Способ определения генеза желтухи Советский патент 1993 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и может быть использовано для дифференциальной диагностики желтух опухолевого и вирусного генеза.

Цель изобретения -упрощение способа и возможность экспресс-диагностики.

Поставленная цель достигается тем, что предлагаемый способ включает исследование сыворотки крови путем пропитывания ч ею фильтра из бумаги , для электрофореза диаметром 25-30 мм. В центр пропитанного таким образом фильтра наносят 0,01 мл азотной кислоты желтой от присутствия азотистой. При появлении в течение первой минуты в месте нанесения капли оттенков от красного до сиренево-фиолетового диагностируют вирусный гепатит, при появлении бирюзовой окраски-опухолевую желту- ху.

Изобретение основано на установлении того, что сыворотка крови и моча больных вирусными гепатитами и опухолевыми желтухами различным образом реагирует на азотную кислоту желтого цвета от присутствия азотистой. При вырусных гепатитах в центре фильтра, пропитанного биологической жидкостью больного, через 1-2 мин после нанесения 0,01 мл окислителя появляется окраска оттенков от красного до фиолетово-сиреневого. При опухолевой желтухе в центре нанесения капли моментально развивается окраска бирюзово-лазурного цвета, т.е. в любом случае наблюдается

00

ivD Ь.

ю

появление колец, расходящихся от центра к периферии, которые не смешиваются, т.к. идет постоянный форез. Реакцию следует читать в первые минуты (не позднее 5-6-й мин), ее скорость и интенсивность окраски колец зависит от концентрации фракций.

Таким образом, установлено, что дифференциальный диагноз желтухи опухолевого и вирусного генеза можно проводить по реакции биологической жидкости (сыворотка крови, моча) с азотной кислотой желтого цвета от присутствия азотистой.

Ранее азотная кислота с присутствием азотистой использовалась в лабораторной диагностике при исследовании мочи на би- лирубин - проба Гмелина, Реакция описана следующим образом: после нанесения смеси азотной и азотистой кислот вокруг капли образуются концентрические кольца: снаружи зеленое, затем кнутрй синее, фиолетовое, красное. Для желчных пигментов характерно зеленое. Хилизм реакции заключается в окислении билирубина до били- вердина.

В предлагаемом способе по истечении 8-10 мин после нанесения капли в реакцию включаются билирубин и другие пигменты, о чем свидетльствуют внешние круги зеленого и голубого цветов. Чтобы этого избежать, экспериментально подобраны объем исследуемого образца, окислителя, а также диаметр, фильтр и время чтения реакции.

Для анализа выбрана непроклеенная бумага для электрофореза с характеристиками: масс 1 кв.м. 245 ± 15 г, толщина 44 ±3 мкм, капиллярная всасываемость при поперечном направлении 80 ±7 мм, впиты- ваемость при погружений менее 2 с. Все характеристики приведены для воды. При анализе сыворотки крови приходилось учитывать, что она содержит крупные молекулы биологических соединений, в частности пигменты - цепи молекул, упакованные в особые упаковки. Поэтому, чтобы бумага пропитывалась сывороткой максимально, выбрано время, равное 10-15 мин. По истечении этого времени объем остаточной капли варьировал в пределах 0,02-0,15 мл, что зависело от состава сыворотки крови. При ; времени меньше 10 мин разброс был значительно большим (0,05-0,2 мл).

Объем 0,01 мл кислоты определен путем расчета, т.к. допустимый уровень содержания фракций известен.

Концентрация 9-8,5 МНМОз соответствует концентрированной кислоте. Коммерческая кислота имеет плотность 1,37-1,405 г/см и соответственно концентрацию 61- 68% при таких характеристиках пределы колебаний нормальности 8,95-8,52, Выбирают эти значения в пределах 9,0-8,5. Концентрация азотистой кислоты не определяется, поэтому указывается только цвет (желтая от

присутствия азотистой).

Выбранный объем окислителя 0,01 мл, при его нанесении на фильтр форезировал от центра на радиус 8 мм (соответственно диаметр 16 мм) за 5 мин, на 6-й мин этот круг

0 начинал сужаться, (улетучивалась вода). При нанесении этого же объема кислоты на фильтр, пропитанный дистиллированной водой, диаметр круга достигал 22 мм, а в отдельных случаях 30 мм. Т.к. объем и кон5 центрация были уже выбраны, то выбрали фильтр диаметром 25-30 мм.

