ШТАММ РОТАВИРУСА ПТИЦ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ДИАГНОСТИКУМОВ Российский патент 1997 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при производстве антигена и иммунной сыворотки для постановки реакции иммуноферментного анализа (ИФА) с целью лабораторной диагностики ротавирусной инфекции.

В настоящее время в зарубежной практике известно три серотипа ротавирусной инфекции птиц: Iy 1, Iy 3, ch 1. Большинство штаммов, выделенных у кур относятся к третьему серотипу (2).

У птиц заболевание может протекать субклинически или с выраженными клиническими признаками. Клинически инфекция характеризуется диареей, отсутствием аппетита, угнетением и дигидратацией. Симптомы заболевания неотличимы от диареи других этиологий. Наличие других инфекционных возбудителей осложняет течение болезни, что затрудняет проведение лабораторной диагностики заболевания.

На сегоднящний день в зарубежной практике известны следующие штаммы ротавирусов птиц: "ch 1", "ch 2", "hSU-79 c-36 "(3).

В настоящее время в отечественной ветеринарной практике нет штамма, пригодного для производства антигена и иммунной сыворотки для постановки ИФА с целью лабораторной диагностики ротавирусной инфекции птиц.

Целью изобретения является получения нового штамма ротавируса птиц, отвечающего всем требованием для производства диагностикумов и представляющего собой свободный от контаминации вирусный материал, обладающий высокой биологической и антигенной активностью (титр вируса 10^6,0 - 10^6,5 ТЦД_50/мл) способного титроваться в культуре клеток.

Штамм выделен от птиц 40 50-дневного возврата с признаками диареи. Электронномикроскопическими исследованиями установлено, что вирус имеет сферическую форму, вирионы состоят из плотной гексогональной сердцевины и двойного капсида наружного и внутреннего с диаметром 70 75 нм и относится к РНК, содержащим вирусам сем. Reoviridae.

Внутренний капсид имеет икосоэдрическую форму и сотсоит из клиновидных капсомеров. Наружный касид в негативно окрашенных препаратах имеет вид тонкого ровного ободка с плохо различимой структурой. Внешний вид вирусных частиц напоминает колесо с широкой ступицей, короткими спицами и четко очерченным ободком. Для культивирования и титрования штамма ротавируса птиц использовали первично трипсинизированную культуру клеток почек куриных эмбрионов, а также перевиваемую культуру клеток МА 104(1). Для заражения цыплят использовали 0,1 мл. вируссодержащего материала, который вводили перорально.

Штамм вызывает в организме зараженных цыплят слабо выраженную клиническую и патологоанатомическую картину заболевания, что свидетельствует о патогенности его в отношении цыплят.

Активность вируса определяют в культуре клеток МА-104, который прошел пять пассажей и стабильно воспроизводился в титре 10^6,0- 10^6,5 ТЦД_50/мл. Специфичность ЦПД проверяли в реакции нейтрализации со специфической гипериммунной кроличьей сывороткой. Устойчивость штамма к воздействию хлороформа и эфира определяли путем титрации до и после обработки его с указанными жирорастворителями (2).

Ротавирус сохраняет инфекционность при pH 3,0, нечувствителен к хлороформу и эфиру, но лабилен при -50^oC в присутствии IM р-ре MgCl₂.

В лиофилизированном состоянии штамм вируса сохраняет свои биологические и антигенные свойства при хранении в условиях холода в течение двух лет (хранение куриных эмбрионов не вызывает их гибели).

Для получения специфической иммунной сыворотки к ротавирусу птиц заражали кроликов путем гиппериммунизации их концентрированным антигеном по схеме: внутривенно по 2 мл антигена в 1, 7, 35, 42 дни жизни. В 1 и 35 дни антиген в равном объеме с полным адъюватом Фрейнда одновременно вводили внутривенно по 0,1 мл. В 10 точках на спине животного.

Забор крови проводили на 419 день от начала иммунизации. Полученную сыворотку исследовали на активность и специфичность в реакции нейтрализации.

Штамм "ВНИВИП" ротавитруса птиц адаптирован, поддерживается в культуре клеток МА-104. При этом штамм сохраняет свою активность и антигенную активность, что является свидетельством его стабильности.

Использование: ветеринарная вирусология и биотехнология. Сущность изобретения: получен новый штамм ротавируса птиц, отвечающий всем требованиям для производства диагностикумов и представляющий собой свободный от контаминации вирусный материал, обладающий высокой биологической и антигенной активностью, способный титроваться в культуре клеток. Штамм депонирован в Государственной коллекции вирусов под N 2320.

Штамм ротавируса птиц ГКВ N 2320 для производства диагностикумов.