ЛИПОСОМНЫЙ СОСТАВ ДЛЯ КУПИРОВАНИЯ АСЕПТИЧЕСКОГО ВОСПАЛЕНИЯ Российский патент 1997 года по МПК A61K9/127 A61K31/685 A61K31/685 A61K31/575 A61K47/02 

Изобретение относится к медицине и может найти применение в лечении локальных воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, синовит, тендовагинит и др.

В настоящее время для лечения локальных острых асептических воспалений используются стероидные и нестероидные лекарственные препараты. И те, и другие применяются для системного лечения (перорально), например преднизолон или бруфен, но стероидные, такие гидрокортизон-ацетат, кеналог-20 и кеналог-40 не только для системного, но и для локального применения, например внутрисуставного.

Пероральное применение требует больших доз и длительных курсов лечения, часто требующих длительного нахождения в стационаре. Такое лечение сопровождается достаточно частыми и тяжелыми осложнениями, связанными прежде всего с супрессией иммунного ответа и нарушениями со стороны желудочно-кишечного тракта, характерных для стероидных препаратов.

Наиболее эффективным способом лечения локальных асептических воспалительных процессов, например острого ревматоидного артрита, является внутрисуставное введение глюкокортикоидов, таких как гидрокортизон-ацетат, кеналог-20 и кеналог-40.

Известен способ лечения острого ревматоидного артрита путем многократного (3 5-кратного) внутрисуставного введения больших доз глюкокоритикоидов. Например гидрокортизон-ацетат вводится в дозе 50 100 мг на инъекцию. Такие внутрисуставные инъекции травматичны, а дозы, необходимые для купирования воспалительного процесса, велики и составляют на курс 150 500 мг гидрокортизона и 60 120 для кеналога-20 и кеналога-40 соответственно. В связи с использованием таких высоких доз нередкими являются серьезные осложнения такого вида лечения, в частности гнойное воспаление околосуставных тканей, артропатии и др.

Известны единичные исследования, посвященные изучению эффективности липосомных форм гидрокортизона для пролонгации противовоспалительного действия глюкокортикоидов.

В основу таких исследований положено изучение липосом различного состава, содержащего гидрокортизон.

Известны экспериментальные исследования по изучению противовоспалительного эффекта липосом из различных смесей липидов, таких как дипальмитоилфосфатидилхолин (ДППС) и фосфатидная кислота (ФК), дистеароилфосфатидилхолин (ДСФХ) и ФК, димиристоилфосфатидилхолин (ДМФХ), ДСФХ и ФК [1 3]
Авторами отмечена возможность пролонгации противовоспалительного эффекта липосом, содержащих ДППС, ФК и гидрокортизон, однако эта пролонгация невелика, около 2 3 суток в сравнении с обычно используемым микрокристаллическим гидрокортизоном (ГК) [1]
Изобретение касается пролонгирования противовоспалительного действия глюкокортикоидов за счет включения их в мембрану липосом.

Ранее нами проведено экспериментальное исследование по изучению зависимости противовоспалительного эффекта ГК в составе температурно чувствительных липосом. С этой целью нами был получен ряд липосомных форм ГК-ацетата из фосфолипидов с различной температурой фазового перехода (от -10^oC до 58^oC) [4]
Изучение противовоспалительного действия различных типов липосом с ГК на модели асептического артрита у кроликов показало, что наибольшим эффектом (до 5 суток после одноразового внутрисуставного введения препарата) обладают везикулы, мембрана которых состоит из ДППС и холестерина, причем в дозе, в 10 раз меньшей, чем обычно применяющаяся форма ГК-ацетата, дающая кратковременный противовоспалительный эффект на этой же модели.

Этот препарат имеет следующий состав, взятых нами в качестве прототипа, мг:
ДППС 0,75
Холестерин 0,15
Гидрокортизон-ацетат 0,5
в 1 мл физиологического раствора.

Такие липосомы использовались нами свежеприготовленными и, как показано в работе, купировали воспалительный процесса после однократного внутрисуставного введения на 5 суток с последующим рецидивом воспаления.

Технический результат изобретения состоит в пролонгировании противовоспалительного эффекта глюкокортикоидов и повышении стабильности препаратов.

