СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/487 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для выявления злокачественных новообразований разной локализации на ранних стадиях их развития.

Прямые методы диагностики злокачественных новообразований, к которым относятся эндоскопические, рентгенологические, радиоизотопные, томографические, трудоемки, труднодоступны и дорогостоящи, т.к. требуют специального оборудования и штата специалистов.

Кроме того, из-за возникающей в ряде случаев невозможности видеть часть органа, пораженного опухолью, возникает вероятность ошибки в установлении диагноза.

Прямые методы морфологических исследований, пунктатов, эксудатов, секретерной жидкости дают более высокую точность диагностики. Однако для получения исследуемых образцов используются методы "слепой" биопсии или операция. Все это вызывает особые трудности в диагностике и возможно только в том случае, если опухоль предварительно обнаружена.

Косвенные методы диагностики это лабораторные методы анализа образцов слюны, сыворотки крови, желудочного сока, мочи, спинномозговой жидкости. При косвенных методах анализа результат измерений отражает чаще всего существование вторичного процесса, являющегося следствием развивающегося опухолевого процесса, в период, когда клиническая картина не вызывает сомнений у клинициста.

Косвенные методы анализа могут быть использованы в качестве экспресс-методов при массовом осмотре, однако они не являются высокоспецифичными.

В качестве прототипа авторами выбран известный способ диагностики злокачественных новообразований, основанный на иммунологическом методе, который является наиболее близким по сущности к предлагаемому способу.

Известный способ диагностики осуществляют следующим образом: к образцу исследуемой сыворотки крови больного добавляют иммунодиагностику, затем в течение 48 ч осуществляют инкубацию образца и по наличию положительной реакции, которую дает присутствующий в исследуемом образце негармональный пептид, а именно α-фетопротеин, судят о злокачественном новообразовании печени.

Альфа-фетопротеин относится к группе эмбриональных белков, т.е. тех белков, которые вырабатываются в процессе внутриутробного развития плода. Особенно активно он вырабатывается на ранних стадиях беременности. К моменту родоразрешения синтез альфа-фетопротеина прекращается и в крови новорожденного его количество снижается до крайне незначительных величин. В организме здорового взрослого его количество также ничтожно мало он репрессивен.

У больных раком печени содержание альфа-фетопротеина в крови резко возрастает, что дает возможность диагностировать заболевание. Альфа-фетопротеин в высоких концентрациях может содержаться в сыворотке крови больных с гепатоцеллюлярной карциномой (первичная гепатома) и терратомой.

Умеренная концентрация этого белка в сыворотке крови больного может быть обусловлена и незлокачественным заболеванием печени.

К недостаткам данного способа диагностики относится его неспецифичность, поскольку альфа-фетопротеин может быть обнаружен в сыворотке крови больного как при злокачественном новообразовании в печени, так и при гепатите, а также его ограниченность он применяется только для диагностике патологии печени.

Кроме того, данный способ диагностики требует специальных иммунодиагностикумов и достаточно длителен (48 ч).

Задачей изобретения является повышение специфичности диагностики злокачественных новообразований разной локализации и упрощение процесса диагностического анализа.

Поставленная задача решается известным способом диагностики злокачественных новообразований, включающем исследование слюны или сыворотки крови, согласно изобретению, образцы слюны или сыворотки крови предварительно подвергают воздействию излучения с длиной волны 640 нм в течение 2 мин, а затем снимают спектр поглощения в области 650-750 нм и при наличии в спектре полос поглощения с длиной волны 666 и/или 710, 730 нм диагностируют злокачественное новообразование.

Отличием предлагаемого способа диагностики от известного является то, что образцы слюны или крови предварительно подвергают воздействию излучения с длиной волны 640 нм в течение 2 мин, а затем снимают спектр поглощения в области 650-750 нм и при наличии в спектре полос поглощения с длиной волны 666 и/или 710, 730 нм диагностируют злокачественное новообразование.

Наличие полос поглощения с длиной волны 666 и/или 710, 730 нм обусловлено присутствием в слюне или сыворотке крови больного со злокачественным новообразованием различной локализации пигмента фитохрома и/или его промежуточных форм, который по своим свойствам аналогичен фитохрому растений и бактерий.

