СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИТРОЗОАЛКИЛМОЧЕВИН Российский патент 1997 года по МПК G01N21/78 

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способам количественного определения нитрозоалкилмочевин общей формулы RN(NO)CONR', где R C_nH_2n+1; , и может быть использовано в онкологической практике с селекционном химическом мутагенезе в биохимических лабораториях клиник и селекционных учреждений, а также контрольно-аналитических лабораториях.

Известны фотометрические способы определения нитрозоалкилмочевин по нитрозогруппе на основе реакции азосочетания [1,2]
Недостатком данных способов является низкая избирательность, связанная с тем, что определению мешают другие нитрозосоединения и нитриты.

Наиболее близким к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату является известный способ количественного определения нитрозометилмочевины по остатку мочевины как структурной основы молекулы нитрозоалкилмочевин, заключающийся в нагревании пробы на кипящей водяной бане в течение 27 минут в водно-спиртовом растворе, содержащем 10 14 мас. серной кислоты, диметилглиоксим и тиосемикарбазид с последующим фотометрированием окрашенного раствора при 527 нм [3]
Однако известный способ разработан для определения нитрозометилмочевины как представителя 1-нитрозо-1-алкилмочевин, он недостаточно чувствителен, особенно по отношению к представителям 1-нитро-1,3-диалкилмочевин.

Заявляемое техническое решение направлено на создание способа, позволяющего повысить чувствительность определения нитрозометилмочевины, ее моноалкильных аналогов и представителей 1-нитрозо-1,3-диалкилмочевин. Поставленная задача достигается тем, что в способе, заключающемся в отборе пробы, нагревании ее в присутствии 10 14 мас. серной кислоты, диметилглиоксима и тиосемикарбазида на кипящей водяной бане в течение 27 минут, нагревают анализируемую пробу всех представителей нитрозоалкилмочевин в присутствии 20 30 мас. серной кислоты, анализируемую пробу представителей 1-нитрозо-1,3-диалкилмочевин нагревают в присутствии 20 30 мас. серной кислоты в течение 10 15 минут.

Обнаруженные условия фотометрического определения нитрозоалкилмочевин путем изменения концентрации серной кислоты (с 10 14 до 20 30 мас.) и времени нагревания при анализе представителей 1- нитрозо-1,3-диалкилмочевин ( с 27 минут до 10 15 минут) приводят к неожиданному техническому результату - повышению чувствительности способа, и повышению стабильности окрашенного продукта что позволяет говорить о новых свойствах совокупности существенных признаков и соответствии заявляемого решения критерию "Изобретательский уровень".

Пример 1. Количественное определение 1-нитрозо-1-метилмочевины
(HMM) (R CH₃; R' H).

Около 0,1 г. (точная навеска) НММ растворяют в мерной колбе вместимостью 500 мл и доводят водой до метки (раствор А). 5 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 200 мл и доводят объем водой до метки (раствор Б). 2мл раствора Б помещают в градуированную пробирку вместимостью 10 мл, прибавляют5 мл 1% раствора диметилглиоксима в 96% этиловом спирте и 2,5 мл 0,025% тиосемикарбазида а 38% растворе серной кислоты, перемешивают. Пробирку выдерживают в течение 27 минут на кипящей водяной бане, охлаждают до комнатной температуры. Параллельно проводят опыт со стандартным раствором нитрозометилмочевины и контролем. Измеряют оптическую плотность при 527 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.

Расчет количественного содержания нитрозометилмочевин проводят по формуле

где C₀-концентрация стандартного образца нитрозометилмочевины, г/мл;
D и D₀ оптические плотности анализируемого и стандартного растворов;
Y₁ и Y₂ объемы первого и второго разведений, мл;
P объем раствора А, взятого для второго разведения, мл;
а навеска нитрозометилмочевины, г.

Результаты количественного определения приведены в таблице 1.

Пример 2. Количественное определение 1-нитрозо-1-этилмочевины
(НЭМ) (R C₂H₅; R' H).

Около 0,1 г НЭМ (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 500 мл. Далее поступают, как указано в примере 1.

Результаты количественного определения приведены в таблице 1.

Пример 3. Количественное определение углеводного производного НММ
(НММ-Y) (R CH₃;
Около 0,1 г НММ-Y (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 500 мл. Далее поступают, как указано в примере 1.

Результаты количественного определения приведены в таблице 1.

Пример 4. Количественное определение 1-нитрозо-1,3-диметилмочевны (НДММ) (R,R' CH₃).

Около 0,1 г НДММ (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 500 мл и доводят объем водой до метки (раствор А). 5 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл и доводят объем водой до метки (раствор Б). Далее поступают, как указано в примере 1 с той разницей, что пробирку с реакционной смесью выдерживают на кипящей водяной бане 13 минут. Результаты количественного определения приведены в таблице 1.

Пример 5. Количественное определение 1 нитро-1,3-диэтилмочевины
(НДЭМ) (R, R' C₂H₅).

Около 0,15 г НДЭМ (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 500 мл. Далее поступают, как указано в примере 4.

Результаты количественного определения приведены в таблице 1.

Данные, подтверждающие влияние концентрации серной кислоты и времени нагревания на чувствительность способа, представлены в табл. 2 и 3. Сравнительные характеристики предлагаемого и известного способов приведены в таблице 4. Как видно из табл. 4, чувствительность предлагаемого способа превышает чувствительность прототипа в 1,3 1,8 раз.

Использование: аналитическая химия, а именно способы количественного определения нитрозоалкилмочевин общей формулы RN(NO)CONHR', где R = C_nH_2n+1, и , и может быть использован в онкологической практике и селекционном химическом мутагенезе - в биохимических лабораториях клиник и селекционных учреждений, а также контрольно-аналитических лабораториях. Сущность изобретения: отбирают анализируемую пробу, помещают ее в предварительно приготовленный водно-спиртовой раствор, содержащий 20 - 30 мас. проц. серной кислоты, диметил-глиоксим и тиосемикарбазид. Полученный раствор нагревают и фотометрируют в полосе поглощения с максимумом при 527 нм. При определении нитрозоалкилмочевин общей формулы C_nH_2n+11N(NO)CONHC_nH_2n+1, нагревают раствор в течение 10 - 15 мин. По способу достигается высокая чувствительность определения и стабильность окраски продукта реакции. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Способ количественного определения нитрозоалкилмочевин, заключающихся в том, что отбирают анализируемую пробу, вводят ее в водно-спиртовый раствор, содержащий серную кислоту, диметилглиоксим и тиосемикарбазид, полученный раствор нагревают и фотометрируют в полосе поглощения с максимумом при 527 нм, отличающийся тем, что концентрация серной кислоты в фотометрируемом растворе составляет 20 30 мас. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что определение 1-нитрозо-1,3-диалкилмочевин общей формулы RN(NO)CONHR', где R и R' - C_nH_2n+1, проводят при нагревании в течение 10 15 мин.