При выборе объема исследуемого образца исходили из следующего: концентрация уробилина в крови очень низка. 5 мл

0 сыворотки крови в патологии могут содер-- жэть максимально 17,2 мкг и минимально, 5,2 мкг фракции -.уробилина, а 0,5 мл - 1,72-0,52 мкг. Это минимальное предельное количество сыворотки, определяемое чувст5 вительностью метода.

Для анализа большего объема сыворотки необходимо увеличивать диаметр фильтра и объем окислителя. Возрастает и время реакции.

0 Учитывая, что на. 7-8 мин в реакцию вступают пигменты-билирубин, биливер- дин, что приведет к появлению дополнительных колец, то чтение фореграммы с целью выделения истинных уробилинов бу5 дет затруднено. Сохранение диаметра фильтра и объема окислителя при увеличении объема сыворотки крови приведет только к увеличению объема невпитавшейся сыворотки. Т.к. авторы стремились сокра0 тить объем исследуемой сыворотки крови, то выбрали его равным 0,5 ± 0,05 мл.

В центр пропитанной таким образом бумаги наносится капля азотной кислоты желтого цвета от присутствия в ней азотистой и

5 по появлению концентрических колец последовательно: бирюзового, далее всех оттенков от красного до фиолетового и желтого (центре) всех вместе или какого-то одного, судят о присутствии всех или одной

0 из фракций.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

В центр фильтра из непроклеенной бумаги диаметром 25-30 мм на горизон5 тальном столике для равномерного пропитывания, находящемся в чашке Петри и предварительно смоченным дистиллирован- ной водой, наносится 0,5 мл исследуемой сыворотки крови. Фильтр пропитывается 10-15 мин, оставшаяся, невпитавшаяся сыворотка крови стряхивается, а фильтр помещается на горизонтальное стекло. В центр его наносится 0,01 мл азотной кислоты желтого цвета от присутствия азотистой. Азотная кислота в качестве окислителя вместо РеС1з взята, как наиболее сильный и практически бесцветный окислитель. Окраска развивается в первые же секунды. Появление на фильтре лазурной окраски (только одной) или с последующим кольцом всех оттенков красного и фиолетового цветов свидетельствуете наличии одной фракции D-уробили- на или D- и J-уробилина. Наблюдая реакцию в динамике (2-3 исследования с интервалом 7-10 дн) при постоянном присутствии отмеченных колец диагностируют опухолевую желтуху, при исчезновении кольца лазурной окраски вирусный гепатит, атипичная форма с холестатическим компонентом. При появлении на фильтре только колец с оттенками красного и фиолетового цветов - диагностируют вирусный гепатит, типичная форма. Отсутствие этих колец, наличие только желтого пятна свидетельствует о физиологической норме или полном восстановлении функции печени после перенесенного вирусного гепатита. Предлагаемый способ может быть использован как для дифференциальной диагностики, так и для ранней диагностики вирусных гепатитов в эпиднеблагоприятных регионах для скри- нинга.

Примеры конкретного использования даны в виде выписок из историй болезни.

Липидус Н.П. История болезни № 1379. Диагноз: при поступлении и выписной- вирусный гепатит, острая желтушная форма.

Для подтверждения диагноза взята кровь из вены для проведения унифицированных лабораторных исследований, в том числе предлагаемым способом. Фильтр, помещенный в чашку Петри, расположенную горизонтально, пропитывается 0,5 сыворотки крови в течение 1.0 мин. Оставшаяся сыворотка стряхивается. Фильтр помещается на стекло, в центр пипеткой наносится 0,01 мл, азотной кислоты цвета от присутствия азотистой. В первые же 30 с, на месте нанесения окислителя развивается фиолетовое пятно с сиреневыми вкраплениями, через 1 мин пятно растекается в виде кольца, а в центре появляется желтое пятно. Через 2 мин - все цвета более яркие, 5 мин картина та же, но сглаживается. На основании чтения фореграммы можно сказать, что данный образец сыворотки крови содержит фракцию J-уробилина и стеркобилин, что характеризует вирусный гепатит, типичное течение. Спектральный анализ показал присутствие J-уробилина (40%) и стеркобилина

