СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЕДИНОГО БРУЦЕЛЛЕЗНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ РА, РСК И РДСК Российский патент 1997 года по МПК A61K39/10 G01N33/569 C12N1/20 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК.

Известен способ получения антигена бруцеллезного с использованием технологии культивирования на плотной питательной среде в четвертях.

Однако существующий способ изготовления обладает рядом недостатков:
культивирование ведется на дорогостоящей, сложной в изготовлении плотной питательной среде;
время культивирования до 72 ч;
необходимость использования большого количества стеклянной посуды;
потребность в большом количестве площадей и оборудования;
опасность возможного контакта персонала с возбудителем бруцелл.

Длительность и многооперационность процесса делает изготовление бруцеллезного антигена трудоемким и конечный продукт из-за высокой себестоимости является неконкурентноспособным.

Целью изобретения является повышение качества, снижение себестоимости и исключение возможности контакта обслуживающего персонала с бруцеллезной культурой.

Цель достигается изменением технологии изготовления антигена, а именно: культивирование проводится на жидкой питательной среде в биореакторах с дальнейшей очисткой и концентрированием культуры на ультрафильтрационных колонках. При этом уменьшается количество операций и исключается возможный контакт обслуживающего персонала с бруцеллезной культурой. Время изготовления антигена сокращается до 24 ч.

Способ осуществляется в биореакторе следующим образом.

Культивирование проводят в биореакторе на жидкой питательной среде следующего состава,
Перевар Хоттингера 25
Глицерин 1
Глюкоза 1
NaC 0,5
Дрожжевой экстракт сухой 0,5
или нативный 15 20
Вода водопроводная до 100
В готовой питательной среде содержится аминного азота 145 160 мг% pH 6,8 7,1.

Жидкая питательная среда стерилизуется фильтрацией через фильтр пластины типа СФ. Глубинное культивирование в биореакторе осуществляется по следующему полученному нами в результате экспериментов алгоритму управления:
температура культивирования 37±0,5^oC;
концентрация водородных ионов (pH) в пределах 6,8 7,2;
уровень парциального давления растворенного в культуральной жидкости кислорода на фазе приспособления 20 25 pO₂ нас;
фаза логарифмического роста 40 45 pO₂ нас
стационарная фаза 30 35 pO₂ нас.

Поддержание технологических параметров осуществляется следующими управляющими воздействиями:
температура термостатной водой;
pH подачей титрантов;
кислорода подачей воздуха на аэрацию и изменением скорости вращения мешалки.

Выращенную на жидкой питательной среде в биореакторе культуру Brucella abortus шт. 19 далее концентрируют в 6 7 раз при помощи ультрафильтрационных колонок. К концентрату в биореакторе добавляют 0,5% фенолизированный физраствор с pH 7,0 7,2 до половины первоначального объема с целью отделения микробных клеток от остатков питательной среды. После перемешивания культуры ее концентрируют вторично в 3 4 раза до концентрации 180 200 млрд/см³, затем инактивируют в биореакторе при 80±1^oC в течение 60 мин при постоянном перемешивании и сливают в стерильные 16 л баллоны, которые выдерживают в холодильнике при температуре 2 6^oC не менее 10 сут. Разведение концентрированной суспензии проводят стерильным 0,5% фенолизированным физраствором.

Активность антигена в РА устанавливают по национальной бруцеллезной агглютинирующей сыворотке против Бруцелла абортус, содержащей в 1 мл 1000 МЕ антител.

Активность антигена в РСК устанавливается при его титровании по квадратной схеме с национальной стандартной бруцеллезной агглютинирующей сывороткой.

Сравнительные данные по используемому и предлагаемому способам изготовления единого бруцеллезного антигена приведены в таблице.

Преимуществом предлагаемого способа является повышение качества, снижение себестоимости, исключение контакта обслуживающего персонала с бруцеллезной культурой за счет использования глубинного культивирования в биореакторах на жидкой питательной среде с последующей очисткой и концентрированием на ультрафильтрационных колонках.

Использование: биотехнология, промышленное производство единого бруцеллезного антигена. Сущность изобретения: способ изготовления единого бруцеллезного антигена включает культивирование штамма 19 в глубинных условиях в жидкой питательной среде, содержащей перевар Хоттингера, глицерин, глюкозу, NaCl, дрожжевой экстракт и воду. Концентрирование и очистку выросшей бакмассы проводят на ультрафильтрационной установке при помощи аппаратов разделительных с использованием 0,5% фенолизированного физраствора, а инактивацию антигена - в биореакторе при температуре 80^oC 60 минут. При этом длительность процесса сокращается с 72 до 24 ч. Способ изготовления единого бруцеллезного антигена позволяет повысить качество и снизить себестоимость конечного продукта. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Способ изготовления единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК, включающий культивирование штамма Brucella abortus 19, отделение и концентрирование выросших бактериальных клеток с последующим их инактивированием и суспендированием в фенолизированном физиологическом растворе, отличающийся тем, что культивирование проводят в глубинных условиях в жидкой питательной среде, а отделение и концентрирование на ультрафильтрационных колонках. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что культивирование проводят на питательной среде состава, об.

Перевар Хоттингера 25
Глицерин 1
Глюкоза 1
NaCl 0,5
Дрожжевой экстракт сухой 0,5
или дрожжевой экстракт нативный 15 20
Вода водопроводная До 100а