Фитохром, присутствующий в слюне или сыворотке крови больного, имеет две формы P_r и P_fr. Форме фитохрома P_r принадлежит полоса поглощения с длиной волны 666 нм, а форме P_fr полоса поглощения с длиной волны 730 нм. Промежуточная форма фитохрома имеет полосу поглощения 710 нм.

Предварительное облучение слюны или сыворотки крови излучением с длиной волны 640 нм в течение 2 мин необходимо в связи с тем, что, как показали экспериментальные исследования, биологические жидкости человека слюна и сыворотка светочувствительны и облучение приводит их в одинаковое для всех образцов фотостатическое состояние независимо от того освещения, при котором они находились до облучения.

Фитохром в слюне и сыворотке крови присутствует не только у больных со злокачественными новообразованиями, но и, как показали результаты исследований, у беременных. Поэтому настоящий способ диагностики не может быть применен для этой группы пациентов.

Анализ научно-технической и патентной информации показал, что предлагаемый способ диагностики злокачественных новообразований является новым и обладает изобретательским уровнем.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Из вены пациента в пробирку берут кровь в объеме 10-12 мл и отстаивают для получения сыворотки. Слюна берется в том же объеме. Полученные образцы слюны или сыворотки помещают в кюветы по 3 мл в каждую. Затем на образцы воздействуют излучением с длиной волны 640 нм в течение 2 мин, после чего измеряют спектр поглощения в области 650-750 нм и при наличии в спектре полос поглощения с длиной волны 666 и/или 710-730 нм судят о наличии злокачественного новообразования.

В качестве эталона сравнения используют кювету с дистиллированной водой. Использование в качестве эталона сравнения слюны или сыворотки здорового человека не представляется возможным, т.к. у различных пациентов спектральное поглощение биологических жидкостей различно, что вносит случайную ошибку.

С помощью предлагаемого способа были исследованы образцы слюны или сыворотки крови у 163 человек из групп 1, 2, 3.

1-я группа 72 человека со злокачественными новообразованиями первичными и метастазированными, уточненной и неуточненной локализации.

2-я группа 30 человек здоровых.

3-я группа 61 человек с другими заболеваниями.

Примеры 1, 3, 5. Предлагаемым способом исследованы образцы сыворотки крови у 31 человека из 1-й группы, 15 человек из 2-й группы и 30 человек из 3-й группы. Исследование включало предварительное воздействие излучения с длиной волны 640 нм в течение 2 мин на образцы сыворотки крови в объеме 3 мл, находящихся в кюветах, с последующим измерением спектра поглощения в спектральной области 650 750 нм.

Данные исследования приведены в таблице.

Примеры 2, 4, 6. Предлагаемым способом исследованы образцы слюны у 31 человека из 1-й группы, 15 человек из 2-й группы и 30 человек из 3-й группы, как в примерах 1, 3, 5.

Данные исследования приведены в таблице.

Примеры конкретного исполнения.

Пример 1. Больная Шерстнева А.А. 50 л. N 2146, поступила 17.06.88 г. У больной проводится дифференциальный диагноз между: 1. Бронхогенная киста? 2. Метастазированный рак легкого? 3. Рак правого легкого?
21.06.88 г. у больной из локтевой вены взята в сухую пробирку кровь 10 мл. Путем отстаивания получена сыворотка крови, 3 мл ее помещены в кювету спектрофотометра, измерен спектр поглощения в диапазоне 650-750 нм. Контроль
дистиллированная вода. В спектре поглощения облученной в течение 2 минут излучением с длиной волны 650 нм сыворотки крови отчетливо видны полосы поглощения: l = 730нμ9.

Лабораторное заключение у больной злокачественное новообразование. Окончательный клинический диагноз: С-г правого легкого.

Пример 2. Больная Липатова С.К. 55 лет. История болезни N 3091, поступила 19.09.87 г. Диагноз при поступлении: цирроз печени.