Этот результат достигается тем, что нами разработан состав для купирования асептического воспаления, состоящий из ДППС, холестерина и гидрокортизона, в котором согласно изобретению указанные ингредиенты содержатся в следующем соотношении, мас.

ДППС 1,6 2,0
Холестерин 0,2 0,25
Гидрокортизоно-ацетат 1,8 2,2
Физиологический раствор Остальное
К созданию такого состава побудило нас выполненное нами ранее исследование (прототип), в котором обнаружена возможность пролонгирования противовоспалительного эффекта гидрокортизона, заключенного в липосомы, состоящие из ДППС и холестерина.

В основу создания нового препарата, пригодного для клинического использования, мы положили известную закономерность влияния холестерина на температуру фазового перехода фосфолипидов. Причем для достижения эффекта необходим широкий интервал фазового перехода структуры мембраны липосом из жидко-кристаллического состояния в гелеобразное в интервале температур от 37 до 47^oC, перекрывающий весь диапазон температур воспалительного процесса, присущий найденному нами опытным путем заявляемого состава липосом.

Это действие предлагаемого нами состава подтверждено нами в экспериментах на животных и клиническими испытаниями у 20 больных с острой атакой ревматоидного артрита.

Такой состав липосом после однократной внутрисуставной инъекции больным в дозе 0,5 1,0 мл на инъекцию (10 20 мг гидрокортизона, что в 5 раз ниже обычно применяемой мелкокристаллической формы ГК) полностью в течение недели купировал все симптомы острого асептического воспаления в суставе и не требовал повторных инъекций.

Наблюдаемая ремиссия у больных составляла от 1/2 года до 2 лет в зависимости лишь от активации ревматического процесса.

Препараты, как нами показано, стабильны в течение 1 года.

Липосомы готовили следующим образом.

ДППС, холестерин и гидрофобную форму глюкокортикоида, например гидрокортизон-ацетат, вносили в необходимых количествах в хлороформе (или в других подходящих органических растворителях) в круглодонную колбу и органический растворитель удаляли на ротационном испарителе для получения тонкой пленки липидов на стенках колбы. Далее колбу помещали в эксикатор и под вакуумом при остаточном давлении 0,5 мм рт. ст. выдерживали в течение 2 ч для удаления следов органических растворителей. В колбу вносили теплый (37^oC) физиологический раствор и пленку эмульгировали в течение 30 мин при 60^oC до получения равномерной эмульсии. Колбу оставляли при той же температуре на 2 ч и далее обрабатывали эмульсию ультразвуком в течение 1 2 мин. Расфасовывали по 2 мл во флаконе и укупоривали в атмосфере аргона резиновыми пробками и завальцовывали алюминиевыми колпачками. Срок хранения составил 1 год при 4^oC.

Пример 1. Состав, г:
ДППС 1,6
ГК-ацетат 1,8
ХС 0,2
Физиологический раствор До 100 мл
В круглодонную колбу вносили 1,6 г ДППС; 0,2 г дважды перекристаллизованного холестерина и 1,8 г гидрокортизона-ацетата.

Хлороформ отгоняли на ротационном испарителе при температуре 37^oC и колбу заполоняли аргоном. Далее колбу переносили в экстрактор и выдерживали ее в вакууме при остаточном давлении 0,5 мм. рт. ст. в течение 2 ч. В колбу добавляли 95 мл теплого (37^oC) физиологического раствора (0,9%-ный раствор хлористого натрия) и пленку липидов и гидрокортизоном эмульгировали при 60^oC в течение 30 60 мин до получения равномерной эмульсии. Полученную эмульсию многослойных липосом (100 мл) обрабатывали ультразвуком при 22 кГц в течение 2 мин для получения гомогенной эмульсии. Эмульсию фильтровали последовательно через предфильтр, целлюлозно-ацетатные или капроновые фильтры с размером пор 1,0 и 0,6 мкм и через стерилизующий фильтр с размером пор 0,2 мкм. Эмульсию разливали по флаконам по 2 мл в атмосфере аргона в стерильных условиях и флаконы укупоривали резиновыми пробками, закрывали алюминиевыми колпачками и завальцовывали.