(60%). На основании других лабораторных исследований и клинических данных, поставлен диагноз: вирусный гепатит, типичное течение, желтушная форма. 5Тихообразова А.В., 70 лет, история болезни Ns 1603

Диагноз при поступлении - механическая желтуха, желчно-каменная болезнь. Для биохимического исследования взя0 та кровь из вены, 0,5 мл сыворотки крови взято для исследования по предлагаемому способу. Этот объем пипеткой наносится на фильтр, расположенный в чашке Петри на горизонтальном столике, фильтр пропиты5 вается 10 мин. Остаток сыворотки стряхивается и фильтр помещается на стекло. В центр пипеткой наносится 0,01 мл азотной кислоты желтого цвета от присутствия азотистой. В первые же секунды в центре появ0 ляется лазурно-бирюзовое пятно и сиреневое кольцо вокруг. 2-я мин - внешнее сиреневое кольцо растет, пятно растекается лазурно-бирюзовым внутренним кольцом, в центре белое пятно (коагулировавший бе5 лок), 3 мин - картина много ярче. На 6-й мин во внешнем круге после сиреневого кольца намечается бирюзовое кольцо, что расценивается как продукт окисления фракции J- уробилина при его избытке. Чтение

0 реакции дало следующий результат: данный образец сыворотки крови содержит две фракции уробилина D и J. Спектральный анализ показал уровень фракции Ь-уроби- лина 38%, J-уробилина 52%. На основании

5 этих и других клинических данных больной поставлен диагноз рак гепатодуоденальной зоны, больная переведена в хирургический стационар.

0 Демин Н.И. История болезни № 1593 Диагноз: вирусный гепатит. Больному (перед выпиской) из вены для контрольного анализа взята кровь. Из нее 0,5 мл взято для исследования предложенным способом. На

5 фильтр, находящийся в чашке Петри на горизонтальном столике наносится 0,5 мл сыворотки крови. Фильтр пропитывается в течение 12 мин, невпитавшуюся сыворотку крови удаляют на край чашки. Фильтр поме0 щается на горизонтальное стекло, в центр наносится 0,01 мл окислителя. В первые же 30 с появляется белое пятно (коагулирующий белок), только к концу 3-й мин на месте нанесения кислот развивается слабая жел5 тая окраска, что свидетельствует о низкой концентрации стеркобилина и полном восстановлении функции печени после перенесенного гепатита. Спектральный анализ подтвердил полученный результат. Больной выписан.

Таким образом, в первой и третьей сыворотках крови анализ на фракционный состав уробилина подтвердил клинический диагноз, а во второй было показано онкологическое заболевание, больная переведена в специальный стационар.

Всего с помощью предлагаемого способа обследовано 20 сывороток крови здоровых людей, 75 больных вирусными гепатитами в разные сроки болезни, с типичным цитолитическим и античным хо- лестатичесхим течением болезни и 50 сывороток крови больных с желтухой опухолевого происхождения. Во всех случаях диагноз подтверждался.

Способ отличается простотой исполнения, экспрессностью, не требует специаль

ного оборудования, подготовки, обеспечивает скрининг.

Формула изобретения Способ определения генеза желтухи путем биохимического исследования крови, о т л и чающийся тем, что, с целью упрощения способа дифференцированного опухолевого и вирусного генеза при экспрессном обследовании в эпидемических очагах, сыворотку крови наносят на гигроскопическую белую бумагу, затем наносят каплю 61-68 %-ной азотной кислоты и при появлении в течение первой минуты окраски от красной до сиренево-фиолетовой определяют желтуху вирусного генеза, а при появлении в центре нанесения кислоты бирюзовой окраски -опухолевого генеэа.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для дифференциальной диагностики желтух опухолевого и вирусного генеза. Цель изобретения - упрощение способа дифференциальной диагностики желтух опухолевого и вирусного генеза. Сущность изобретения состоит в исследовании сыворотки крови, которой про- питывается фильтр из бумаги для электрофореза, диаметром 25-30 мм, в центр его наносится 0,01 мл азотной кислоты с присутствием азотистой и при появлении в течение первой минуты на месте нанесения окислителя окраски оттенков от красного до сиренево-фиолетового диагностируют вирусный гепатит, а при появлении в центре нанесения бирюзовой окраски - опухолевую желтуху. Изобретение предназначено для экспресс диагностики в эпидемических очагах. ел