Из локтевой вены 03.09.87 взята кровь, путем отстаивания получена сыворотка крови, 3 мл которой с помощью пипетки помещали в кювету спектрофотометра. Сыворотку предварительно в течение 2 мин облучали излучением с длиной волны l = 640нμ9. А затем измеряли спектр поглощения в диапазоне 650 750 нм. В спектре поглощения сыворотки крови присутствовали полосы поглощения: с длиной волны 666 и 710 нм, которые принадлежат промежуточным формам фитохрома.

Лабораторное заключение у больной опухолевый процесс. Выписной диагноз: первичная В печени.

Пример 3. Больная Воробьева В.М. 49 лет. История болезни N 308. Поступила 21.01.88 г.

Переведена в онкодиспансер 25.03.88 г. История болезни ГОД N 814.

Диагноз при поступлении шейный лимфоденит.

Диагноз выписной: хронический лимфоденит.

У больной утром после полоскания рта в сухую пробирку было взято 15 мл слюны, которая после отстаивания в объеме 3 мл пипеткой была перенесена в кювету спектрофотометра.

После этого кювету со слюной облучали в течение 2 мин излучением с длиной волны 640 нм и затем измеряли спектр поглощения слюны в области 650 750 нм.

Результат исследования: в спектре поглощения слюны больной была выявлена полоса поглощения с длиной волны 730 нм.

На основании анализа спектра поглощения слюны дано лабораторное заключение у больной идет процесс злокачественной природы.

Диагноз онкодиспансера лимфагрануломатоз.

Пример 4. Больная Чугунова Е.С. 70 лет. История болезни N 1149.

Диагноз при поступлении пневмония, сопутствующее заболевание B в/доли правого легкого.

Диагноз выписной хроническая пневмония.

У больной утром после полоскания рта в сухую пробирку было взято 20 мл слюны, которая после отстаивания была перенесена пипеткой в объеме 3 мл в кювету спектрофотометра, затем в течение 2 мин облучали излучением с длиной волны 640 нм, после чего был измерен спектр поглощения слюны в области 650 - 750 нм.

Результаты исследования: полосы поглощения с длиной волны 666, 710, 730 нм в области спектра 650 750 нм отсутствуют.

Лабораторное заключение у больной нет злокачественного новообразования, так как полосы поглощения фитохрома и его промежуточных продуктов отсутствовали.

После тщательного клинического анализа и инструментального обследования больная выписана с диагнозом хроническая правосторонняя пневмония в стадии обострения.

Пример 5. Донор Киселев Т.П. 22 года.

У донора взята кровь из вены, получена сыворотка крови путем отстаивания, пипеткой помещена по 3 мл в кювету спектрофотометра. Затем кювету с сывороткой крови облучали излучением с длиной волны 640 нм.

Затем измеряли спектр поглощения сыворотки крови в диапазоне 650 750 нм. В полученном спектре полосы поглощения с длиной волны 666, 710, 730 нм отсутствуют.

Как видно из приведенных выше результатов исследования, предлагаемый способ диагностики по сравнению с известным способом диагностики позволяет диагностировать злокачественные новообразования разной локализации на различной стадии развития процесса.

Кроме того, предлагаемый способ осуществляют на доступном оборудовании, при этом длительность процесса значительно сокращена по сравнению с известным способом и исключено использование дорогих реактивов.

Использование: изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Предлагаемый способ включает предварительное облучение образцов слюны или сыворотки крови излучением с длиной волны 640 нм в течение двух минут, измерение спектра поглощения в области 650-750 нм, и по наличию в спектре поглощения с длиной волны 666 и/или 710,730 нм диагностируют злокачественное новообразование. Предлагаемый способ позволяет диагностировать злокачественное новообразование разной локализации на ранних стадиях развития онкопроцесса. 1 табл.

Способ диагностики злокачественных новообразований, включающий исследование слюны или сыворотки крови, отличающийся тем, что образцы слюны или сыворотки крови предварительно подвергают воздействию излучения с длиной волны 600 нμ в течение 2 мин, затем измеряют спектр поглощения в области 650-750 нμ и при наличии в спектре полос поглощения с длиной волны 666 и/или 710, 730 нμ диагностируют злокачественное новообразование.