Пример 2. Состав, г:
ДППС 1,8
ГК-ацетат 2,0
ХС 0,23
Физиологический раствор До 100 мл
В круглодонную колбу вносили 1,8 г ДППС, 0,23 г дважды перекристаллизованного холестерина и 2,0 г гидрокортизона-ацетата. Хлороформ удаляли на ротационном испарителе и далее поступали также, как в примере 1.

Пример 3. Состав, г:
ДППС 2,0
ГК-ацетат 2,2
ХС 0,25
Физиологический раствор До 100 мл
В круглодонную колбу вносили 2,0 г ДППС, 0,25 г дважды перекристаллизованного холестерина и 2,2 г гидрокортизона-ацетата. Хлороформ удаляли на ротационном испарителе и далее поступали также, как в примере 1.

Для клинического изучения был использован препарат, приготовленный, как указано в примере 2.

Выписка из истории болезни (наблюдение 1).

Больная С. (N ист. бол. 5330/330) 1964 г. рожд. поступила в отделение терапии 29.04.86. Больна с 1975 г. С 1982 г. отмечает частые обострения острых болей в правом коленном суставе. Неоднократно лечилась в стационаре. Последний раз проходила курс стационарного лечения в 1985 г. включающий наряду с системной терапией внутрисуставное введение гидрокортизона (3-кратно в дозе 75 мг/инъекцию). Улучшения не было и внутрисуставные инъекции были прекращены.

При поступления во время ходьбы прихрамывает на правую ногу, правый коленный сустав значительно увеличен в объеме, шаровидной формы. Движения ограничены в пределах 70^o. При пальпации определяется напряженный синовиит, баллотация надколенника. Проявляется гипертрофия мышц правого бедра. Основания: клинические данные, биохимические анализы крови и мочи, термо- и сцинтиграфии.

Диагноз: ревматический артрит, 2а стадия, активность процесса 2, функциональная недостаточность первой степени. Наиболее показательный параметр термографии (дельта Т мax 1,7^oC) (дельта Т max эта разница температур между здоровым и больным суставами).

17.04.86 проведена пункция правого коленного сустава и удалено 180 мл желтоватой мутной синовиальной жидкости. 22.04.86 удалено еще 30 мл прозрачной, желтоватой жидкости и введено 1,0 мл препарата липосомной формы ГК (по примеру 2).

Больная выписана через 4 дня (28.06.86). Больная отмечает отсутствие болей в суставе и утренней скованности в движениях, походка безболезненная. Объективно: коленный сустав не увеличен, движения увеличились до 180 - 40^o, баллотации надколенника не отмечается дельта Т 0,4^o.

Больная при наблюдении в течение двух лет не отмечала новых приступов обострения артрита.

Выписка из истории болезни (наблюдение 2).

Больной Ю. (N истории бол. 2202) 1923 года рождения, поступил в отделение терапии 5.02.86. Болеет 5 лет. Неоднократно находился на стационарном лечении. Последнее ухудшение наступило за 2,5 месяца до гостпитализации во время прохождения курса лечения нестероидными препаратами бруфеном и вальтореном. Жалобы при поступлении на боли в левом коленном суставе, утренняя скованность движений. Объективно: сустав увеличен в объеме, болезненный и отмечается баллотация надколенника. Движения в суставе ограничены, болезненны, крипитации и деформаций не определяется.

Биохимические и иммунологические анализы подтверждают активность ревматического процесса, термография дельта Т-1,8^o.

Диагноз: Ревматоидный артрит 1б стадии, активность процесса 2, функциональная недостаточность первой степени.

13.02.86 в левый голеностопный сустав введен препарат липосомной формы ГК (0,5 мл по примеру 2). К моменту выписки (28.02.86) боли в суставе исчезли, движения в суставе в полном объеме, безболезненны. Припухлость не определяется. При термографии асимметрии не выявлено. Через год (21.03.87) в связи с обострением активности основного заболевания при новой атаке ревматического артрита, но в правом коленном суставе введена липосомная форма ГК (20 мг/инъекцию, по примеру 2). Боли исчезли на третий день, а все симптомы острого воспаления купировались к 6 дню после инъекции.

В обоих случаях внутрисуставная терапия липосомной формой ГК приводила к выраженному и четко регистрируемому эффекту после однократной внутрисуставной инъекции в дозе 20 мг ГК в течение 5-7 дней (во втором случае задержка с выпиской была связана с лечением сердечно-сосудистой недостаточности).

