СПОСОБ ДЕКОНТАМИНАЦИИ ВИРУСНОГО СЫРЬЯ ОТ МИКОПЛАЗМ ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ ВИРУСВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА КУР Российский патент 1997 года по МПК G01N33/569 A61K39/265 

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу деконтаминации вирусного сырья от микоплазм при изготовлении вирусвакцины против инфекционного ларинготрахеита кур (ИЛТ), и может быть использовано в научных лабораториях и на биофабриках при работе с куриными эмбрионами.

Известны способы деконтаминации от микоплазм, от вирусов лейкоза птиц и других контаминатов, включающее прединкубационную термообработку куриных эмбрионов при различных температурах в процессе изготовления эмбрион-вирусвакцины против Ньюкаслской болезни птиц, инфекционного ларинготрахеита кур и инфекционного бронхита (М.Толстопятов, Ю.Фролов. Глубокий прединкубационный прогрев яиц. Ж. Птицеводство, N 1, 1976, стр.35-36; Е.С.Воронин, Контаминаты ветеринарных вирусных вакцин. М.Агропромиздат, 1986, стр. 60-62, 88-95).

Указанные способы включают использование сложного набора специального оборудования, многоэтапны и трудоемки, в процессе термообработки увеличивается отход эмбрионов в 2-3 раза и не обеспечивают полной деконтаминации от микоплазм.

Известен также способ прединкубационной деконтаминации куриных яиц и их эмбрионов от микоплазм парами формальдегида, включающий создание необходимой концентрации паров формальдегида, в специальной дезкамере за счет внесения в плоскую эмалированную ванну из расчета на 1 м³ 30 мл формалина, 10 мл водопроводной воды и 20 г калия марганцевокислого. Продолжительность обработки 15-20 мин. После обработки пары формальдегида удаляют через вентиляционные отверстия, а остатки нейтрализуют нашатырным спиртом, которого берут вдвое меньше израсходованного формалина и распыляют в камере посредством генератора аэрозолей или пульверизатором (Временная инструкция по изготовлению и контролю эмбрион-вирус-вакцины против инфекционного ларинготрахеита кур из клона НТ штамма ЦНИИПП, утвержденная ГУВ СССР 14 05. 1984 г).

Такая обработка куриных яиц и их эмбрионов, предназначенных для изготовления вирусвакцины против ИЛТ кур не обеспечивает полной деконтаминации от микоплазм и согласно требований "Инструкции" контаминированное вирусное сырье подлежит выбраковке и уничтожению. При обработке парами формальдегида обеззараживанию подвергается в основном поверхность яиц и куриных эмбрионов, что не обеспечивает полной стерилизации биосырья. Деконтаминация парами формальдегида не безопасна для работающих и требует специального оборудования, а это ведет к значительным экономическим затратам.

Предлагаемый способ деконтаминации устраняет вышеперечисленные недостатки.

Задача изобретения -разработка быстрого специфичного способа деконтаминации вирусного сырья от микоплазм.

Сущность предлагаемого способа заключается в использовании непосредственно вирусного сырья (хориоаллантоисные оболочки и экстраэмбриональную жидкость), собранного из куриных эмбрионов при изготовлении вакцины против ИЛТ и обработка тилазином или фармазином (1,0±0,1 г препарата на 1000±0,5 мл сырья), выдерживают 2±0,5 ч при температуре 4±2^oС, замораживают при минус 45±5^oС и лиофилизируют.

Осуществление способа.

В работе используют вирус ИЛТ клон "НТ" штамма "ЦНИИПП" (регистрационный N 61 в коллекции ВГНКИ ветпрепаратов) с биологической активностью 10^6,8 10^7,0 ЭИД 50/мл. Выращивание вируса проводят на 10-дневных куриных эмбрионах в течение 120 ч инкубирования при температуре 33,5^oС с последующим охлаждением при температуре 4^oС в течение 12 ч, сбор вирусного материала, его размол на коллоидной мельнице в течение 10-12 минут, центрифугирование при 750g в течение 10 мин, надосадок смешивают со стерильной лактозопептонной защитной средой в соотношении 2:1. Деконтаминацию вирусного сырья ИЛТ от микоплазм проводят путем внесения антибиотиков (тилазина или фармазина) в количестве 1 г препарата на 1000 мл сырья, тщательно перемешивают и оставляют для контакта сырья с препаратом при температуре 4^oС в течение 2 ч. Затем вирусное сырье фасуют во флаконы по 6 мл, замораживают при минус 50^oС, лиофилизируют, укупоривают и хранят в течение 12 месяцев при 4^oС (табл. 1) и используют при необходимости.

Из данных табл.1 видно, что при внесении антибиотиков (тилазина или фармазина) в биосырье с микоплазмами в концентрации 1:1000 и контакте в течение 2 ч проявляется их специфическое, бактерицидное действие на микоплазмы, последние погибают. Отсутствие роста микоплазмы, после деконтаминации, подтверждено высевом из образцов материала на специальные жидкие и плотные среды Эдварда в процессе хранения образцов в течение 12 месяцев при температуре 4^oС.

Проведенными исследованиями установлено, что деконтаминация вирусного сырья ИЛТ тилазином или фармазином в концентрации 1:1000 не влияет на биологическую и иммуногенную активность приготовленных образцов вакцины против ИЛТ кур в процессе хранения в течение 12 месяцев. Результаты исследований представлены в табл. 2.

Результаты исследований подтверждены актом комиссионных испытаний.

Предложенный способ прост в исполнении, доступен и является промышленно применимым.

Использование: к медицине, ветеринарии, биотехнологии, в частности к способу деконтаминации вирусного сырья от микоплазм при изготовлении вирусвакцины против инфекционного ларинготрахеита кур, и может быть использовано в научных лабораториях и на биофабриках при работе с куриными эмбрионами. Сущность изобретения: используют непосредственное вирусное сырье (хориаллантоисные оболочки и экстраэмбриональная жидкость) собранное из куриных эмбрионов при изготовлении вакцины против ИЛТкур, обработанное тилазином или фармазином (1,0±0,1 г препарата на 1000±0,5 мл сырья). Затем пробы выдерживают 2±0,5 ч при температуре 4±2^oС, замораживают при минус 45±5^oС и лиофилизируют. Технический результат: разработка быстрого специфичного способа деконтаминации вирусного сырья от микоплазм. 2 табл.

1 Способ деконтаминации вирусного сырья от микоплазм при изготовлении вирусвакцины против инфекционного ларинготрахеита кур, включающий обработку биологического материала антимикробным реагентом, отличающийся тем, что в качестве реагента используют тилазин или фармазин, обработке подвергают непосредственно вирусное сырье, при этом добавляют к нему реагент в количестве 1 <$E+-> 0,1 г на 10000 <$E+-> 0,5 мл сырья, тщательно перемешивают полученную смесь и выдерживают ее 2 0,5 ч при температуре 4 <$E+-> 2<198>С, затем замораживают при (-45) <$E+-> 5<198>С и лиофилизуют.