитохимической активности 4,5 ед. и ниже определяют слабую бактерицидную активность. Способ значительно повышает точность определения бактерицидной активности, что позволяет вовремя определить угрозу возникновения осложнения при лейкозе.