Выписка из истории болезни (наблюдение 3).

Больная С. (N истории бол. 292) 1941 г. рождения, поступила в терапевтическое отделение 17.01.86 с жалобами на припухлость, боль и ограничение движения в правом коленном и левом локтевом суставах с выраженной утренней скованностью движений. Считает себя больной с ноября 1985 года. При поступлении обнаружена припухлость правого коленного и левого локтевого суставов, суставы болезненны при пальпации, активные и пассивные движения в них резко ограничены из-за болей.

В соответствии с клиникой и результатами анализов, крови и мочи установлен диагноз: Ревматоидный артрит 2а стадия, активность процесса 2, функциональная недостаточность 2 степени.

Термография дельта Т max над коленным суставом 1,7^o и над локтевым 1,3^o. 29.01.86 проведена пункция правого коленного сустава и введено 1,0 мл липосомной формы ГК (20 мг/инъекцию, по примеру 2). Уже 31.01.86 больная отметила значительное снижение болей в области коленного сустава, так как больная сильно страдала от болей в левом локтевом суставе, она настаивала на введении препарата и в локтевой сустав. 12.02.86 в левый локтевой сустав введено 0,3 мл липосомной формы ГК (6 мг/инъекцию, по примеру 2).

При выписке 15.02.86 больная отметила отсутствие болей в обоих суставах, суставы при пальпации безболезненны, движения в них в полном объеме. Термография: над коленным суставом отсутствует асимметрия, над локтевым - 0,2^o. При наблюдении в течение двух лет больная не отмечала рецидивов.

В качестве дополнительной иллюстрации приводим данные об эффективности внутрисуставного лечения больных ревматоидным артритом обычной формой гидрокортизона и липосомной формой (по примеру 2).

Изобретение поясняется таблицей.

По сравнению с известным предлагаемый состав липосом имеет ряд существенных преимуществ.

1. Обладает длительным противовоспалительным действием, купируя после локальной (например внутрисуставной) однократной инъекции все симптомы острого ревматического артрита, что не достигается ни одним из известных препаратов.

2. Предлагаемый состав полностью купирует острое воспаление в суставе после однократной внутрисуставной инъекции, в то время как даже наиболее близкий к нему (прототип) купирует воспаление только на 5 суток.

3. Противовоспалительный эффект препарата проявляется в дозе в 3 5 раз меньшей таковой обычно применяемых форм мелкокристаллического гидрокортизона, учитывая же тот факт, что курсовая доза обычно применяемого гидрокортизона составляет 150 500 мг, то можно говорить о 7 25-кратном снижении применяемой дозы.

4. Ввиду такой низкой дозы предлагаемый препарат практически лишен побочных реакций и осложнений.

Предлагаемый состав для купирования асептического воспаления разработан в ЦНИРРИ Минздравмедпрома лаборатории биотехнологии, руководимой автором изобретения, и прошел клинические испытания с положительными результатами в Киевской областной больнице на основании разрешения Минздрава УССР N 6.03-17/504 от 29.07.85. и готов для внедрения в широкую медицинскую практику.

Использование: в медицине, для лечения локальных воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, синовит, тендовагинит и др. Сущность изобретения: липосомный состав содержит, мас.%: дипальмитоилфосфатидилхолин 1,6 - 2,0, холестерин 0,2 - 0,25, гидрокортизон-ацетат 1,8 - 2,2 и физиологический раствор - остальное. Использование нового состава позволяет путем однократной внутрисуставной инъекции с дозой гидрокортизона-ацетата 6 - 20 мг купировать в течение 3 - 7 дней все симптомы асептического воспаления - боль, опухоль, покраснение, локальное повышение температуры. Снижение дозы гидрокортизона-ацетата обуславливает отсутствие побочных реакций и осложнений на введение гидрокортизона. 1 табл.

Липосомный состав для купирования асептического воспаления, содержащий дипальмитоилфосфатидилхолин, холестерин, гидрокортизона ацетат и физиологический раствор, отличающийся тем, что он содержит указанные ингредиенты в следующем соотношении, мас.

Дипальмитоилфосфатидилхолин 1,6 2,0
Холестерин 0,2 0,25
Гидрокортизона ацетат 1,8 2,2
Фиологический раствор Остальноед