СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ЭНТЕРОВИРУСОВ В ПАТОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к ветеринарной и медицинской вирусологии, в частности, к способам обнаружения и идентификации микроорганизмов и может быть использовано для обнаружения и идентификации энтеровирусов в патологическом материале.

Известен способ обнаружения энтеровирусов, включающий отбор патологического материала, его посев на культуру тканей с регистрацией цитопатогенного действия с последующей идентификацией в реакции торможения роста с добавлением специфических сывороток [1] Способ сложен в осуществлении, требует значительных затрат времени, высокая квалификации персонала; точность способа ограничена тем, что не все вирусы обладают цитопатогенным действием.

Предлагается способ обнаружения и идентификации энтеровирусов, включающий отбор патологического материала, центрифугирование в деионизированной воде с последующей очисткой поверхностно-активными веществами и использование надосадочной жидкости в качестве антигена в реакции агглютинации частиц латекса, сенсибилизированных иммуноглобулинами против группы родственных вирусов.

Способ осуществляется следующим образом.

Патологический материал разводят деионизированной водой, центрифугируют, в надосадок добавляют поверхностно-активные вещества, центрифугируют, а надосадок используют в качестве антигена в реакции агглютинации частиц латекса, сенсибилизированных видоспецифическими иммуноглобулинами по методу Ю.В. Лукина (1990).

Пример 1. У 30 больных с клиническим диагнозом "инфекция, вызванная энтеровирусами", отбирают патологический материал 27 проб фекалий, 3 пробы - спиномозговой жидкости. Патологический материал разводят деионизированной водой в соотношении фекалии 1 5, спиномозговую жидкость 1 2, центрифугируют при 4000 5000 об/мин в течение 15 20 мин. Из надосадочной жидкости отбирают 0,20 0,22 мл в конические пластмассовые пробирки с крышкой объемом 0,5 см³, добавляют поверхностно-активное вещество (200 220 мг) взбалтывают в течение 2 3 мин, оставляют на 60 70 мин при комнатной температуре. Повторно центрифугируют при 3000 4000 об/мин. в течение 5 мин, надосадок используют в качестве антигена в реакции латекс-агглютинации. Частицы латекса сенсибилизируют смесью иммуноглобулинов к трем серотипам вируса полиомиелита (I, II, III) по методу Ю.В.Лукина (1990). В качестве контроля используют несенсибилизированные частицы латекса. Параллельно проводят обнаружение вируса известным способом: посев патологического материала на культуру тканей с регистрацией цитопатогенного действия.

Результаты РАЛ представлены в табл. 1.

Как видно из табл. 1, в 25 случаях получена положительная, в 2 случаях отрицательная, в 3 случаях сомнительная реакция. Положительные результаты РАЛ в 100% случаев совпадают с положительными результатами известного способа.

Пример 2. У 48 здоровых детей в возрасте 5 6 лет, посещающих детский комбинат, берут пробы фекалий для исследования предлагаемым способом. Пробы обрабатывают, как в примере 1.

Результаты представлены в табл. 2.

Как видно из табл. 2, у 10 детей результат РАЛ положительный, а у 6 детей сомнительный. Наличие положительного результата указывает на миграцию диких или вакцинных вирусов: в возрасте 5 лет дети прививаются вакциной Себина. По литературным данным, носительство энтеровирусов колеблется от 2 до 30% в зависимости от возраста, сезонности и эпизоотической обстановки что совпадает с полученными результатами.

Пример 3. Вакцину Себина в количестве 0,2 0,22 мл помещают в конические пластмассовые пробирки с крышкой объемом 0,5 см³, добавляют поверхностно-активное вещество (200 220 мг), взбалтывают в течение 2 3 мин, оставляют при комнатной температуре на 60-70 мин, после чего центрифугируют при 3000 4000 об/мин в течение 5 мин. Частицы латекса сенсибилизируют иммуноглобулинами, приготовленными к трем серотипам вируса полиомелита I, II, III и к вирусам Коксаки и Эхо.

Результаты представлены в табл. 3.

Как видно из табл. 3, результаты титрования вакцины Себина с латексом, сенсибилизированным иммуноглобулинами к различным полиовирусам, указывают на наличие общих антигенов у этой группы вирусов и на возможность группового выявления энтеровирусов с помощью одного препарата латекса, сенсибилизированного иммуноглобулинами к любому из серотипов или смесью иммуноглобулинов к различным полиовирусам.

Пример 4. У больного в возрасте 4 лет с клиническим диагнозом "полиомиелит", подтвержденным лабораторными исследованиями, берут пробу фекалий. Исследования проводят предлагаемым способом, как в пример 1.

Результаты представлены в табл. 4.

Как видно из табл. 4, исследование материала в наибольшем титре 1/40 дает положительную реакцию с латексом, сенсибилизированным иммуноглобулинами к типу III вируса полиомиелита, что указывает на возможность идентификации полиовируса при использовании 5 препаратов сенсибилизированного латекса.

Предлагаемый способ имеет следующие преимущества по сравнению с известным способом:
1. Простота осуществления исключается многоступенчатость исследований (подготовка вируссодержащего материала, посев на культуру тканей, инкубирование, пересев), отпадает необходимость в соблюдении стерильности, дополнительном оборудовании и реактивах.

2. Быстрота результат можно получить в течение 3-4 часов (известный способ 2 4 недели).

3. Точность.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:
1. Н. М. Златковская Энтеровирусные заболевания у детей Л. Медицина, 1976.

Назначение: ветеринарная и медицинская вирусология, для обнаружения и идентификации энтеровирусов в патологическом материале. Сущность изобретения: патологический материал последовательно центрифугируют в деионизированной воде и с медицинским активированным углем, а надосадочную жидкость используют в качестве антигена в реакции латекс-агглютинации.

Способ обнаружения и идентификации энтеровирусов в патологическом материале, включающий постановку реакции латекс-агглютинации, отличающийся тем, что патологический материал центрифугируют последовательно в деионизированной воде и с медицинским активированным углем, а надосадочную жидкость используют в качестве антигена.